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POPBIO 045
REVISÃO 00
COLESTEROL

COLESTEROL
INDICAÇÃO MEDICA DO EXAME
Teste Enzimático Colorimétrico para a determinação do colesterol total no soro ou plasma usando
reagente líquido pronto para uso.
O Colesterol é um esteróide sintetizado a partir da acetil-CoA e atua como
Intermediário metabólico para outros esteróides, ácido biliar e vitamina D.
O colesterol é transportado por três lipoproteínas, Lipoproteína de alta.
Densidade (HDL-Colesterol), Lipoproteína de baixa densidade (LDL-
(Colesterol) e Lipoproteína de muito baixa densidade (VLDL-Colesterol).

APLICAÇÃO CLÍNICA
A determinação do colesterol total faz parte do perfil lipídico do sangue, ao lado das determinações de
triglicérides, lipoproteínas e colesterol ligado às lipoproteínas de densidade muito baixa (VLDL),
densidade baixa (LDL) e alta densidade (HDL). Atualmente a determinação isolada do colesterol total
possui pouca utilidade clínica, uma vez que, no diagnóstico das doenças coronarianas e
cardiocirculatórias, o perfil lipídico completo estabelece as condições de risco do paciente. Portanto, a
determinação isolada do colesterol total pode ser de interesse no diagnóstico e controle de outras
doenças que não as cardiocirculatórias, tais como as patologias ligadas a tireoide, xantomatoses e etc .

AMOSTRA
a- Preparo do paciente
Recomenda-se um jejum prévio de 12h.
b- Tipo de amostra performance;
Não se registram interferências em amostras com até 200 mg/dL de hemoglobina e até 20 mg/dL de
bilirrubinas. Em amostras ictéricas ou hemólise tolerável, recomenda-se fazer o branco de amostra.
- Soro: aconselha-se o uso de soro recém-coletado, não hemolisado e separado o mais rapidamente
possível após sua coleta.
- Plasma: usar plasma recém-coletado com heparina ou EDTA, pois plasmas fluoretados e oxalatados
induzem a valores artificialmente baixo e separado o mais rapidamente possível após sua coleta.
C- Armazenamento e estabilidade
O colesterol presente na amostra de soro mantém-se estável por 5 dias à temperatura ambiente, até 2
semanas em geladeira (2-8 C) ou até 6 meses congelado (abaixo de 0 C).
d- Critérios de rejeição
Rejeitar as amostras com hemoglobina superior a 200 mg/dL, bilirrubinas acima de 20 mg/dL ou que
apresentem sinais de contaminação bacteriana.
e- Precauções e cuidados especiais
Todas as amostras devem ser manipuladas com extrema cautela, pois podem veicular diversas doenças
infecto-contagiosas (hepatite, SIDA etc.). Seu descarte deve ser feito preferencialmente após sua
autoclavação devendo-se evitar sua eliminação diretamente no meio ambiente. Igual cuidado se
recomenda no descarte de outros materiais como ponteiras plásticas, agulhas e seringas.

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REAGENTE UTILIZADO
a- Princípio
O método enzimático da LABORCLIN para a determinação do colesterol, 7:: utiliza o procedimento
descrito por Allain

Ésteres Colesterol CE Colesterol + Ácidos Graxos

Colesterol + O2 Colest-4-en-3-ona + H O2

2H O + 4-Aminofenazona + Fenol quinoneimina + 4H O

A quantidade de cromogênio formada é diretamente proporcional à quantidade de colesterol total

presente na amostra

b- Reagentes –
Colesterol Bioliquid: reagente pronto para uso contendo as seguintes concentrações mínimas de
reativos.
CONSTITUINTES
CONSTITUINTE CONCENTRAÇÃO
4-Aminofenazona 0,25 mmol/L
Fenol 25 mmol/L
Colesterol Oxidase (CO) >100 U/L
Colesterol Esterase (CE) >150 U/L
Peroxidase (POD) >5000 U/L

