HDL COLESTEROL

10.005.00
FINALIDADE
Kit destinado determinao da frao HDL do colesterol presente no soro.
PRINCPIO DO MTODO
Os quilomcrons e as lipoprotenas de baixssima densidade (VLDL) e de baixa
densidade (LDL) presentes na amostra, precipitam em presena de ons
fosfotungstato e magnsio. Aps a centrifugao o sobrenadante contm as
lipoprotenas de elevada densidade (HDL), cujo colesterol quantifica-se em
espectrofotmetro mediante as reaes acopladas descritas abaixo:
col. esterase

Colesterol esterificado + H2O -------------> Colesterol + Ac. graxo

Branco
100 L
1,0 mL

gua destilada
STD
Sobrenadante
Reagente do Colesterol

Padro
100 L
1,0 mL

Amostra
100 L
1,0 mL

2. Homogeneizar bem e incubar os tubos durante 10 minutos a 37 C.

3. Medir a absorbncia (Ap) do Padro e (Aa) da Amostra frente ao Branco a 505
nm. A cor estvel durante 30 minutos.
PROCEDIMENTO DE CALIBRAO/CLCULOS
( )

col. oxidase

Colesterol + O 2 + H2O --------------> Colestenona + H2O2

( )

* 40 equivale ao valor do padro (20 mg/dL) corrigido de acordo com o

fator de diluio (1:2) usado na precipitao.

peroxidase

2H2O2 + 4-Aminoantipirina + Fenol -------------> Quinoneimina + 4H2O

COMPOSIO DOS REAGENTES
cido Fosfotngstico 16 mmol/L, Cloreto de magnsio 3,5 mmol/L.
Butanol 10% v/v; Triton X100 0,1% v/v; em concentrao
equivalente 20 mg/dL de HDL colesterol.
CONDIES DE ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE

Estabilidade: Estvel at a data de validade do kit que est impressa no

rtulo da embalagem.

No usar reagentes cuja data de validade tenha expirado.

Conservar de 2 a 8 C.

No congelar e manter ao abrigo da luz.

MATERIAL NECESSRIO NO FORNECIDO

Espectrofotmetro ou fotmetro para leitura em 505 nm (490 - 510).

Banho de gua, termostatizado a 37 C.

Pipetas de vidro e/ou automticas.

Relgio ou Cronmetro.

Tubos de ensaio.

Centrfuga com capacidade mnima de 3.000 rpm.

Kit Biotcnica para dosagem de Colesterol- CAT BT 10.004.00.

CUIDADOS E PRECAUES

O kit destina-se somente para uso diagnstico in vitro.

As amostras a serem analisadas devem ser tratadas como material
potencialmente infectante.

Utilizar os EPIs de acordo com as Boas Prticas de Laboratrio Clnico.

Descartar as sobras das reaes de acordo com as Boas Prticas de

Laboratrio Clnico (BPLC) e Programa de Gerenciamento de Resduos de
Servio de Sade (PGRSS).

As informaes de Descarte, Segurana e Primeiros Socorros esto

descritas na Ficha Individual de Segurana de Produtos Qumicos (FISPQ)
deste produto, disponvel em www.biotecnica.ind.br ou pelo telefone (35)3214-4646.

No misturar reagentes de lotes diferentes.

No trocar as tampas dos frascos dos reagentes, a fim de evitar

contaminao cruzada.

No usar o reagente quando este apresentar caracterstica visual em

desacordo com o especificado na FISPQ do produto.

Evitar deixar os reagentes fora das condies de armazenamento

especificadas, quando os mesmos no estiverem em uso.

Usar pipetas de vidro e ponteiras descartveis especficas para cada

amostra, controle, padro/calibrador e reagente.

O nvel de gua do banho-maria deve ser superior ao dos tubos de ensaio

que contm as reaes.
AMOSTRA - PREPARO E ESTABILIDADE

Soro. Estvel por 3 dias de 2 a 8 C.

PROCEDIMENTO TCNICO
A) PREPARAO DOS REAGENTES
Reagente pronto para uso.
B) PROCEDIMENTO

Exemplo:
Concentrao do Padro = 40 mg/dL
Absorbncia da Amostra = 0,244
Absorbncia do Padro = 0,305
Colesterol HDL (mg/dL) = 0,244 x 40 = 32 mg/dL
0,305
Com Fator de Calibrao:
( )

Fator de Calibrao = Concentrao Padro (mg/dL) *

Absorbncia do Padro

Colesterol HDL (mg/dL) = Absorbncia da amostra x Fator de Calibrao

Exemplo:
Fator de Calibrao =

40
0,305

= 131

Colesterol HDL (mg/dL) = 0,244 x 131 = 32 mg/dL

SENSIBILIDADE E LINEARIDADE
- Sensibilidade Metodolgica:
Calculado: 0,145 mg/dL
- Linearidade: 150 mg/dL.
Para valores superiores, diluir a amostra com NaCl 150 mM (0,9%), realizar nova
dosagem e multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluio.
LIMITAES DA TCNICA

Anticoagulantes
No devem ser usados, pois produzem resultados falsamente diminudos.

