APTT Hemostasis Ref.

502

Princpio

O reagente contendo ativador plasmtico (cido elgico) desencadeia o mecanismo de coagulao
da via intrnseca atravs da ativao do fator XII (Hageman), que forma um complexo com o
cininognio de alto peso molecular (HMWK) e com a pr-calicreina (PK). O fator XII ativado atua
sobre o fator XI gerando o fator XIa que na presena de fosfolpides e clcio transforma o fator IX em
uma enzima ativa (fator IXa), que ativa o fator VIII, formando o complexo IXa-fosfolpide-VIIIa que
ativa o fator X. Esse fator ativado transforma a protrombina em trombina que atua sobre o fibrinognio
gerando fibrina. A formao de fibrina macroscopicamente demonstrada pelo aparecimento de um
cogulo.
O TTPA realizado incubando o plasma citratado com o reagente contendo ativador e fosfolpides.
Aps a adio de clcio, faz-se a medio do tempo de formao do cogulo.

Reagentes

Reagente 1 - Armazenar entre 2 8 C. Pronto para uso.

Reagente 2 - Armazenar entre 2 8 C. Contm azida sdica. Pronto para uso.

Precaues, cuidados especiais e interferncias:

Ver Instrues de Uso.

Amostra

Usar plasma colhido em citrato trissdico anidro 109 mmol/L (3,2%).
Manter as amostras entre 2 - 24 C e realizar o TTPA at 4 horas aps a coleta.

Critrios para Coleta da Amostra

1. Obter o sangue por puno venosa e evitar garroteamento prolongado, hemlise, formao de
bolhas e aspirao de lquido tissular (fator lll). A agulha deve penetrar diretamente na veia na
primeira tentativa (puno venosa no traumtica). O sangue deve fluir livremente sem que seja
necessrio aplicar demasiada fora ao mbolo. No realizar o TTPA em amostra cuja puno for
difcil (puno venosa traumtica).

2. Coletar a amostra com seringa de plstico e centrifugar em tubos de plstico. O uso de material de
vidro no siliconizado ativa os fatores da coagulao e reduz falsamente o TTPA. Aps remover a
agulha, utilizar a poro central da amostra na seringa, deixando as pores anterior e posterior para
outros testes.

3. No caso de sistema de coleta a vcuo, usar tubo de plstico ou vidro siliconizado. Ao realizar coleta
somente para testes de coagulao, coletar duas amostras. A primeira em um tubo sem
anticoagulante ou em tubo contendo citrato (tampa azul) que deve ser desprezada. A segunda
amostra coletada em tubo contendo citrato (tampa azul) ser utilizada para a realizao dos testes.
No caso de coleta mltipla, a amostra para testes de coagulao dever ser obtida aps a coleta de
amostra em tubo sem anticoagulante e antes da coleta em tubo contendo EDTA.

4. Misturar 9 partes de sangue com 1 parte de citrato ou 3 mL de sangue e 1 gota de Trombstab
(Labtest Ref. 45). Homogeneizar 3 ou 4 vezes por inverso suave.
No usar oxalato, pois o Fator V muito sensvel a este anticoagulante.

5. Em pacientes que apresentam hematcrito maior que 55% a relao entre os volumes de sangue e
de anticoagulante deve ser ajustada para garantir a exatido do resultado. Para calcular o volume de
anticoagulante necessrio em funo do hematcrito e do volume de sangue, utilizar a frmula que se
segue:

Volume de anticoagulante (mL) =0,00185 x volume de sangue (mL) x (100 hematcrito)

Exemplo: Para um hematcrito de 60% usar 0,22 mL de citrato e completar para 3,0 mL com sangue.
Para usar Trombstab (Labtest Cat. 45), adicionar 2 gotas a 0,5 mL de gua e usar na proporo
indicada pelo clculo.

6. Centrifugar at 1 hora aps a coleta a 3000 rpm ou 1500 g durante 15 minutos. No necessrio
remover o plasma do tubo. Manter o tubo tampado at a execuo do teste para evitar mudana do
pH da amostra, que pode interferir nos resultados.

7. Manter as amostras entre 2 - 24 C e realizar o TTPA at 4 horas aps a coleta.

APTT Hemostasis Ref. 502

Caso exista possibilidade de congelamento rpido, o plasma, separado das clulas, pode ser
congelado a 20 C negativos por 2 semanas ou a 70 C negativos por 6 meses. Sugerimos congelar o
material em alquotas de 0,5 mL e, para evitar evaporao do material durante o perodo de
armazenamento, utilizar frascos adequados para congelamento (criotubos). As amostras devem ser
descongeladas rapidamente a 37 C e testadas imediatamente.

