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CAT.NUMBER: S9024/S9048
STORAGE: 2-8oC

KIT DE TESTE FLUXO LATERAL

Para a determinação quantitativa de histamina em
peixe fresco ou amostras de peixe cru congelado,
descongelado e peixe enlatado.
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www.prognosis-biotech.com

Este Kit de teste fluxo lateral foi desenvolvido por ProGnosis Biotech S.A.

ProGnosis Biotech S.A. possui certificação ISO 9001:2015 homologado por

TÜV Hellas (TÜV NORD).

Use apenas a versão atual da Folha de Dados do Produto incluída com

o kit.

Symmetric Histamine, S9024/S9048, é um kit de teste de fluxo lateral para a

determinação quantitativa de histamina, em peixes frescos, enlatados e congelados
(matrizes validadas: atum, sardinha, anchova, bonito, cavala, bacalhau, marlim e
farinha de salmão).

Este kit contém todos os reagentes necessários para 48 ou 96 reações.

Matrizes:
Tipo I: Atum, espécies relacionadas ao atum, bonito, farinha de salmão,
sardinha, anchova, marlin, bacalhau, cavala.

• Preparação da amostra: Extração;

• Tempo de teste (tempo de incubação após a preparação de
amostras e reagentes) 3 minutos;
• Alcance: 0 – 300 ppm;
• Temperatura de execução do ensaio: 21 – 25,5 ºC;
• Validade: 12 meses;
• Temperatura de armazenagem: 2 – 8 ºC.
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1. Descrição
Symmetric Histamine é um teste de fluxo lateral inovador, utilizando recursos
- - de última geração
para a detecção quantitativa de histamina em amostras de peixe cru fresco ou descongelado
e peixe enlatado.

2. Informações Gerais
Histamina é uma amina primária heterocíclica e é o subproduto da descarboxilação do aminoácido
L-histidina pela enzima histidina descarboxilase. As espécies de peixes mais comuns que tendem
a acomodar HA pertencem a família escombóide de peixes. (atum, mahi mahi, marlim, anchova,
sardinha bonito, arenque e cavala.)

3. Princípio do método
O teste de fluxo lateral quantitativo é baseado nos princípios do ensaio de imunocromatografia.
Os poços das tiras de microtitulação contêm anticorpos específicos de HA conjugados com ouro c
oloidal. HA é extraído das amostras com água destilada ou desionizada. O extrato diluído é adicionado
ao poço. Uma tira medidora com duas linhas de captura, teste e controle, é mergulhada no poço.
A mistura suspensa começa a fluir verticalmente na tira e passa pelas duas linhas. Durante
a execução, HA (se for presente) liga-se aos anticorpos. Um teste válido deve sempre ter a linha
de controle superior vermelha. Se a amostra está livre de HA, um desenvolvimento de cor ocorre na
linha de teste, indicando a ausência de HA na amostra. Pelo contrário, a presença de HA na amostra
causará um sinal colorido reduzido na linha de teste. A intensidade da cor da linha de teste é
indiretamente proporcional à concentração de HA presente nas amostras.

4. Reagentes Fornecidos

O kit Symmetric Histamina contém reagentes e materiais suficientes para 48/96 medições.

Reagentes (Armazenar a 2—8ºC) Quantidade para 48 poços Quantidade para 96 poços

Potes, cada um com 1 tira de 8 micro poços

3 6
de reagente e 8 tiras de medição

Tubos de diluente de amostra (6ml) 24 48

5. Materiais necessários, mas não fornecidos

• Um triturador suficiente para homogeneizar a amostra;

• Balança com capacidade de medição de 0 - 50 g e cilindro graduado - 100 mL;
• Água destilada ou desionizada;
• Filtro de papel Whatman # 1 ou equivalente;
• Funil de filtro e plástico de laboratório diversos ou tubos de vidro 50 - 125 mL;
• Rolo de tubo ou misturador Vortex;
• Micropipetas de canal único ajustáveis de 200 ou 300 μL com pontas;
• Software S-Flow junto com dispositivo de leitura correspondente fornecido pela lateral Logic ltd.

S-Flow software along with matching scanner device provided by lateral logic ltd
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6. Instruções de armazenagem
Armazene os componentes do kit -entre 2 - 8 ° C. Não congele nenhum dos componentes
fornecidos. Volte a selar as tiras não usadas no tubo de armazenamento, juntamente com
o saco dessecante fornecido. A data de validade do kit e os reagentes estão declarados em
seus rótulos e nenhuma garantia de qualidade é aceita após o vencimento. A expiração dos
componentes do kit só pode ser garantida se os componentes forem armazenados corretamente
e o reagente não está contaminado devido ao manuseio anterior. Não troque componentes
individuais entre os kits de diferentes números de lote.

