LABORATRIO SO LUIZ

Procedimento Operacional Padro DOSAGEM DO COLESTEROL HDL

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COLESTEROL HDL
1. NOME E SINONMIAS Colesterol HDL HDL 2. FUNDAMENTO Os quilomicrons, as lipoprotenas de muita baixa densidade (VLDL) e as lipoprotenas de baixa densidade (LDL) so quantitativamente precipitadas com fosfotungstato e ons magnsio. Aps centrifugao, o sobrenadante contm as lipoprotenas de elevada densidade (HDL), cujo colesterol quantificado fotometricamente mediante as reaes acopladas descritas abaixo. A absorbncia do complexo formado (vermelho), medida em 500 nm, diretamente proporcional concentrao de colesterol HDL da amostra. CHE steres do colesterol Colesterol cidos graxos

CHOD Colesterol O Colest - 4 - en - ona H O 2 2 2

POD 2H2O2 fenol 4 Aminoantip irina 4H2O quinonei min a

3. APLICAO E SIGNIFICADO CLNICO A dosagem do Colesterol HDL no sangue, juntamente com a de triglicrides e de colesterol total, empregada principalmente na avaliao de risco de doena arterial coronariana. As lipoprotenas de lata densidade (HDL = High Density Lipoproteins) exercem uma ao importante na concentrao do colesterol nos tecidos. Atuam ainda no retorno do colesterol dos tecidos perifricos para o fgado. A taxa de Colesterol HDL mantm uma relao inversa com o fator de risco de DAC (Doena Arterial Coronariana), isto , quanto maior o seu teor na circulao menor o risco de DAC. Deste modo, o colesterol HDL exerce um efeito protetor contra a aterosclerose. A prevalncia da enfermidade coronariana muito maior em indivduos com nveis reduzidos de HDL do que em indivduos com teores elevados. Ao contrrio, a taxa de Colesterol LDL est diretamente relacionada com o fator de risco de DAC, isto , quando maior o seu teor na circulao maior a probabilidade do individuo desenvolver essa doena. O colesterol, a hipertenso arterial, o fumo e a intolerncia glicose so quatro grandes fatores para o desenvolvimento da DAC. Exerccios fsicos podem aumentar o Colesterol HDL, assim como algumas drogas: lovastatina, cido nicotnico, ciclofenil, cimetidina, etanol, estrognios, terbutalina. Valores baixos de Colesterol HDL so encontrados em indivduos obesos, de vida sedentria, fumantes, diabticos, na colestase, hepatopatia, arterioclerose, coronariopatia, etc. 4. AMOSTRA Preparo do Paciente: A amostra de sangue deve ser colhida aps um jejum de 12 horas para evitar a interferncia da lipemia ps-prandial que geralmente est presente em amostras obtidas sem jejum. Amostras utilizadas: Soro. Estabilidade e armazenamento da amostra: O analito estvel por 7 dias a 2-8 C. Volume mnimo utilizado para anlise: 1 ml Critrios para rejeio da amostra: No utilizar amostras fortemente hemolisadas. Tratamento e pr-tratamento da amostra: Centrifugar a amostra colhida em tubo seco a 3.000 rpm por 5 minutos. 5. MATERIAL REQUERIDO E EQUIPAMENTOS Centrfuga; Tubos e Micropipetas; Agitador Vrtex; Banho - Maria; Mltiplo Marcador de Tempo; Bioplus 200F.

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6. REAGENTE UTILIZADO COLESTEROL HDL PP - GOLD ANALISA DIAGNSTICA LTDA Componentes do kit: Padro 40 mg/dL e Precipitante. Estabilidade: Os reagentes so estveis at o vencimento da data de validade impressa no rtulo do produto e na caixa quando conservados em temperatura entre 2-8C bem vedados. Reagente No Fornecido: Reagente de Cor do Kit de Colesterol PP da Gold Analisa. Dever ser adquirido separadamente 7. PROCEDIMENTO Notas 1-A relao amostra/ precipitante deve ser mantida em 1/1. 2-O sobrenadante obtido deve ser completamente lmpido e claro. 3-Aps a centrifugao, remover o sobrenadante lmpido dentro de 15 minutos para evitar resultados falsamente elevados. 4-Algumas amostras, principalmente as lipmicas, podem apresentar o sobrenadante lmpido com uma camada na sua superfcie que no deve ser pipetada para evitar resultados falsamente elevados. 5-Amostras lipmicas e algumas no lipmicas podem resultar em sobrenadantes turvos. Nestes casos, diluir o soro a com soluo de NaCL 150mmol/L (0,85%) e repetir a precipitao. Realizar a dosagem e multiplicar o resultado final por 2. No caso de persistir a turbidez ou de no obter uma boa sedimentao do precipitado, a amostra no poder ser utilizada para dosagem do Colesterol HDL por esta metodologia. 6-Para a determinao do colesterol HDL no sobrenadante, utilizar o Reagente de Cor do Kit de Colesterol - PP da Gold Analisa. Precipitao das fraes VLDL e LDL do Colesterol. 1- Identificar os tubos de centrfuga com as letras HDL e o nmero da amostra do paciente e pipetar:
Amostra Precipitante 250 L 250 L