Procedimento

Procedimento manual
1. Realizar o teste utilizando tubos de vidro rigorosamente limpos.
2. A temperatura do banho-maria deve estar entre 36 - 38 C.
3. Pr-aquecer o Reagente 2 (20 mmol/L) a 37 C.
4. Incubar a 37 C, 0,1 mL do plasma a ser medido (controle ou paciente) por no mnimo um minuto e
no mximo 10 minutos.
5. Adicionar 0,1 mL do Reagente 1, homogeneizar e incubar a 37 C por 3 a 5 minutos (tempo de
ativao). Para obter resultados reprodutveis o tempo de ativao deve ser padronizado para todas
as amostras.
6. Adicionar 0,1 mL do Reagente 2 (previamente aquecido a 37 C) e disparar simultaneamente o
cronmetro. Misturar suavemente e manter no banho-maria a 37 C por 15 a 20 segundos.
7. Remover o tubo e inclin-lo sucessivamente em intervalos menores que 1 segundo e observar a
formao de um cogulo que interrompe a movimentao do lquido. Parar imediatamente o
cronmetro e registrar o tempo.

Intervalo de Referncia

Idade Intervalo (segundos)
2 meses 26,3 46,9
5 meses 26,1 45,9
Criana a partir de 6 meses e adultos 26,7 37,6

Referncia
Instrues de Uso: APTT Hemostasis Labtest Diagnstica

Obs.: No deixe de consultar as instrues de uso.


Fibrinogen Hemostasis Ref. 503

Princpio
Uma quantidade padronizada de trombina adicionada a uma amostra de plasma citratado diludo e
o tempo de coagulao medido. Na presena de concentrao elevada de trombina, o tempo de
coagulao do plasma citratado diludo inversamente proporcional concentrao de fibrinognio.
Para obter a concentrao de fibrinognio, o tempo de coagulao de um plasma comparado com
os tempos de coagulao de uma srie de diluies de um plasma contendo concentrao conhecida
de fibrinognio.

Reagentes
Reagente 1 - Tampo - Armazenar entre 2 - 8 C. Pronto para Uso. Reagente ligeiramente turvo.
Homogeneizar antes de usar.
eagente 2 - Trombina Bovina - Armazenar entre 2 - 8 C. R

Reagente 3 - Plasma Referncia - Armazenar entre 2 - 8 C. Ver concentrao de fibrinognio no
rtulo do frasco.

Preparo dos Reagentes

Reagente 2 - Trombina Bovina: adicionar o volume exato de gua tipo II indicado no rtulo. Recolocar
a tampa, homogeneizar suavemente e deixar em repouso durante 15 minutos entre 15 - 25 C.
No agitar por inverso ou vigorosamente. Antes de utilizar, homogeneizar suavemente. O reagente
reconstitudo estvel por 7 dias entre 2 8 C, 24 horas entre 15 - 30 C e 30 dias quando
congelado nas primeiras 4 horas aps reconstituio. Descongelar rapidamente a 37 C. No
recongelar.
Reagente 3 - Plasma Referncia: reconstituir com 1,0 mL de gua tipo II. Recolocar a tampa,
homogeneizar suavemente at a dissoluo completa. No agitar vigorosamente. Antes de utilizar,
homogeneizar suavemente. O plasma reconstitudo estvel 8 horas entre 2 - 8 C

Precaues, cuidados especiais e interferncias:
Ver Instrues de Uso.

Amostra
Usar plasma colhido em citrato trissdico anidro 109 mmol/L (3,2%). Manter as amostras entre 18 - 24
C e realizar o TP at 4 horas aps a coleta. No refrigerar o plasma, pois pode haver ativao do
Fator Vll pelo sistema Calicrena, reduzindo falsamente o TP.

