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CLCIO

FINALIDADE Sistema colorimtrico para determinao do clcio no soro, plasma e urina. Somente para uso diagnstico in vitro. PRINCPIO O clcio determinado colorimetricamente atravs de um complexo corado com Cresolftalena em meio alcalino. PARTICULARIDADES DO SISTEMA O kit Doles para dosagem de Clcio possui um nico reagente. Seu preparo simples, sendo suficiente adicionar o reagente de cor gua. Aps o preparo, o excesso de reagente pode ser usado como branco nas reaes. METODOLOGIA Doles. REAGENTES Reagente de cor (concentrado): Dietanolamina 5,7M, Dietilamina 4,3M, 8-Hidroxiquinolina 0,019M, o-Cresolftalena complexona 0,00025M e estabilizantes por litro. Soluo padro 10mg/dL: soluo de clcio 10mg/dL.

BIOQUMICA CLNICA

Soluo padro 10mg/dL : armazenar temperatura de 2-8 o C. Estvel at a data de vencimento indicada no rtulo do frasco, obedecidas as condies de armazenamento. CUIDADOS E PRECAUES COM O USO DOS REAGENTES Todos os reagentes so somente para uso diagnstico in vitro. Os reagentes so corrosivos. Devem ser manuseados com cuidado, evitando contato com pele e mucosas. O reagente de cor concentrado no deve ser pipetado com a boca pois pode provocar queimaduras. Usar pera de pipetagem. Havendo contaminao acidental lavar a parte afetada em gua corrente. O descarte do material utilizado dever ser feito obedecendo-se aos critrios de biossegurana estabelecidos pelo laboratrio, de acordo com as normas locais, estaduais ou federais.
Observar ainda a simbologia constante nos rtulos do produto:

Venenoso

Corrosivo

Irritante

AMOSTRA Soro ou plasma (colhido com heparina) e urina. O sangue deve ser colhido sem estase venosa para evitar variaes na concentrao de clcio ligado a protenas. Separar o soro ou plasma imediatamente. APRESENTAO Reagente de cor (concentrado) 1 x 100mL A coleta da urina de 24 horas deve ser feita Soluo padro 10mg/dL 1x 3mL em frasco contendo 10mL de cido clordrico p.a.. Quando da dosagem do clcio urinrio, se necessrio, acidificar a urina a pH 1-2 (1 a 2 NMERO DE TESTES gotas de cido Clordrico p.a para 5mL de urina). Manual 280 testes Todas as amostras biolgicas devem EQUIPAMENTOS E MATERIAIS NECESSRIOS ser consideradas como potencialmente infectantes. NO FORNECIDOS Espectrofotmetro ou fotocolormetro capaz de medir a absorvncia em 570nm ou filtro laranja. Tubos de ensaio. Pipetas graduadas. Pipeta semiautomtica 20L. Cronmetro. Ponteiras descartveis. gua deionizada. Pera para pipetagem. ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE DOS REAGENTES Reagente de cor (concentrado): armazenar temperatura de 2-8 oC. Estvel at a data de vencimento indicada no rtulo do frasco, obedecidas as condies de armazenamento. PROCEDIMENTO TCNICO Preparo do reagente de cor de uso: Por no ser estvel, o reagente de cor de uso deve ser preparado no momento de sua utilizao e apenas em quantidade necessria para os testes. A um tubo de ensaio (B), adicionar 7,0mL de gua deionizada e 1,0mL do reagente de cor (concentrado). Homogeneizar. A quantidade do reagente de cor de uso poder ser modificada de acordo com as necessidades, obedecidas as propores mencionadas acima. No preparo do reagente de cor de uso, se a soluo final ficar azulada significa que houve contaminao da gua por ons de clcio. Providenciar nova fonte de gua destilada ou deionizada.

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Rotular 2 tubos de ensaio com T (teste) e P (padro). Proceder como segue: T Reagente de cor (uso) Amostra Soluo padro 2,5mL 20L - P 2,5mL 20L

As solues padro utilizadas na montagem da curva de calibrao foram rastreadas contra Standard Calcium 10mg/dL, cat. no 360-5 Sigma Chemical Company CLCULOS
Determinao do clcio no soro ou plasma absorvncia teste Ca (mg/dL) = absorvncia padro Exemplo: Leituras: Padro (P) = 0,482 Teste (T) = 0,410 0,410 Clcio (mg/dL) = 0,482

x 10

Homogeneizar e ler as absorvncias de teste (T) e padro (P) em espectrofotmetro ou fotocolormetro, em 570nm ou filtro laranja, zerando o aparelho com o branco (B). O branco representado pelo volume de reagente que resta no tubo (B) aps o preparo do reagente de uso. DETERMINAO DO CLCIO NA URINA 1.Acidificar a urina, a pH 1-2, com cido Clordrico p.a. (1 a 2 gotas de HCl para 5mL de urina). 2.Proceder dosagem de maneira idntica dosagem do soro. CURVA DE CALIBRAO
0.800

x 10 = 8,5

Como a reao corada segue estritamente a lei de Beer, basta que se determine um fator (F) para clculo dos resultados.
10 Fator (F) = absorvncia Clcio (mg/dL) = absorvncia teste x F

absorvncia

0.600

0.400

0.200

0.000

10 15 concentrao(mg/dL)