2-Agitar no Agitador Vrtex por 30 segundos. 3-Centrifugar a 3500 rpm durante 15 minutos para obter um sobrenadante lmpido. 4- Pipetar o sobrenadante lmpido, imediatamente aps a centrifugao, tomando o cuidado para no ressuspender o precipitado para evitar resultados falsamente elevados. Ver notas acima Procedimento Manual 1- Identificar os tubos de ensaio como "Branco" (HDL/B), "Padro" (HDL/P) e "Teste" (HDL/Nmero da amostra do paciente, EX: HDL/1) 2- Proceder a pipetagem conforme tabela abaixo: Tubos Branco Padro Teste Reagente de Cor 1000 L 1000 L 1000 L Padro (1) 100 L Amostra 100 L (Sobrenadante) 3- Misturar bem e incubar os tubos por 10 minutos em banho-maria a 37C. 4- Selecionar no aparelho Bioplus 200F a programao 11 referente ao Colesterol HDL. 5- Calibrar o aparelho Bioplus 200F com gua destilada ou deionizada. 6- Fazer a leitura do tubo Branco. 7- Fazer a leitura do tubo Padro. 8- Ler as concentraes de Colesterol HDL dos tubos Teste. 9- Passar o resultado para a ficha de resultados do paciente. Obs: A cor estvel por 60 minutos. 8. CLCULOS DO RESULTADO O equipamento j emite a concentrao na unidade programada mg/dL. Clculo da Concentrao do Colesterol VLDL e LDL

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A concentrao do Colesterol VLDL e LDL pode ser calculada atravs da equao de Friedewald, que muito exata para amostras cujos valores de triglicrides no ultrapassem 400 mg/dL e no pertenam a pacientes portadores de lipoprotenemia do tipo III. Equao de Friedewald Colesterol LDL = Colesterol Total (HDL + VLDL) Colesterol VLDL = Triglicrides 5 9. CONTROLE DA QUALIDADE Controle Interno Calibrao peridica de micropipetas e equipamentos utilizados, controle de temperatura da geladeira para armazenamento dos kits. Observar a validade dos kits. Observar os sinais de deteriorao dos reagentes como presena de partculas e turbidez, no utilizar o reagente de cor quando sua absorbncia medida contra gua for igual ou maior que 0,300. Utilizao de soro controle patolgico nas anlises realizadas no primeiro dia til de cada ms. 10. VALORES DE REFERNCIA Os valores de referncia so determinadas a partir de dados epidemiolgicos, calculados estatisticamente, que relacionam os nveis do colesterol com a prevalncia de doena arterial coronariana (DAC). 1-Adultos
Colesterol Total Valor desejvel: <200 mg/dL Valor limtrofe: 200 a 239 mg/dL Valor Elevado: 240 mg/dL ---------------Colesterol HDL Valor desejvel: 60 mg/dL Valor baixo: <40 mg/dL -----------------------------------Colesterol LDL Valor desejvel: < 130 mg/dL Valor limtrofe: 130 a 159 mg/dL Valor elevado: 160 a 189 mg/dL Valor muito elevado: 190 mg/dL

2-Crianas e adolescentes
Colesterol Total Valor desejvel: < 170 mg/dL Valor limtrofe: 170 a 199 mg/dL Valor elevado: 200 mg/dL Colesterol HDL Valor desejvel: > 40 mg/dL Valor baixo: <35mg/dL Colesterol LDL Valor desejvel: < 110 mg/dL Valor limtrofe: 100 a 129 mg/dL Valor elevado: 130 mg/dL

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11. LINEARIDADE A reao linear at 200 mg/dL. Para valor acima de 200 mg/dL, diluir a amostra com NaCl 0,9%, realizar nova dosagem e multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluio empregado. 12. INTERFERENTES Influncias Pr-Analticas Os valores de Colesterol HDL de uma mesma pessoa e em ocasies diferentes podem variar consideravelmente devido s variaes biolgicas e tambm as variaes do mtodo analtico. As concentraes de colesterol HDL podem ainda variar devido a: dietas, prtica de exerccio, variao do peso corporal, ao de hormnios, uso de lcool, fumo. Interferncias Analticas. A bilirrubina at 5 mg/dL, lipemia (triglicrides at 750 mg/dL), hemlise (hemoglobina at 180 mg/dL) no produzem interferncias significativas. Valores de bilirrubina acima de 5 mg/dL produzem resultados falsamente diminudos. Valores de triglicrides acima de 750 mg/dL produzem resultados falsamente elevados.

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13. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 1- Burstein M, Scholnick HR, Morfin R. J Lipid Res 1970; 11: 583. a 2- Burtis CA, Ashwood ER. Tietz Fundamento de Qumica Clnica, 4 Ed - Guanabara Koogan; 1998. 3- Grove TH. Clin Chem 1979; 25:560. 4- Warnick RG, Naguyent T, Albers AA. Clin Chem 1985; 2:217-222. 5- COLESTEROL HDL-PP, Instrues de Uso, Gold Analisa Diagnstica. Nome Samuel Martins Delgado Neto Samuel Martins Delgado Neto Samuel Martins Delgado Neto Assinatura Data 24/03/2013 24/03/2013 24/03/2013 ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___

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