Critrios para Coleta da Amostra
1. Obter o sangue por puno venosa e evitar garroteamento prolongado, hemlise, formao de
bolhas e aspirao de lquido tissular (fator lll). A agulha deve penetrar diretamente na veia na
primeira tentativa (puno venosa no traumtica). O sangue deve fluir livremente sem que seja
necessrio aplicar demasiada fora ao mbolo. No realizar a determinao da concentrao de
fibrinognio em amostra cuja puno for difcil (puno venosa traumtica).
2. Coletar a amostra com seringa de plstico e centrifugar em tubos de plstico. Aps remover a
agulha, utilizar a poro central da amostra na seringa, deixando as pores anterior e posterior para
outros testes.
3. No caso de sistema de coleta a vcuo, usar tubo de plstico ou vidro siliconizado. Ao realizar coleta
somente para testes de coagulao, coletar duas amostras. A primeira em um tubo sem
anticoagulante ou em tubo contendo citrato (tampa azul) que deve ser desprezada. A segunda
amostra coletada em tubo contendo citrato (tampa azul) deve ser utilizada para a realizao dos
testes. No caso de coleta mltipla, a amostra para testes de coagulao dever ser obtida aps a
coleta de amostra em tubo sem anticoagulante e antes da coleta em tubo contendo EDTA.
4. Misturar 9 partes de sangue com 1 parte de citrato ou 3 mL de sangue e 1 gota de Trombstab
(Labtest Ref. 45). Homogeneizar 3 ou 4 vezes por inverso suave.
5. Em pacientes que apresentam hematcrito maior que 55% a relao entre os volumes de sangue e
de anticoagulante deve ser ajustada para garantir a exatido do resultado. Para calcular o volume de
anticoagulante necessrio em funo do hematcrito e do volume de sangue, utilizar a frmula que se
segue:
Volume de anticoagulante (mL) =0,00185 x volume de sangue (mL) x (100 hematcrito)
Exemplo: Para um hematcrito de 60% usar 0,22 mL de citrato e completar para 3,0 mL com sangue.
Para usar Trombstab (Labtest Ref. 45), adicionar 2 gotas a 0,5 mL de gua e usar na proporo
indicada pelo clculo.

Fibrinogen Hemostasis Ref. 503

6. Centrifugar at 1 hora aps a coleta a 3000 rpm ou 1500 g durante 15 minutos. No necessrio
remover o plasma do tubo. Manter o tubo tampado at a execuo do teste para evitar mudana do
pH da amostra, que pode interferir nos resultados.
7. Manter as amostras entre 2 - 24 C e realizar a determinao da concentrao de fibrinognio at 4
horas aps a coleta. Caso exista possibilidade de congelamento rpido, o plasma, separado das
clulas, pode ser congelado a 20 C negativos por 2 semanas ou 70 C negativos por 6 meses.
Sugere-se congelar o material em alquotas de 0,5 mL e, para evitar evaporao do material durante
o perodo de armazenamento, utilizar frascos adequados para congelamento (criotubos). As
amostras devem ser descongeladas rapidamente a 37 C e testadas imediatamente.
8. A presena de cogulos implica rejeio da amostra.

Procedimento
Ateno: O R1 (Tampo) deve ser bem homogeneizado antes de preparar as diluies.
1. Diluir as amostras (controle ou teste) 1:10 [0,1 mL da amostra +0,9 mL do Tampo]
2. Realizar os testes em tubos de vidro rigorosamente limpos.
3. A temperatura do banho-maria deve estar entre 36 - 38 C.
4. Incubar 0,2 mL da amostra diluda por 4 a 6 minutos a 37 C.
5. Adicionar 0,1 mL do R2 (Trombina bovina) no aquecido e disparar simultaneamente o cronmetro.
6. Remover o tubo, inclin-lo sucessivamente em intervalos menores que 1 segundo e observar a
formao de um cogulo que interrompe a movimentao do lquido. Parar imediatamente o
cronmetro e registrar o tempo. Estimar a concentrao do fibrinognio, utilizando a curva de
calibrao.

Clculos
Curva de Calibrao
Preparar diluies do plasma de referncia de acordo com a seguinte tabela:
R 3 - Plasma Referncia
Diluio Volume (mL)
R1 Tampo (mL) Fator de diluio
1:5 0,1 0,4 10/5 =2,0
1:10 0,1 0,9 10/10 =1,0
1:15 0,1 1,4 10/15 =0,67
1:20 0,1 1,9 10/20 =0,5
1:30 0,1 2,9 10/30 =0,33
A diluio 1:10 do R3 (Plasma Referncia) representa 100% da concentrao designada para o
mesmo.
Os fatores de diluio indicados na tabela acima representam a relao entre a diluio 1:10 do R3
(Plasma Referncia) e as outras diluies.
Medir, em duplicata, os tempos de coagulao de cada diluio do R3 (Plasma Referncia) com
exatido de uma casa decimal (0,1 segundos) e obter a mdia dos tempos. Construir um grfico em
um papel log-log aplicando os valores de concentrao no eixo x (abscissa) e os tempos de
coagulao no eixo y (ordenada).
Para obter os valores de concentrao de pacientes e controles ler os resultados diretamente na
curva de calibrao.
Para facilitar a construo da curva de calibrao e os clculos dos resultados das amostras, utilizar
planilha: Fibrinogen Hemostasis Ref. 503, disponvel em <www.labtest.com.br>.