Hemlise, Ictercia
Hemoglobina > 150 mg/dL
Bilirrubina > 10 mg/dL
CONTROLE DA QUALIDADE
Todo laboratrio clnico deve manter um programa de controle interno da
qualidade que defina claramente os objetivos, procedimentos, normas e critrios
para limites de tolerncia, aes corretivas e registro das atividades. Ao mesmo
tempo, deve ser mantido um sistema definido para monitorar a variabilidade
analtica que ocorre em todo sistema de medio.
O uso de controles para avaliar a impreciso e a inexatido das determinaes
deve ser prtica rotineira no laboratrio. Sugere-se usar
um controle na faixa de referncia ou no nvel de deciso e outro controle com
valor em outra faixa de significncia clnica. A aplicao do sistema de regras
mltiplas de Westgard para avaliao do estado de controle tambm
recomendvel.
O laboratrio deve participar de programas de controle externo de qualidade, a
exemplo daqueles oferecidos pela SBAC (Sociedade Brasileira de Anlises
Clnicas) e SBPC (Sociedade Brasileira de Patologia Clnica).
Para Calibrao e Controle Interno de Qualidade Laboratorial recomenda-se o
uso de soro controle.
VALORES DE REFERNCIA
Pelas ltimas Diretrizes Brasileiras sobre Dislipidemias e Preveno da
Aterosclerose, os valores de referncia para HDL Colesterol podem ser
consultados por faixa etria, como mostrado na tabela abaixo:
Faixa Etria
At 10 anos
De 10 a 19 anos

Precipitao
1. Pipetar em tubo de centrfuga
Amostra
Reagente precipitante

HDL Colesterol (mg/dL) = Absorbncia da Amostra x Conc. Padro (mg/dL) *

Absorbncia do Padro

250 L
250 L

2. Agitar vigorosamente e deixar em repouso durante 10 minutos.

3. Centrifugar durante 10 minutos a 3.000 rpm para obter um
sobrenadante lmpido.
4. Recolher com cuidado o sobrenadante.
5. Realizar a dosagem de colesterol HDL imediatamente.
Dosagem do Colesterol HDL
Proceder determinao do colesterol HDL utilizando o reagente de Colesterol
Biotcnica CAT BT 10.004.00
1. Pipetar em tubos de ensaio:
BIOTCNICA IND.COM. LTDA. Rua Igncio Alvarenga n 96, Vila Vernica,
Varginha MG BRASIL CEP: 37026-470 Tel/fax: +55 35 3214 4646
www.biotecnica.ind.br

Valor (mg/dL) Interpretao

> 40
Desejvel
> 35
Desejvel
< 40
Baixo
Adultos
41 a 59
Aceitvel
> 60
Desejvel
Diabticos
> 45
Desejvel
Estes valores so unicamente para orientao, sendo recomendvel que cada
laboratrio estabelea seu prprio intervalo de referncia.
Converso para Unidade do Sistema Internacional (SI):
HDL Colesterol (mg/dL) x 0,026 = HDL Colesterol (mmol/L)
CARACTERSTICAS DE DESEMPENHO
Repetibilidade
A realizao de 20 determinaes de uma mesma amostra em um mesmo dia,
com valores dentro da faixa de referncia mostrou um Coeficiente de Variao de
2,83%.
Reviso: 01 - FEVEREIRO/2012

TABELA DE SMBOLOS INTERNACIONAIS

Reprodutibilidade

SMBOLO

A realizao de 10 determinaes de uma mesma amostra, analisada em dias

diferentes mostrou um Coeficiente de Variao de 3,62%.
Especificidade Analtica
A comparao com um mtodo similar, j validado, mostrou um coeficiente de
correlao, r, igual a 0,999 a partir de amostras obtidas de pacientes de
ambulatrio. A equao de regresso obtida foi
Y = 1,002X - 0,4652.
SIGNIFICADO CLNICO
O colesterol HDL exerce importante funo na retirada do colesterol dos tecidos e
transporte at o fgado para ser metabolizado em cidos biliares (transporte
reverso do colesterol). Vrios estudos sugerem existir uma forte correlao
inversa entre os nveis de HDL colesterol e o risco de aterosclerose. Assim
sendo, nveis elevados de HDL so benficos e at mesmo desejveis. Estudos
demonstram que exerccios fsicos podem aumentar essa frao do colesterol.
Valores de HDL Colesterol so dependentes de sexo e idade, e tendem a
decrescer temporariamente aps um episdio de infarto agudo do miocrdio.
Em doenas da tireide seus valores no devem ser usados como estimativa de
risco de aterosclerose, visto que seus nveis se elevam no hipotireoidismo e
diminuem no hipertireoidismo.
Fatores que contribuem para o decrscimo do HDL Colesterol

Fatores genticos: hipoalfalipoproteinemia.