- Padrão de Colesterol: Solução padrão contendo 200 mg/dL de colesterol em etilenoglicol monometil-
éter e ativadores .

c- Armazenamento e estabilidade
No laboratório, devem ser mantidos em geladeira (2-8 C) condição na qual se mantém estáveis até a
data de vencimento expressa em rótulo desde que isentos de contaminação química ou microbiana. O
Reagente de Trabalho mantém-se estável por até a data indicada em rótulo, sob refrigeração (2- 8 C)
desde que isento de contaminação química e microbiana.
d- Precauções e cuidados especiais
- Procurar tirar a alíquota de trabalho sem o uso de pipetas, de forma a manter a integridade do
reagente e evitar variação de temperatura;
- Os reagentes não devem ser congelados bem como expostos à luz direta.
Quando utilizado em equipamentos de automação, a transferência do reagente para os recipientes do
equipamento deve ser feita cuidadosamente de forma a evitar possíveis contaminações que venham a
interferir em sua performance;
- O reativo Colesterol líquido pode desenvolver uma coloração ligeiramente rósea, que não interfere em
sua performance desde que sua absorbância a 500 nm frente a água não ultrapasse 0,300 ;
- Crescimento bacteriano neste reativo inviabiliza sua utilização;
- Os reagentes destinam-se ao uso in vitro, devendo-se evitar seu contato com a pele, olhos e mucosas.

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EQUIPAMENTOS
- Espectrofotômetro, fotocolorímetro ou equipamento automático;
- Banho - Maria;
- Cronômetro;
- Pipetas graduadas;
- Micropipetador.

PROCEDIMENTOS
(para equipamentos manuais e semi-automáticos)
- Deixar os reagentes e amostras adquirirem a temperatura ambiente;
- Ajustar o comprimento de onda do equipamento para 500 nm (filtro verde 500-520 nm);
- Identificar 3 tubos como B (branco), P (padrão) e T (teste) e proceder como indicado abaixo:

PROCEDIMENTO
BRANCO AMOSTRA PADRÃO
Amostra ------------- 0,01 mL --------------
Padrão -------------- ------------- 0,01 mL
Reag. Trabalho 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL
Misturar suavemente e incubar 5 min a 37 C
Ler a absorbância dos tubos de amostra e padrão, acertanto o zero com o Branco e
depois efetuar os cálculos necessários descritos a seguir.
A cor desenvolvida é estável por 60 minutos.

CÁLCULOS
Para se determinar a concentração de colesterol total na amostra analisada, usar a seguinte fórmula:

Absorbância do teste
Colesterol Total em mg/dL = X 200
Absorbância do padrão

Usando-se fator de calibração:

200
Fator =
Absorbância do padrão

Colesterol Total (mg/dL) = Absorbância da amostra × Fator de calibração

Exemplo:
Concentração do padrão: 200 mg/dL
Absorbância do padrão: 0,280 D.O
Absorbância da amostra: 0,210 D.O

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 200
Fator de Calibração = 714 Amostra (mg/dL) =714 x 0,210=149,9
(0,280)

RESULTADOS
- Unidade utilizada: mg/dL
- Valores de referência
- Desejável até 200 mg/dl

- Interpretação
Entre 200 e 239 mg/dL consideram-se os valores como “borderline” e acima de 240 mg/dL como
valores elevados (risco).Apesar do diagnóstico efetivo do risco de doenças caridiocirculatórias e
coronarianas envolver o doseamento 26 do colesterol ligado à HDL e LDL, uma tabela extraída de Jacobs
e cols. expressa os grupos etários de risco:

Fatores de risco
Idade Risco Moderado Risco Alto
20-29 > 200 mg/dL > 220 mg/dL
30-39 > 220 mg/Dl > 240 mg/dL
> 40 > 240 mg/Dl > 260 mg/dL

CONTROLE DE QUALIDADE
- Materiais necessários
Amostras de controle originárias de pool de soros preparados pelo próprio laboratório e/ou controles de
origem comercial, mapas e gráficos de controle.
- Periodicidade
Ao iniciar o trabalho com um novo lote de reagentes recomenda-se avaliar os mesmos quanto a
precisão e exatidão. Durante a execução da rotina, recomenda-se avaliar uma amostra de controle em
paralelo com cada bateria de testes.
- Interpretação e avaliação
Como o objetivo do controle de qualidade é garantir que os resultados liberados sejam compatíveis com
a realidade do paciente, o laboratório deve definir quais são os parâmetros de controle adotados bem
como as medidas para possíveis ações corretivas.