20

Conc. Padro Absorvncia (mg/dL) 1 0.000 0 2 0.240 5 3 0.301 6.25 4 0.372 7.8 5 0.482 10 6 0.603 12.5 7 0.720 15 8 0.820 20

Para a obteno do fator, recomenda-se dosar em triplicata o padro, ler as absorvncias e tirar a mdia aritmtica das mesmas.
Exemplo: Leituras: Padro (P) = 0,483; 0,481;0,482 Teste (T) = 0,410 10 Fator (F) = 0,482

Obs.: No utilizar esta curva para determinar resultado de seu ensaio. A curva de calibrao demonstra a linearidade da reao at uma determinada concentrao, na qual pode ser determinado um fator de calibrao (F), de acordo com a Lei de Beer. A reao linear at 15mg/dL (ver curva acima). Obtendo-se valores mais elevados, dilui-se a amostra com gua deionizada e procede-se nova dosagem. Multiplicar o valor encontrado pelo fator de diluio. O kit de Clcio Doles possui padro no intervalo de linearidade da metodologia adotada. O laboratrio deve realizar o ensaio com o padro que acompanha o kit e calcular seu fator de calibrao (F), de acordo com o exemplo estabelecido nos clculos. O fator dever ser refeito periodicamente e a cada lote do produto.

= 20,74

Clcio (mg/dL) = 0,410 x 20,74 = 8,5

DETERMINAO DO CLCIO IONIZADO O clcio ionizado pode ser determinado de acordo com a seguinte frmula:
6 x Ca - [A + (0,19 x Pt) / 3] Clcio ionizado (mg/dL) = A + (0,19 x Pt) + 6

Ca = Clcio mg/dL Pt = Protenas totais (g/dL) A = Albumina (g/dL)

Dosar as protenas totais (g/dL), a albumina (g/dL) e o clcio (mg/dL) da amostra. Calcular conforme exemplo a seguir:

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Exemplo:
Ca = 10mg/dL Pt = 7 g/dL A = 4 g/dL 6 x 10 - [4 + (0,19x7) / 3] Clcio ionizado (mg/dL)= 4 + (0,19x7) + 6 Clcio ionizado = 4,9mg/dL

O clcio ionizado (livre) deve ser dosado, preferencialmente, utilizando-se o sistema de eletrodo seletivo para on clcio. Diversos equipamentos para tal finalidade encontram-se disponveis no mercado. DETERMINAO DO CLCIO URINRIO
volume urinrio 24hs (mL) Clcio urina de 24hs = Ca (mg/dL) x 100

5.O uso de soro controle de referncia deve ser uma prtica rotineira do laboratrio. Recomendase utilizar um soro controle com valor na faixa de normalidade (soro controle N - Doles) e outro soro controle de valor elevado (soro controle P - Doles). 6.A gua utilizada no preparo do reagente de cor de uso deve ser grau reagente. 7.A causa mais comum de erro e deteriorao do reagente a contaminao da vidraria por sais de clcio. Toda vidraria deve ser lavada apenas com detergentes no inicos e, posteriormente, com soluo de cido clordrico 25%. Enxaguar vrias vezes com gua deionizada. VALORES DE REFERNCIA recomendado que cada laboratrio estabelea sua prpria faixa de valores de referncia na populao atendida. Como orientao, sugerimos os seguintes valores: Soro / Plasma Crianas Adultos

Exemplo: Ca (mg/dL) Volume urinrio (mL)

= 10mg/dL = 1500 mL = 150mg/24hs

1500 Clcio urina de 24hs = 10 x 100

8,5 - 11 mg/dL 8,8 - 10,6mg/dL

EXPRESSO DOS RESULTADOS EM UNIDADES S.I. Clcio (mmol/L) = Clcio (mg/dL) x 0,25 LIMITAES DO SISTEMA Para se obter timo desempenho do sistema, necessrio que o procedimento tcnico seja rigorosamente seguido conforme instrues de uso. Qualquer alterao poder provocar resultados errneos. Acetaminofen, anticidos contendo clcio, anticoncepcionais orais e tiazidas causam interferncia, levando a resultados elevados. O u s o d e a s p i r i n a , c o r t i c o e s t e r o i d e s , difenilhidantona, diurticos, laxantes em excesso e sulfonamidas pode levar a valores diminudos de clcio srico. CONTROLE DA QUALIDADE DO SISTEMA 1.A limpeza e a secagem adequada do material a ser utilizado so de fundamental importncia para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. 2.A gua utilizada na limpeza do material, no preparo dos reagentes e na dosagem, deve ser de boa qualidade. 3.Colunas deionizadoras saturadas liberam ons diversos, aminas e agentes oxidantes, que deterioram os reagentes. 4.As pipetagens devem ser precisas.

