UNINASSAU

NÚCLEO DE SAÚDE
CURSO DE FÁRMACIA

PORTIFÓLIO
RELATÓRIO SEMANAL DE ATIVIDADES DESENVOLVIDAS
ALUNO (A) Jadon Jorge Oliveira da Silva
MÊS/ANO 09/11/2021
DESCRIÇÃO Análises clínicas
PERÍODO DO
ESTÁGIO 14/ 09/2021 ATÉ 14/12/2021

EMPRESA Uninassau
CURSO FARMÁCIA

Portfólio referente ao dia 09/11/2021

Avaliações das enzimas Hepáticas TGO e TGP

1.Coleta sanguínea com tubo de heparina para análise bioquímica de marcadores hepáticos e centrifugação
para obtenção do plasma;
2. Preparação do reagente de uso NaOH:

3,2 mL do reagente + 6,8 mL de água destilada;

TGO/AST:

3. Em um tubo de ensaio adicionar 0,25mL de TGO substrato. Incubar a 37° por 2 minutos;
4.No mesmo tubo adicionar 0,05mL da amostra a ser analisada e incubar por 60minutos a 37°C.
5. Adicionar 0,25mL do reagente de cor e esperar por 20 minutos em temperatura ambiente;
6. Depois, adicionar 2,5 mL de NaOH de uso. Misturar e aguardar 5 minutos;
7. Ver a absorbância em 505nm com filtro verde e zerar com água destilada;

Resultado: Ab = 0,078;
Reproduzir de em gráfico em regressão linear de acordo com a absorbância e concentração dos reagentes
padrão e ver a concentração do TGO/AST;

TGP/ALT:

8. Em um tubo de ensaio adicionar 0,25mL de TGP substrato. Incubar a 37° por 2 minutos;
9. No mesmo tubo adicionar 0,05mL da amostra a ser analisada e incubar por 30 minutos a 37°C.
10. Adicionar 0,25mL do reagente de cor e esperar por 20 minutos em temperatura ambiente;
11. Depois, adicionar 2,5 mL de NaOH de uso. Misturar e aguardar 5 minutos;
12. Ver a absorbância em 505nm com filtro verde e zerar com água destilada;
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Resultado: Ab = 0,100;
Reproduzir de em gráfico em regressão linear de acordo com a absorbância e concentração dos reagentes
padrão e ver a concentração do TGP/ALT;

NOTIFIQUE AQUI MÁQUINAS, APARELHOS E EQUIPAMENTOS OU INSTRUMENTOS

UTILIZADOS

Tubo de ensaio;
Lâmina e lamínula;
Tubo de coleta;
Gazes;
Garrote;
Seringa;
Algodão;
Pipeta automática;
Centrífuga;
Solução reagente n°1, 2 e 4, água destilada;
Banho Maria e;
Espectofotômetro.

Portfólio referente ao dia 13/11/2021

Análise de albumina

Procedimentos:

1.Coleta sanguínea com tubo sem anticoagulante da tampa vermelha para análise bioquímica de albumina
como marcador hepático, e centrifugação para obtenção do plasma;
2. Separar três tubos de ensaio: Branco, teste e padrão.
3. Por 1mL de reagente de cor nº 1 em cada um dos três tubos;
4. 0,01mL da amostra do soro apenas no tubo teste;
5. E, 0,01 mL do reagente padrão em seu referido tubo.
6. Depois de 2 a 10 minutos,determinamos a absorbância do teste e do padrão em 630 nm e zeramos com
o tubo branco.
7. Resultado se dá pelo cálculo: Albumina(g/dL)= Absorb. do teste/ Abosr. Padrão X 3,8
8. Resultado: P = 0,343 e Amostra = 0,308

0,308/0,343 x3,8 = 3,4g/dL

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NOTIFIQUE AQUI MÁQUINAS, APARELHOS E EQUIPAMENTOS OU INSTRUMENTOS

UTILIZADOS

Tubo de ensaio;
Tubo de coleta;
Gazes;
Garrote;
Seringa;
Algodão;
Pipeta automática;
Centrífuga;
Solução reagente n°1, padrão;e
Espectofotômetro.