Desempenho do Sistema
Ver Instrues de Uso.

Intervalo de Referncia
Os intervalos devem ser usados apenas como orientao. Recomenda-se que cada laboratrio
estabelea, na populao atendida, seus prprios intervalos de referncia.

Fibrinognio: 150 a 350 mg/dL

Referncia
Instrues de Uso: Fibrinogen Hemostasis Labtest Diagnstica

Obs.: No deixe de consultar as instrues de uso.
PT Hemostasis Ref. 501

Princpio

A tromboplastina (fator tissular, fator III) desencadeia o mecanismo de coagulao da via extrnseca
formando, com o fator VII, um complexo estequiometricamente dependente do clcio. O fator VII
transformado em uma enzima ativa (fator VIIa), que atua sobre o fator X gerando o fator Xa e este
juntamente com fosfolpides do fator tissular, fator Va e clcio formam o Complexo Ativador da
Protrombina, que transforma a protrombina em trombina. Essa, por sua vez, atua sobre o fibrinognio
gerando fibrina. A formao da fibrina macroscopicamente demonstrada pelo aparecimento de um
cogulo. O TP o tempo necessrio para a formao de fibrina aps a mistura de tromboplastina,
plasma e clcio. Os resultados so obtidos atravs da comparao entre os tempos de coagulao do
plasma de pacientes e do plasma de referncia, representando a medida da atividade dos fatores do
complexo protrombnico (fatores II, V, VII, X).

Reagentes

Reagente 1 - Armazenar entre 2 8 C. Contm azida sdica.

Preparo do Reagente

Adicionar ao frasco do Reagente 1 o volume exato de gua tipo II indicado no rtulo do frasco.
Recolocar a tampa, homogeneizar suavemente e deixar em repouso temperatura ambiente (entre
15 - 25 C) durante 15 minutos.
Antes de utilizar, homogeneizar suavemente. No agitar por inverso ou vigorosamente.
O reagente reconstitudo estvel 7 dias entre 2 - 8 C, 8 horas a 37 C e 24 horas a temperatura
ambiente (entre 15 - 25 C). No congelar.

Precaues, cuidados especiais e interferncias:

Ver Instrues de Uso.

Amostra

Usar plasma colhido em citrato trissdico anidro 109 mmol/L (3,2%). Manter as amostras entre 18 - 24
C e realizar o TP at 4 horas aps a coleta. No refrigerar o plasma, pois pode haver ativao do
Fator Vll pelo sistema Calicrena, reduzindo falsamente o TP.

Critrios para Coleta da Amostra

1. Obter o sangue por puno venosa e evitar garroteamento prolongado, hemlise, formao de
bolhas e aspirao de lquido tissular (fator lll). A agulha deve penetrar diretamente na veia na
primeira tentativa (puno venosa no traumtica). O sangue deve fluir livremente sem que seja
necessrio aplicar demasiada fora ao mbolo. No realizar o TTPA em amostra cuja puno for
difcil (puno venosa traumtica).
2. Coletar a amostra com seringa de plstico e centrifugar em tubos de plstico. O uso de material de
vidro no siliconizado ativa os fatores da coagulao e reduz falsamente o TTPA. Aps remover a
agulha, utilizar a poro central da amostra na seringa, deixando as pores anterior e posterior para
outros testes.
3. No caso de sistema de coleta a vcuo, usar tubo de plstico ou vidro siliconizado. Ao realizar coleta
somente para testes de coagulao, coletar duas amostras. A primeira em um tubo sem
anticoagulante ou em tubo contendo citrato (tampa azul) que deve ser desprezada. A segunda
amostra coletada em tubo contendo citrato (tampa azul) ser utilizada para a realizao dos testes.
No caso de coleta mltipla, a amostra para testes de coagulao dever ser obtida aps a coleta de
amostra em tubo sem anticoagulante e antes da coleta em tubo contendo EDTA.
4. Misturar 9 partes de sangue com 1 parte de citrato ou 3 mL de sangue e 1 gota de Trombstab
(Labtest Ref. 45). Homogeneizar 3 ou 4 vezes por inverso suave.
No usar oxalato, pois o Fator V muito sensvel a este anticoagulante.
5. Em pacientes que apresentam hematcrito maior que 55% a relao entre os volumes de sangue e
de anticoagulante deve ser ajustada para garantir a exatido do resultado. Para calcular o volume de
anticoagulante necessrio em funo do hematcrito e do volume de sangue, utilizar a frmula que se
segue:
Volume de anticoagulante (mL) =0,00185 x volume de sangue (mL) x (100 hematcrito)
Exemplo: Para um hematcrito de 60% usar 0,22 mL de citrato e completar para 3,0 mL com sangue.
Para usar Trombstab (Labtest Cat. 45), adicionar 2 gotas a 0,5 mL de gua e usar na proporo
indicada pelo clculo.

