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AMILASE CINTICA

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AMILASE CINTICA
PRINCPIO DE AO
Metodologia: Cintica.
A alfa-amilase catalisa a hidrlise do 2-cloro-4-nitrofenilmaltotriosdeo (CNP-G3) liberando 2-cloro-4nitrofenol (CNP), 2-cloro-4-nitrofenil-maltosdeo (CNP-G2), maltotriose (G3) e Glicose (G).
A concentrao cataltica determinada a partir da velocidade de formao do 2-cloro-4-nitrofenol,
medido a 405 nm.
CNPG3 Alfa-amilase > CNP + CNPG2 + G3 + G
APLICAO CLNICA
A Amilase, predominantemente de origem pancretica e salivar, est normalmente presente no
sangue e na urina em pequenas quantidades. Eleva-se rapidamente no plasma aps o incio dos
sintomas de pancreatite aguda, onde paralelamente observa-se um aumento da Amilase urinria.
Valores aumentados so observados tambm no infarto mesentrico, lcera gstrica perfurada,
carcinoma de cabea do pncreas, caxumba, insuficincia renal, acidose diabtica.
Nveis plasmticos diminudos so observados na hepatite, cirrose heptica, toxemia de gravidez,
eclampse, carcinoma pancretico .
AMOSTRA
Soro obtido livre de hemlise, plasma colhido com heparina. Outros anticoagulantes (EDTA, citrato,
oxalato) inibem a atividade da Amilase.
Urina - coletar em intervalo de 2 a 24 horas.
A Amilase estvel no plasma, soro ou urina por at 7 dias entre 20 e 25 C e 2 meses entre 2 e
8C.
Estabilidade e armazenamento da amostra
A Amilase estvel no plasma, soro ou urina por at 7 dias entre 20 e 25C e 2 meses entre 2 e
8C.
Volume ideal utilizado para anlise
(Definir o volume ideal a ser encaminhado para anlise).
Volume mnimo utilizado para anlise
(Definir o volume mnimo a ser encaminhado para anlise).
Critrios para rejeio da amostra
No usar amostras com fortes sinais de hemolise e nem com presena de contaminao bacteriana.
Fazer referncia ao manual ou POP de coleta, separao e distribuio de material.
REAGENTE UTILIZADO
AMILASE CINTICA

CATLOGO: K046

ANVISA: 10269360079

QUIBASA QUMICA BSICA Ltda


Rua Teles de Menezes, 92 - Santa Branca
CEP 31565-130 - Belo Horizonte - MG - Brasil
Tel.: (31) 3427.5454 - Fax (31) 3427.2999
e-mail: sac@bioclin.com.br
site: www.bioclin.com.br
CNPJ: 19.400.787/0001-07 - Indstria Brasileira
Componentes do kit
Nmero 1 - Substrato Tamponado - conservar entre 2 e 8 C. Contm: Tampo MES 200 mmol/L
pH 6,0; 2-cloro-4-nitrofenil-maltotriosdeo (G3CNP) 5 mmol/L, Cloreto de Sdio 400 mmol/L, Azida
Sdica 15 mmol/L.
Preparo do Reagente de Trabalho
O Reagente de Trabalho (Substrato Tamponado) pronto para uso e estvel entre 2 e 8 C at a
data de validade impressa no rtulo.

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Estabilidade
Os reagentes so estveis at a da data de validade impressa no rtulo quando conservados de
acordo com a temperatura recomendada. Evitar a contaminao do produto durante o uso para no
afetar a sua estabilidade.

CUIDADOS E PRECAUES ESPECIAIS


1 - Somente para uso diagnstico in vitro;
2 - Seguir com rigor a metodologia proposta para obteno de resultados exatos;
3 - A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes;
4 - Colunas deionizadoras saturadas liberam gua alcalina, ons diversos e agentes oxidantes e
redutores, que podem alterar de forma significativa os resultados;
5 - Hemlise visvel pode ser causa de ligeiras variaes nos resultados;
6 - O descarte do material utilizado dever ser feito obedecendo-se os critrios de biossegurana de
acordo com a legislao vigente;
7 - O Reagente No 1 facilmente contaminado por saliva. Portanto, recomendamos a utilizao de
mscaras, peras e pipetas automticas durante o manuseio deste produto.
EQUIPAMENTOS
Tcnica Manual
Condies de Reao

Equipamento: Espectrofotmetro ou colormetro

Leitura: Comprimento de onda 405 nm

Cubeta termostatizada a 37 C caminho ptico de 1 cm

Pipetas para medir amostras e reagentes

Cronmetro
Procedimento Tcnico Automatizado
Inserir nome, modelo e o local onde se encontra o equipamento; Fazer referncia ao manual ou POP
para utilizao do mesmo.
Procedimento Tcnico Alternativo
Inserir o equipamento alternativo e os procedimentos para medio dos ensaios. Indicar as possveis
diferenas quando os procedimentos manuais substiturem os procedimentos automatizados.
PROCEDIMENTO
Procedimento Manual
Para Soro ou Plasma
Adicionar 20 L de amostra a 1,0 mL do Reagente de Trabalho, misturar e transferir para cubeta
termostatizada a 37C. Fazer a leitura inicial, disparando simultaneamente o cronmetro. Repetir as
leituras aps 1, 2 e 3 minutos. Calcular a mdia das diferenas de absorbncia por minuto (A/min.)
e utilizar para clculo do resultado.
Para Urina
Seguir a mesma metodologia para Soro ou Plasma, utilizando 10 L de amostra.
Procedimento Automatizado
Mencionar o manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar a programao dos
reagentes para o equipamento automtico.
CLCULOS
Para Soro ou Plasma
Amilase (U/L) = A/min. x 3954. Os resultados sero expressos em U/L.
A reao linear at a concentrao de 2000 U/L.
Para uma variao mdia na absorbncia a 405 nm maior que 0, 50, repetir a determinao, diluindo
a amostra com NaCl 0,85%. Multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluio.
Para Urina
Amilase (U/L) = A/min. x 7908. Os resultados sero expressos em U/L.
A reao linear at a concentrao de 2000 U/L.