VALORES DE REFERÊNCIA
Soro ou plasma

Idade > 20 anos

Desejável < 200 mg/dL
Risco Moderado 200-239 mg/dL
Alto Risco > 240mg/dL
Fonte: Sociedade Brasileira de Cardiologia (Sup.III, 11/2001)

Idade 2-19 anos

Desejável < 170 mg/dL
Risco Moderado 170-199 mg/dL
Alto Risco > 200mg/dL

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SIGNIFICADO CLÍNICO
Significado clínico O colesterol total compreende todas as formas de colesterol encontradas nas
lipoproteínas. É predominantemente composto por lipoproteína de baixa densidade (LDL) e em pequena
parte por lipoproteína de alta densidade (HDL) e lipoproteína de muito baixa densidade (VLDL). Existe
forte associação entre os níveis aumentados de colesterol e o desenvolvimento de doenças
aterosclerótica. É usado para avaliar risco de doenças aterosclerótica, como rastreamento para
hiperlipidêmicas primárias e secundárias e para monitorizar tratamento. Pode ter seus valores
diminuídos em 24-48 horas após o infarto agudo do miocárdio ou outras situações de estresse agudo

LINEARIDADE E LIMITE DE DETECTAÇÃO

- Limite de diluição
A presente metodologia apresenta linearidade até se atingir uma concentração de 750 mg/dL de
colesterol na amostra analisada. Acima deste limite, a amostra deve ser diluída 1/3 em solução
fisiológica (NaCl 0,85%) e novamente analisada, devendo o resultado obtido ser multiplicado pelo fator
de diluição (3).
- Interferentes
Numerosas drogas medicamentosas podem eventualmente interferir nos níveis do colesterol sérico,
bem como fatores tais como dieta (aumentos entre 25-50%), stress, exercícios físicos ou ainda variações
sazonais. Recomenda-se a leitura dos textos de Tietz e Young para maiores informações.

LIMITAÇÕES DO MÉTODO
- Limite de diluição
A presente metodologia apresenta linearidade até se atingir uma concentração de 750 mg/dL de
colesterol na amostra analisada. Acima deste limite, a amostra deve ser diluída 1/3 em solução
fisiológica (NaCl 0,85%) e novamente analisada, devendo o resultado obtido ser multiplicado pelo fator
de diluição (3).
- Interferentes
Numerosas drogas medicamentosas podem eventualmente interferir nos níveis do colesterol sérico,
bem como fatores tais como dieta (aumentos entre 25-50%), stress, exercícios físicos ou ainda variações
sazonais. Recomenda-se a leitura dos textos de Tietz e Young para maiores informações.
-Estatística do Método
- Precisão foi estabelecida através do doseamento de amostra clínica e soro controle em quintuplicata
durante 5 dias, obtendo-se os seguintes resultados: Média 367 mg/dL (amostra clínica) e 128 mg/dL
(controle) com C.V. 2,5 % e 1% respectivamente interensaio e 3,5 e 2,9% respectivamente intraensaio,
limite de confiança 95%.
- Exatidão foi determinada pela análise de regressão linear de 66 amostras de soro com faixa de variação
entre 125 e 550 mg/dL contra um método proveniente de outro fabricante, obtendo-se um coeficiente
de correlação 0,991 e a seguinte fórmula: Colesterol Total Bio Diagnóstica = 1,04 x Valor do outro
método - 9,3.

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REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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6. Richmond, W., Clin. Chem., 19,1350 ,1973.
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22. Young, D. S. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. 4 edition AACC Press, 1995. rd
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