Soluplastin

Tromboplastina clcica para a determinao do Tempo de Protrombina ou Tempo de Quick em um s estgio SIGNIFICADO CLNICO O fenmeno da coagulao pode ser desencadeado por uma via extrnseca (leso tissular) ou por uma via intrnseca (contato do sangue com epitlios distintos do vascular normal). A determinao do Tempo de Protrombina ou Tempo de Quick uma prova global para avaliar a coagulao extrnseca, sendo sensvel a: fator II ou protrombina, fator V ou proacelerina, fator VII ou proconvertina e fator X ou Stuart-Prower. Portanto, a determinao se aplica a: - estudos de rotina nas anlises pr-cirrgicas; - deteco de alteraes nos nveis de um ou mais fatores envolvidos na via extrnseca; - controle da teraputica com anticoagulantes orais. FUNDAMENTOS DO MTODO Este ensaio se baseia na medida do tempo que um plasma calcificado demora para coagular, colocado a 37oC e na presena de um excesso de tromboplastina tissular e clcio. O mtodo no detecta deficincias de fatores da via intrnseca (VIII, IX, XI e XII). REAGENTE FORNECIDO Soluplastin: frascos contendo tromboplastina de crebro de coelho, cloreto de clcio para uma concentrao final de 0,0125 mol/l e cloreto de sdio para uma concentrao final de 0,1 mol/l. REAGENTE NO FORNECIDO gua bidestilada ou deionizada. INSTRUES PARA USO - Abrir o frasco quebrando o lacre metlico e retirando lentamente o tampo de borracha para evitar perdas do material. - Adicionar o volume de gua bidestilada ou deionizada indicado no frasco. Verificar que a temperatura da gua utilizada no seja maior que 37oC. - Tampar e agitar suavemente at obter uma suspenso homognea. Voltar a homogeneizar sempre que voltar a utilizar a suspenso. PRECAUES O reagente para uso diagnstico "in vitro". ESTABILIDADE E INSTRUES DE ARMAZENAMENTO Soluplastin fornecido: estvel sob refrigerao (2-10oC) at a data de vencimento indicado na embalagem. Soluplastin reconstitudo: sob refrigerao (2-10oC) estvel 5 dias a partir do momento de sua reconstituio. AMOSTRA Plasma a) Coleta: obter sangue cuidadosamente (evitando estase ou trauma) e colocar em um tubo com anticoagulante na proporo 9 + 1 exata (exemplo: 4,5 ml de sangue + 0,5 ml de anticoagulante). Caso seja utilizado o Anticoagulante TP de Wiener lab., so necessrias 7 gotas para 4,5 ml de sangue). Misturar suavemente. Centrifugar e separar o plasma antes de 30 minutos. b) Aditivos: para obter o plasma deve-se utilizar Anticoagulante TP de Wiener lab ou citrato de sdio 0,130 mol/l. c) Substncias interferentes conhecidas: - as contaminaes, visveis ou no, so causa de tempos falsamente prolongados; - a presena de heparina ou EDTA invalida os resultados; - hemlises visveis dificultam a medio foto-ptica dos resultados. Referncia bibliogrfica de Young para efeitos de drogas neste mtodo. d) Estabilidade e instrues de armazenamento: o plasma deve ser mantido sob refrigerao (2-10oC) at o momento de efetuar o ensaio. No caso de no se processar dentro das 4 horas contadas desde a obteno, a amostra deve ser congelada (a -20oC); deste modo, pode ser conservada durante um ms. Este ltimo procedimento deve ser realizado com rapidez, assim como o descongelamento (submergindo em banho a 37oC) anteriormente determinao. MATERIAL NECESSRIO - Tubos de hemlise. - Pipetas e micropipetas para medir os volumes indicados. - Banho-maria a 37oC. - Cronmetro. - Fonte luminosa, para observao do cogulo.

PROCEDIMENTO 1- Colocar o plasma (desconhecido ou controle) em banhomaria a 37oC durante 2-3 minutos (no mais de 10 minutos). 2- Em um tubo de hemlise, colocar 0,2 ml de Soluplastin reconstitudo e preincubar a 37oC durante 2-3 minutos (no mais que 10 minutos). 3- Pipetar 100 ul do plasma preincubado e adicionar rapidamente ao tubo contendo 0,2 ml de Soluplastin, disparando simultaneamente o cronmetro. 4- Manter o tubo dentro do banho e prximo a uma fonte de luz. Antes do tempo de coagulao estimado, retirar o tubo do banho, inclinar suavemente uma ou duas vezes

861235005 / 00 Pg. 3 de 4

por segundo e parar o cronmetro no momento da apario do cogulo. 5- Calcular o tempo mdio de coagulao da determinao por duplicata para cada plasma (desconhecido ou controle). Se a diferena entre as duplicatas de uma mesma amostra for maior que 5%, aconselha-se repetir o procedimento desprezando os valores anteriores. Em caso de utilizar um instrumento de medio, devem ser seguidas as instrues do fabricante.