Portfólio referente ao dia 16/11/2021

Análise de proteínas totais:

Procedimentos:

1.Marcar 3 tubos de ensaio: Branco (B), Amostra (A)e padrão (P):

2. Pipetar 2,5mL de biureto nos três tubos;
3. Pipetar 50mcL do padrão no tubo P;
4. Pipetar 50mcL da amostra no tubo A;
5. Homogeneizar e deixar em repouso por 10 minutos e ler a absorbância da amostra e do padrão em 545
nm usando o zero como branco.
6. proceder o seguinte cálculo a partir dos resultados:

Pt= Absorb. Amostra/ Absorb. padrão X 4

Resultado:
P= 0,180 e A= 0,333
0,333/0,180 x 4 = 7,4g/dL

NOTIFIQUE AQUI MÁQUINAS, APARELHOS E EQUIPAMENTOS OU INSTRUMENTOS

UTILIZADOS

Tubo de ensaio;
Tubo de coleta;
Gazes;
Garrote;
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Seringa;
Algodão;
Pipeta automática;
Centrífuga;
Solução reagente n°1, padrão;e
Espectofotômetro.

Portfólio referente ao dia 20/11/2021

Dosagem de colesterol total:

Procedimentos:

1.Coleta sanguínea com tubo sem anticoagulante da tampa vermelha para análise bioquímica;
2. Centrifugar e utilizar o soro como amostra para as próximas etapas:
3. Separa 3 tubos de ensaio para as seguintes frações: Amostra (A), Padrão (P) e Branco (B);
4. Adicionar 1mL do reagente em todos os tubos;
5. Adicionar 0,01mL do soro no tubo A e 0,01mL do padrão no tubo P;
6. Homogeneizar e incubar por 10 minutos a 20-25ºC ou por 5 minutos a 37ºC.
7.Medir a absorbância dos tubos A e P, mas antes zerando com o tubo B.
8. Realizar o seguinte cálculo:

Concentração= 200X Abs. Amostra/Abs. Padrão (mg/dL);

Referência para adultos < 190mg/dL

Resultado: A= 0,075
P= 0,094
0,075/0,094 x 200 = 159,5mg/dL

NOTIFIQUE AQUI MÁQUINAS, APARELHOS E EQUIPAMENTOS OU INSTRUMENTOS

UTILIZADOS

Tubo de ensaio;
Tubo de coleta;
Gazes;
Garrote;
Seringa;
Algodão;
Pipeta automática;
Centrífuga;
Solução reagente n°1, padrão;e
Espectofotômetro.

Glicose plasmática:

Procedimentos:
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1.Coleta sanguínea com tubo com anticoagulante.

2. Centrifugar e utilizar o soro como amostra para as próximas etapas:
3. Separa 3 tubos de ensaio para as seguintes frações: Amostra (A), Padrão (P) e Branco (B);
4. Adicionar 1mL do reagente em todos os tubos;
5. Adicionar 0,01mL do Padrão no tubo P e 0,01mL da amostra no tubo A;
6. Homogeneizar e incubar no banho-maria a 37º C durante 10 minutos.
7. Determinar a absorbância do teste e do padrão em 505nm e usar o branco para zerar;
8. Realizar o seguinte cálculo:

Concentração= 100X Abs. Amostra/Abs. Padrão (mg/dL);

Resultado: A= 0,235
P= 0,184
0,235/0,184x 200 = 127,mg/dL

NOTIFIQUE AQUI MÁQUINAS, APARELHOS E EQUIPAMENTOS OU INSTRUMENTOS

UTILIZADOS

Tubo de ensaio;
Tubo de coleta;
Gazes;
Garrote;
Seringa;
Algodão;
Pipeta automática;
Centrífuga;
Solução reagente n°1, padrão;e
Espectofotômetro.

Portfólio referente ao dia 23/11/2021

Preparação de meio de cultura:

1. Meio Brain Herat infusion broth: O Brain Heart Infusion (BHI – Infusão de cérebro coração) é
um meio líquido de utilização geral utilizado para cultura de microrganismos exigentes e não exigentes,
incluindo bactérias anaeróbias e aeróbias, a partir de inúmeros materiais clínicos e não clínicos.

Preparo

Pesou-se 0,555g para 15mL de água destilada. Em seguida homogeneizou-se com bastão e colocou-se
5mL em três tubos de ensaio. Depois, fechamos o tubo com algodão hidrofóbico e levamos à autoclave
para esterilização usando temperatura de 100°C por 30minutos.
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2.Meio triple sugar Iron Agar (TSI): Ágar Triplo Açúcar de Ferro (TSI Agar) é usado para a
diferenciação de bacilos entéricos gram-negativos baseados na fermentação dos carboidratos e produção
de sulfeto de hidrogênio.