Fumo.

Obesidade.

Hipertrigliceridemia.

Sedentarismo.

Esterides,andrognios, progestgenos, anablicos, tiazdicos.

-Bloqueadores adrenrgicos.

Neomicina.

Anti-hipertensivos
OBSERVAES
1. O laboratrio deve estabelecer os requisitos qumicos, microbiolgicos e de
partculas para a gua antes do seu uso para cada uma das suas aplicaes e
deve definir as especificaes ou tipos de gua que os atenda. Uma vez que a
pureza necessria tenha sido definida, o sistema de purificao deve ser
validado e importante garantir que a gua obtida continue a atender s
especificaes por meio de verificaes peridicas.
2. A limpeza e secagem adequadas do material usado so fatores fundamentais
para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos.
APRESENTAES
R1

2 x 50 mL

Apresentao 1
STD

1 x 4 mL

400 Precip.
de 0,25 mL
40 cal de
100 L

GARANTIA DE QUALIDADE
Antes de serem liberados para o consumo, todos os reagentes Biotcnica so
testados pelo Departamento de Controle de Qualidade. A qualidade dos
reagentes assegurada at a data de validade mencionada na embalagem de
apresentao, desde que armazenados e transportados nas condies
especificadas. Os dados relativos ao Controle de Qualidade deste produto (lote
impresso nas etiquetas dos frascos de reagentes) podem ser solicitados em:
sac@biotecnicaltda.com.br
AUTOMAO
Este procedimento automatizvel na maioria dos analisadores.
Os protocolos esto disponveis em www.biotecnica.ind.br
SAC - SERVIO DE ATENDIMENTO AO CONSUMIDOR
Qualquer dvida na utilizao deste kit, entrar em contato com a Assessoria
Cientfica da Biotcnica Ltda, atravs do telefone +55 35 3214 4646 ou pelo
email sac@biotecnicaltda.com.br
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

BURSTEIN, M.; SCHOLNICK, H. R.; MORFIN, R. Rapid method for the

isolation of lipoproteins from human serum by precipitation with
polyanions. J. Lipid Res. v.11, p.583-595, 1970.

VIRELLA, M.F.L. et al. Cholesterol determination in high-density

lipoproteins separated by three different methods. Clin. Chem. v.23,
p.882-884,1977.

KOSTNER, G.M. et al. Determination of high-density lipoproteins:

screening methods compared. Clin. Chem. v.25, n.6, p.939-942,1979.

GROVE, T. H. Effect of reagent pH on determination of high-density

lipoprotein cholesterol by precipitation with sodium phosphotungstatemagnesium. Clin. Chem. v.25, p.560-564, 1979.

WARNICK, R.G.; NGUYEN, T.; ALBERS,A. A. Comparison of Improved

Precipitation Methods for Quantification of High-Density Lipoprotein
Cholesterol. Clin. Chem. v.2, p.217,1985.

SOCIEDADE BRASILEIRA DE CARDIOLOGIA. Diretrizes Brasileiras

Sobre Dislipidemias e Diretrizes de Preveno da Aterosclerose. Arq.
Bras. Cardiol. v.77, supl. III p.1-48, 2001.

YOUNG, D.S. Effects of drugs on clinical laboratory tests - vol. 2, 5 ed.

Washington DC: AACC Press, 2000.

WESTGARD, J. O. et al. A multi-rule shewhart chart quality control in

clinical chemistry. Clin. Chem. v.27 p.493-501, 1981
RESPONSABILIDADE TCNICA
Dr. Gilson Srio Pizzo - CRF MG - 5310
MS
80027310215

IDIOMA
Portugus
English
Espaol
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DEFINIO
Consultar Instrues de Uso
Consult instructions for use
Consultar la metdica
Cdigo
Code
Cdigo
Nmero de lote
Batch code
Denominacin de lote
Para uso diagnstico in vitro
For in vitro diagnostic medical device
Para uso em diagnostico in vitro
Contedo do kit
Contents of kit
Contenido del estuche
Contedo suficiente para <n> testes
Contains sufficient for <n> tests
Contenido suficiente para <n> ensayos
Calibrador
Calibrator
Calibrador
Controle
Control
Control
Padro
Standard
Patrn
Reagente e seu nmero/abreviao
Reagent and its number/abbreviation
Reactivo e su nmero/abreviacin
Limite de temperatura
Temperature limitation
Temperatura lmite
Data limite de utilizao (ltimo dia do ms)
Use by (last day of the month)
Estable hasta (ultimo da del mes)
Fabricado por
Manufactured by
Elaborado por
Risco biolgico
Biological risk
Riesgo biolgico
Corrosivo
Corrosive
Corrosivo
Txico
Toxic
Txico
Inflamvel
Flammable
Inflamable
Nocivo / Irritante
Harmful / Irritant
Nocivo / Irritante
Material reciclvel
Recyclable material
Material reciclable
No descartar diretamente no ambiente
Dispose properly
Desechar adecuadamente