INTERPRETAO DOS RESULTADOS Os resultados podem ser expressos de diversas formas: 1- Tempo de protrombina ou Tempo de Quick em segundos. 2- Percentual de Atividade Protrombnica com relao a um plasma normal (100% de atividade): para isto, deve-se traar a curva de atividade protrombnica de um pool de plasmas frescos normais. Curva de calibrao Em tubos de hemlise, preparar 5 diluies (cada uma em duplicata) de um pool de pelo menos 3 plasmas normais ou Plasma Control normal , do seguinte modo: Diluies 1:1 1:2 50 0,3 0,3 1:3 33,3 0,3 0,6 1:4 25 0,2 0,6 1:8 12,5 0,2 1,4

LIMITAES DO PROCEDIMENTO Vide Substncias interferentes conhecidas em AMOSTRA. Outras causas de resultados errneos so: - Extrao defeituosa de sangue venosa. - Variao na relao anticoagulante/amostra ou na concentrao de citrato utilizada afetam os Tempos de Quick pelo que recomendado controlar a dose de anticoagulante utilizado na toma da amostra. - A preincubao no passo 2 do PROCEDIMENTO no deve exceder os 10 minutos indicados como o limite mximo. Por outro lado, conveniente que o reagente reconstitudo seja retirado do refrigerador imediatamente antes de iniciar a prova e guardado novamente ao finaliz-la, uma vez que a exposio por vrias horas a temperatura ambiente deteriora o reagente produzindo o prolongamento do tempo de protrombina. PERFORMANCE a) Reprodutibilidade: processando duplicatas das mesmas amostras no mesmo dia, obtiveram-se os seguintes dados: X (n = 20) 11,5 seg 21,2 seg D.P. 0,4 seg 0,6 seg C.V. 3,5% 2,8%

b) Comparao com mtodos de referncia: processando amostras diferentes com Soluplastin e com outro mtodo tomado como referncia, observa-se: Reagente Soluplastin Referncia X (n =60) 13,2 seg 12,8 seg D.P. 0,3 seg 0,3 seg C.V. 2,3% 2,3%

Percentual de Atividade (%) 100 Pool plasmas normais (ml) Soluo fisiolgica (ml) 0,5 -

Determinar o Tempo de Protrombina para cada diluio, empregando o PROCEDIMENTO descrito. Em um papel milimetrado, plotar os resultados em um sistema de coordenadas. Colocar os Tempos de Protrombina em segundos sobre o eixo das ordenadas e os Percentuais de Atividade Protrombnica sobre o eixo das abscissas. Cada laboratrio deve traar sua prpria curva de calibrao, correspondente ao lote de reagentes em uso. Repetir com cada novo lote de reagentes. 3- Rao Internacional Normatizada (R.I.N.) Para seu clculo, dever utilizar-se a tabela de valores em anexo ao kit. MTODO DE CONTROLE DE QUALIDADE Plasma Control normal - patolgico. VALORES DE REFERNCIA O intervalo de valores obtidos em pacientes normais oscila entre: - Tempo de Protrombina ou Tempo de Quick: 10 - 14 seg - Porcentagem de Atividade Protrombnica: 70 - 100% Recomenda-se que cada laboratrio estabelea seus prprios intervalos ou valores de referncia. Para pacientes sob tratamento com antivitaminas K estabeleceu-se uma faixa teraputica que se pode expressar como: - Percentual de Atividade Protrombnica = 25 - 35% - R.I.N.: 2,4 - 2,5
861235005 / 00 Pg. 4 de 4

APRESENTAO - Kit para 100 determinaes (10 x 2 ml) (Cd. 1705001). - Kit para 10 x 20 determinaes (10 x 4 ml) (Cd. 1705005). - Kit para 320 determinaes (8 x 8 ml) (Cd. 1705003). REFERNCIA - Quick, A.J. - Fisiologa y Patologa de la Hemostasis- Ed. El Ateneo, Buenos Aires (1952). - Araldi, H.T. et al. - Primer Reactivo Nacional Argentino de Referencia de Tromboplastina de Cerebro Humano - Acta Bioquim.Cln. Latinoam. XVI/1:131 (1982). - Comit de Expertos de la O.M.S. en Patrones Biolgicos Inf. N 28: Normalizacin de la Vigilancia del Tratamiento Anticoagulante (oral) - Serv. Inf. Tc. N 610:49-56 (1977). - Comit de Expertos de la O.M.S. en Patrones Biolgicos Inf. N 31: Requerimientos para Tromboplastinas y Plasmas usados en la terapia anticoagulante oral - Serv. Inf. Tc. N 658:202-223 (1981). - Suer Casadevall, F. - Nuevas Normas Internacionales para la Expresin del Tiempo de Quick- Anlisis Clnicos X/ 40:240-245 (1985). - Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests", AACC Press, 4th ed., 2001.

Wiener lab.
2000 Rosario - Argentina
UR011002