Preparo: Pesou-se 0,950g para 15mL de água destilada. Em seguida homogeneizou-se com bastão e
colocou-se 5mL em três tubos de ensaio. Depois, fechamos o tubo com algodão hidrofóbico e levamos à
autoclave para esterilização usando temperatura de 100°C por 30minutos.

3. Meio eosina methylene blue (BEM): O EMB é um meio para diferenciação ligeiramente seletivo
utilizado para o isolamento e diferenciação de bacilos entéricos gram-negativos (enterobactérias e outros
bastonetes gram-negativos) provenientes de amostras clínicas

Preparo: Pesou-se 0,560g para 15mL de água destilada. Em seguida homogeneizou-se com bastão e
colocou-se 5mL em três tubos de ensaio. Depois, fechamos o tubo com algodão hidrofóbico e levamos à
autoclave para esterilização usando temperatura de 100°C por 30minutos.

4.Meio simmons Citrate Agar (SCA): Citrato de Simmons Ágar permite avaliar a utilização do citrato
pela bactéria em análise através de seu crescimento ou através da alcalinização do meio (mudança da
coloração esverdeada original para azulada).

Preparo: Pesou-se 0,350g para 15mL de água destilada. Em seguida homogeneizou-se com bastão e
colocou-se 5mL em três tubos de ensaio. Depois, fechamos o tubo com algodão hidrofóbico e levamos à
autoclave para esterilização usando temperatura de 100°C por 30minutos.

NOTIFIQUE AQUI MÁQUINAS, APARELHOS E EQUIPAMENTOS OU INSTRUMENTOS

UTILIZADOS

Tubo de ensaio;
Algodão Hidrofóbico;
Água destilada;
Autoclave;
Meios de cultura;
Pipeta automática;
Bastão para pesagem;
Balança analítica;

Portfólio referente ao dia 27/11/2021 e 30/11/2021

Realizamos exercícios de técnicas de semeio em placas de petri .

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Esgotamento: Nela, a suspensão bacteriana (que é o líquido com o microrganismo) é espalhada de

forma aleatória em toda a placa, até que todo o material seja utilizado. Assim, é possível ter a certeza de
que haverá realmente um crescimento bem distribuído e que garantirá uma boa análise mais tarde.

Produção dos meios de cultura BHI e Macconkey:

1.Pesou-se 5,2g do meio BHI e diluiu-se em 100mL de água destilada.

2. Pesou-se 5,0g do meio Macconkey e diluiu-se em 100mL de água destilada.
3.Pôr na autoclave por 15 minutos em ½ Atm.
4. Distribuir na placa de petri e esperar solidificar;
5. Semear as amostras na placa;
6. Incubar a 37°C por 24h;

NOTIFIQUE AQUI MÁQUINAS, APARELHOS E EQUIPAMENTOS OU INSTRUMENTOS

UTILIZADOS

Tubo de ensaio;
Algodão Hidrofóbico;
Água destilada;
Autoclave;
Meios de cultura;
Pipeta automática;
Bastão para pesagem;
Balança analítica;

Portfólio referente ao dia 04/12/2021

Prova de identificação para gram positivos:

Após o teste de coloração de gram a próxima etapa a ser elaborada foi os testes de confirmação:

Foram observados o crescimento em respectivos meios:

1.Meio BHI e Muller hinton- Crescimento positivo;

2. Meio macconkey- Crescimento negativo;
3. Meio Agar sangue- presença de Beta hemólise.

A partir desses resultados conclui-se que a cepa bacteriana é de fato uma gram positiva, restando agora
realizar as seguintes etapas para diferenciação das mesmas.

Provas para confirmação de staphylococcus:

- Prova da catalase;
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- Prova de coagulase;
- Sensibilidade a novobiocina; e
- Tesste em Ágar manitol.

Testes reproduzidos em aula:

Prova da catalase:

Fez-se uma coleta a partir de uma placa de petri contendo colônia usando um alça bacteriológica e
esfregou-se numa lâmina. Em seguida, pingou-se uma gota de peróxido de hidrogênio em cima da lâmina.
Logo em seguida foi observado a presença de formação de bolhas, isso se explica pela possibilidade da
cepa staphylococcus aureus de degradar H2O2 em água e oxigênio.

Técnicas para identificação de streptococcus:

Catalase;
Hidrólise do Hipurato;
Prova de CAMP;
Hidrólise da Esculina;
Tolerância a Caldo Salgado (NaCl 6,5%);
Sensibilidade à Optoquina;
Sensibilidade à Bacitracina.