Clcio ionizado Recm-nascido 3 - 24hs de vida: 4,3 - 5,2 mg/dL 24 - 48hs de vida: 4,0 - 4,8 mg/dL Adultos Urina 4,5 - 5,4 mg/dL 50 - 150mg/24hs

A excreo de clcio urinrio depende da dieta. Nas dietas ricas em clcio, a excreo diria pode atingir a 300mg/ volume urinrio 24hs. SIGNIFICADO CLNICO Podemos distinguir alteraes nos nveis sricos de clcio em vrios processos patolgicos. A hipercalcemia observada nas seguintes condies: hiperparatireoidismo, uso de certos diurticos (tiazidas), hipervitaminose D, mieloma mltiplo, osteosarcoma e nas metstases osteolticas de carcinomas. A hipocalcemia registrada no hipoparatireoidismo, deficincia de vitamina D (raquitismo e osteomalacia), nas sndromes que cursam com hipomagnesemia e, por vezes, na gravidez. CARACTERSTICAS DE DESEMPENHO Foram realizados 35 testes em amostras cujo teor de Clcio situava-se no intervalo de 8,4 a 11,2mg/dL. A comparao do kit de Clcio Doles

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(Y) com um mtodo de referncia (X) deu origem seguinte equao de regresso linear: Y=1,040X - 0,36, sendo o coeficiente de correlao 0,99. Teste de recuperao do Clcio usando a presente metodologia foi de 98,5 3%.

Adicionar aproximadamente 10mg de EDTA a cerca de 400 mL do soro em estudo e homogeneizar. A 2,5mL do reagente de cor de uso, adicionar 20mL desse soro. O branco do soro dever ser subtrado da absorvncia total do soro em estudo. Repetitividade: foram realizadas 20 dosagens Certas drogas podem alterar os nveis de clcio sucessivas, em uma nica amostra, obtendo-se (ver em limitaes do sistema). Para controle de os seguintes resultados: tal interferncia, recomenda-se que o paciente seja questionado quanto ao uso de medicamentos. Amostra Mdia (mg/dL) Desvio padro Coeficiente de variao (%) 9,31 0,21 2,26
BIBLIOGRAFIA CONSULTADA Connerty H.V. & Briggs A. R.: Amer J.Clin.Path: 45:290; 1966. Gitelman H. J.: Anal. Biochem. 18:521; 1967. Martinek, R.G.: J. Am. Med. Techin. 33:416; 1971. Meites, S., Faulkner. W.R.: Selected Methods of Clinical Chemistry, vol. 09, 125-129, 1981. Kaplan. L. A., Pesce. A. J.: Qumica Clnica Mtodos, 1014 - 1031, 1990. Tibrcio, H.M.: Controle Interno da Qualidade Analtica, 1aed. maro/1995. Doles: dados de arquivo.

Reprodutibilidade: foram realizadas 20 dosagens, durante 20 dias consecutivos, obtendo-se os seguintes resultados: Amostra Mdia (mg/dL) Desvio padro Coeficiente de variao (%) 10,03 0,27 2,69

Especificidade: a presente metodologia especfica para determinao de ons Clcio. A presena de 8-Hidroxiquinolena no reagente impede a interferncia do magnsio na dosagem. Sensibilidade: a absorvncia encontrada de 0,024 corresponde a 0,5mg/dL de concentrao de Clcio, quando utilizado um espectrofotmetro a 570nm. A sensibilidade do sistema est diretamente relacionada com a do aparelho utilizado no laboratrio.

TERMOS E CONDIES DE GARANTIA DA QUALIDADE DO PRODUTO As garantias do fabricante ao consumidor seguem estritamente as relacionadas na Lei no 8.078, de 11 de setembro de 1.990 - Cdigo de Defesa do Consumidor. Os reagentes que compem este sistema para diagnstico so garantidos na sua performance, reprodutibilidade e qualidade at a data de vencimento. Os produtos que apresentarem problemas tcnicos comprovados sero substitudos, sem nus para o consumidor.

Doles Reag. Equip. para Laboratrios Ltda. CNPJ: 01.085.513/0001-05 Diluio da matriz: estudos sucessivos Rodovia BR 153, Km 493, Lt.07 de diluio da matriz mostraram que no h Conjunto Palmares. interferncia na sensibilidade diagnstica da CEP: 74775-027 presente metodologia. Goinia - GO Brasil e-mail: doles@doles.com.br Substncias interferentes: o uso de gua no apropriada para o preparo do reagente, assim no 10231810044 como a presena de sais de clcio na vidraria M.S.: utilizada, podero levar a resultados falsamente 17 (03/2010) elevados. Bilirrubina at 20mg/dL e magnsio Reviso: a uma taxa 10 vezes superior normal, no interferem na metodologia. Quando se dosar o clcio em soro hemolisado ou lipmico, preparar um branco como segue:

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