PT Hemostasis Ref. 501

6. Centrifugar at 1 hora aps a coleta a 3000 rpm ou 1500 g durante 15 minutos. No necessrio
remover o plasma do tubo. Manter o tubo tampado at a execuo do teste para evitar mudana do
pH da amostra, que pode interferir nos resultados.
7. Manter as amostras entre 18 - 24 C e realizar o TP at 4 horas aps a coleta. No refrigerar o
plasma, pois pode haver ativao do Fator Vll pelo sistema Calicrena, reduzindo falsamente o TP.
Caso exista possibilidade de congelamento rpido, o plasma pode ser congelado a 20 C negativos
por 2 semanas ou 70 C negativos por 6 meses. Sugerimos congelar o material em alquotas de 0,5
mL e, para evitar evaporao do material durante o perodo de armazenamento, utilizar frascos
adequados para congelamento (criotubos). As amostras devem ser descongeladas rapidamente a
37 C e testadas imediatamente.
8. A presena de cogulos implica na rejeio da amostra.

Procedimento

1. Preparar o plasma de referncia atravs da mistura (pool) de plasmas citratados obtidos de, no
mnimo, 3 indivduos sadios. No usar plasmas de portadores de doenas hepticas ou de mulheres
grvidas ou em uso de contraceptivos orais. Deve-se obter o tempo do plasma de referncia para
cada lote de PT Hemostasis. As Boas Prticas de Laboratrio recomendam manter um registro dos
otes de PT Hemostasis e dos tempos do plasma de referncia. l
2. Realizar o teste em tubos de vidro rigorosamente limpos.
3. A temperatura do banho-maria deve estar entre 36,0 - 38,0 C.
4. Incubar 0,1 mL do plasma a ser medido (referncia, controle ou paciente) por no mnimo um minuto
e no mximo 10 minutos.
5. Adicionar 0,2 mL do Reagente 1 (previamente aquecido a 37 C) e disparar simultaneamente o
cronmetro. Misturar suavemente e manter no banho-maria por 9 segundos.
6. Remover o tubo, inclin-lo sucessivamente em intervalos menores que 1 segundo e observar a
formao de um cogulo que interrompe a movimentao do lquido. Parar imediatamente o
cronmetro e registrar o tempo.

Clculos

Os resultados podem ser obtidos na Tabela de Converso em Relao (R), Relao Normalizada
Internacional (RNI) e Atividade de Protrombina (A%).
Localizar na linha Pool de Referencia, onde os tempos de coagulao esto destacados em negrito,
o valor que mais se aproxima do tempo de coagulao obtido para o pool de referencia. Em seguida,
localizar na coluna correspondente o tempo de coagulao da Amostra Teste.
Os resultados da amostra teste, expressos em R, RNI e A% podem ser obtidos na mesma linha em
que se localiza o tempo em segundos da amostra teste, nas 3 ltimas colunas da tabela.
A R e a RNI tambm podem ser calculadas usando as seguintes equaes:

referencia de pool do segundos em Tempo
paciente do plasma do segundos em Tempo
R =

RNI =R
ISI


Intervalo de Referncia
Atividade de Protrombina: maior que 70%. Valores acima de 100% no tm significado patolgico
devendo ser relatados como 100%.
A RNI em pessoas sadias encontra-se entre 1,0 e 1,08.

Referncia
Instrues de Uso: PT Hemostasis Labtest Diagnstica

Obs.: No deixe de consultar as instrues de uso.