Realizado em sala:

Prova da catalase: Onde o resultado, quando negativo, é indicação de streptococcus.

NOTIFIQUE AQUI MÁQUINAS, APARELHOS E EQUIPAMENTOS OU INSTRUMENTOS

UTILIZADOS

Tubo de ensaio;
Algodão Hidrofóbico;
Água destilada;
Autoclave;
Meios de cultura;
Pipeta automática;
Bastão para pesagem;
Balança analítica;
Cepas bacterianas;

Portfólio referente ao dia 07/12/2021

Preparação e incubação de meio para testes e com gram negativas:

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Com um alça de drigalski fizemos a incubação nos meios TSI, citrato e Levine.

1.Meio TSI: Meio diferencial utilizado no processo de bacilos gram negativos (BGN) fermentadores da
glicose (enterobactérias).

2.Meio citrato: O Ágar Citrato Simmons é utilizado para diferenciar os microrganismos em um ambiente
laboratorial com base na utilização de citrato. Também é útil para identificar bactérias que têm o citrato
como sua principal fonte de energia. Apesar de sua eficácia, o Ágar Citrato Simmons não serve para
diagnosticar doenças ou outras condições em seres humanos.

3.Meio Levine: O Agar Eosina Azul de Metileno (EMB LEVINE)é um meio de cultura para isolamento e
diferenciação de enterobactérias em amostras clínicas.

NOTIFIQUE AQUI MÁQUINAS, APARELHOS E EQUIPAMENTOS OU INSTRUMENTOS

UTILIZADOS

Tubo de ensaio;
Algodão Hidrofóbico;
Água destilada;
Autoclave;
Meios de cultura;
Pipeta automática;
Bastão para pesagem;
Balança analítica;
Cepas bacterianas;

Portfólio referente ao dia 07/12, 11/12 e 14/12

Interpretação nos resultados das colônias bacterianas incubadas em placa com Agar Macconckey:

Os que fermentam a lactose tornam a cor rosa ou avermelhada e os que não fermentam apresentam-se
incolor.
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Fermentação Rápida da lactose:

E.coli: Brilho metálico em meios diferenciais e colônias achatadas e não-viscosas.

Enterobacter: Colônias elevadas,sem brilho,crescimento mais viscoso.

Klebsiella: Crescimento mucóide muitoviscoso.

Fermentação lenta da lactose:

Serratia e citrobacter

Lactose não fermentada:

Shigella spp.: Nenhuma formação de gás apartir da dextrose.

Salmonellaspp.: Formação de ácido e gás apartir de dextrose.

Proteus: Rápida hidrólise da ureia (odor de amônia).

Interpretação no meio TSI

É um dos meios mais clássico dos sistemas de identificação, porém necessita de provas adicionais.
Tem a capacidade de avaliar a bactéria que fermenta ou não, glicose, lactose, sacarose, produzir ou não
H2S e produzir ou não gás carbônico.

Coloração e outras características após o tempo de incubação:

1.Púrpura/amarelo é característico de fermentação apenas da glicose (lactose e sacarose negativo), indica

meio alcalino. Suspeita de Shigella spp e Serratia;

2.Amarelo/amarelo é característico de fermentação da glicose + lactose e/ou sacarose (2 ou 3 açúcares),

indica meio ácido. Suspeita de E. coli, Enterobacter spp e klebsiella spp;

3.Presença de fissuras, rupturas ou bolhas no meio é característico de presença de gás (CO2);

4.Presença de precipitado negro indica H2S positivo. Suspeita de Proteus Mirabilis e Salmonela spp.

Interpretação no meio Citrato

Usualmente utilizado para identificar por meio de separação os grupos E.coli, quando negativo,
das citrobacter, quando positivo, pois, as bactérias que metabolizam o citrato alcalinizam o meio deixando
o pH básico do meio, que antes apresentava-se verde passa a ficar azul devido ao indicador azul de
bromotimol.
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Interpretação no meio Levine

O Agar Levine (BEM) é um meio pouco seletivo para investigação e diferenciação de

Enterobacterias fermentadoras e não fermentadoras de lactose em alimentos, produtos diários e amostras
clínicas. É utilizado para analise de amostras de importância sanitária quanto para presença de coliformes
fecais.

CARGA HORÁRIA SEMANAL: 10 HORAS

REALIZAÇÃO DO ESTÁGIO-HORÁRIOS:
DE 3ª de 18h às 22 h
SÁBADO: de 13h às 19 h

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Supervisor da empresa Visto do Professor da disciplina