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Para uma variao mdia na absorbncia a 405 nm maior que 0,25, repetir a determinao, diluindo a
amostra com NaCl 0,85%. Multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluio.
RESULTADOS
Unidade de Medida: U/L
Fator de Converso de Unidades (U/L para SI): U/L X 0,01667= UKaT/L
CONTROLE DA QUALIDADE
Materiais
Identificar os materiais de controle interno e externo da qualidade, citando fabricante e nmero de
catlogo.
Referenciar POP para limpeza e secagem dos materiais utilizados.
Controle Interno
Descrever a calibrao peridica de pipetas, equipamentos utilizados, controle de temperatura
ambiente e geladeiras para armazenamento dos kits.

Deve ser prtica rotineira do Laboratrio Clnico o uso de soro controle para checar a
preciso e exatido das dosagens. Deve ser de 5% o erro mximo permitido em relao aos
valores pr-estabelecidos para os controles.
Citar POP para controle interno.
Controle Externo
Descrever os procedimentos utilizados nas avaliaes de qualidade feitas por programas de
comparao entre laboratrios ou outros controles de qualidade.
Gerenciamento dos dados obtidos no Controle Interno e Externo
Definir como os dados de controle so arquivados e gerenciados.
Fazer referncia ao manual ou POP de garantia da qualidade.
VALORES DE REFERNCIA
Os valores de referncia em U/L para o presente mtodo foram obtidos atravs da determinao da
Alfa-amilase em populaes sadias do sexo masculino e feminino em vrias faixas etrias.
Soro: < 90 U/L
Urina: < 450 U/L
Estes valores devem ser usados como orientao, sendo que cada laboratrio dever criar sua faixa
de valores de referncia, de acordo com a populao atendida.
SIGNIFICADO CLNICO
A Amilase, predominantemente de origem pancretica e
salivar, est normalmente presente no sangue e na urina
em pequenas quantidades. Eleva-se rapidamente no
plasma aps o incio dos sintomas de pancreatite aguda,
onde paralelamente observa-se um aumento da Amilase
urinria.
Valores aumentados so observados tambm no infarto
mesentrico, lcera gstrica perfurada, carcinoma de
cabea do pncreas, caxumba, insuficincia renal,
acidose diabtica.
LINEARIDADE
Linearidade
A reao linear at a concentrao de 2000 U/L.
Para uma variao mdia na absorbncia a 405 nm maior que 0,50, repetir a determinao, diluindo a
amostra com NaCl 0,85%. Multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluio.
LIMITAES DO MTODO
As especificaes abaixo se referem a equipamentos semi-automticos:
O mtodo cintico baseia-se na absortividade molar, por essa razo, as leituras devem ser realizadas
em um espectrofotmetro que cumpra as seguintes condies:
Comprimento de onda 405 nm semi trajetria da banda de passagem 10 nm Luz espria menor que
0,5% Cubeta de 1 cm termostatizada

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Interferncias
A saliva contm Amilase. Portanto, no se deve pipetar com a boca e evitar o contato do reagente
com a pele. A lipemia (Triglicrides at 1000 mg/dL) e a Bilirrubina (at 20 mg/dL) NO interferem
com a metodologia.
Hemoglobina a 2,5 g/L interfere nos resultados. Algumas drogas podem interferir nos resultados
laboratoriais elevando os nveis sricos da Amilase (morfina, meperidina, codena, diurticos
tiazdicos) ou diminuindo, como nos casos de envenenamento por barbitricos.
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
1. 1.Winn-Deen ES, David H, Sigler G and Chavez R.
Development of a direct assay for a-amylase. Clin Chem 1988; 34: 2005-2008.
2. Gella FJ, Gubern G, Vidal R, Canalias F. Determination of total and pancreatic a-amylase in
human serum with 2-chloro-4-nitrophenyl-a-D-maltotrioside as substrate.
Clin Chim Acta 1997; 259: 147-160.
3. Gubern G, Balsells D, Ferragut R, Galn A, Gella FJ, et al. Procedimiento recomendado para la
determinacin en rutina de la concentracin cataltica de a-amilasa en suero sanguneo
humano. Quim Clin 1996; 15: 51-52.
4. Balsells D, Gella FJ, Gubern G, Canalias F. Reference values for a-amylase in human serum
and urine using 2-chloro-4-nitrophenyl-a-D-maltotrioside as substrate.
Clin Chim Acta 1998; 274: 213-217.
5. Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory tests, 4th ed. AACC Press, 1995.
6. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 2nd edition. Burtis CA, Ashwood ER. WB Saunders Co.,
1994.
7. Friedman and Young. Effects of disease on clinical laboratory tests, 3th ed. AACC Press, 1997.

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Nmero
Cpias

Data
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Destino