7. Seguança e precauções de uso

Todos os reagentes devem estar em temperatura ambiente (18 - 24 ° C) antes do uso
(pelo menos meia hora) e cobertos quando não estiverem em uso. Use uma ponta de pipeta
de plástico descartável limpa para cada reagente, para evitar contaminação cruzada.
8. Preparação de amostras
8.1 Amostras de peixe fresco ou cru congelado/descongelado
• Limpe e eviscere três peixes;
• Corte três pedaços de seção transversal com 2,5 cm de espessura, da parte de trás
.da barbatana peitoral, a meio caminho para a abertura e uma posterior para a abertura;
• Desossar fatias e misturar ou moer as amostras combinadas até ficarem homogêneas.
Armazene as amostras a 2–8 ° C até serem analisadas;
• Adicione 10 g da mistura homogênea a um frasco de extração descartável limpo contendo
190 mL de água destilada ou desionizada;
• Feche o frasco e misture usando um agitador rolador por 5 minutos
(ou vortex por 1 minuto);
• Deixe o tecido assentar no fundo do frasco por cerca de 30 segundos, filtre 5 - 10 mL
do extrato em um papel de filtro Whatman # 1 (ou equivalente) e colete o filtrado.

8.2 Peixe enlatado

• Coloque todo o conteúdo da lata, carne e líquido no liquidificador. Misture até ficar homogêneo.
Armazene as amostras a 2–8 ° C até serem analisadas;
• Adicione 10 g da mistura homogênea a um frasco de extração descartável limpo contendo 190 mL
de água destilada ou desionizada;
• Siga o procedimento de extração e diluição conforme descrito no item 8.1.

NOTA 1: TA amostra extraída deve ter um valor de pH de 6,2- - 7,5. Se o pH for inferior a 6,2,
deve ser neutralizado com NaOH.
NOTA 2: Use apenas frascos de plástico (por exemplo, polipropileno, PP) para a preparação da
amostra. O HA adsorve nas superfícies de vidro, o que leva a recuperações reduzidas.
NOTA 3: ICaso o usuário faça uma diluição adicional 1: 1 (duas vezes), 1: 2 (três vezes), 1: 3
(quatro vezes) ou 1: 4 (cinco vezes) de filtrado com água destilada ou desionizada, a faixa de
quantificação torna-se 0-600 ppm, 0-900ppm, 0-1200 ppm ou 0-1500 ppm, respetivamente. Em
seguida, dilua 200μl do filtrado diluído em água acima em 6ml de diluente de amostra e
multiplique o resultado final (ppm) por 2, 3, 4 ou 5, respetivamente.
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9. Metodo do Procedimento
1. Antes de abrir os reagentes, retire o kit da geladeira e espere até que a temperatura dos
reagentes atinja a temperatura ambiente. A temperatura de execução do ensaio recomendada
é 21-25,5 ºC.
2. Abra um recipiente de plástico e retire tantas tiras de teste e micro poços quantas as amostras
a serem testadas.
3. O pote com tiras deve estar sempre bem fechado após a retirada dos reagentes.
4. Coloque o (s) micropoço (s) em um porta-micropoços.
5. Dispense 200 µl de filtrado diluído no micropoço e pipete para cima e para baixo 4 vezes para
misturar completamente as partículas de ouro liofilizado na amostra, evitando bolhas. A amostra deve
se tornar uma cor rosa uniforme. .

6. Coloque o número apropriado de tiras nos micropoços imediatamente.

7. Quando os 3 minutos acabarem, retire as tiras medidoras dos micropoços.
8. Remova a almofada de amostra de algodão branco da tira. Pegue a tira com a mão na parte
superior (onde estão as marcas coloridas) e romava a almofada branca com os dedos. Não use toalha
de papel ou qualquer outro material.
9. Coloque a tira dentro do suporte de plástico para ser digitalizado. No caso do scanner EPSON,
as tiras devem estar voltados para baixo (invertidos) e o lado colorido da tira deve estar voltado para
a marcação laranja do suporte.
10. Use o software S-flow para quantificar os resultados dentro de 10 minutos após o final da
análise. O software usará uma curva específica de lote para calcular os resultados (ppm) de
acordo com a amostra da matriz modelo.

10. Interpretação Visual

Quando o tempo de teste é concluído (3 min), a tira de teste também pode ser lida visualmente e
interpretada de acordo com a figura a seguir.

Índice de interpretação visual do resultado

Linha de
controle

Linha de
teste
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11. Especificações Gerais
• O LOD do método é 5,3 ppm.
• O LOQ do método é 8 ppm.
• IC50 = 20 - 38 ppm.
• Valor quadruplicado em 50ppm CV ≤ 9%
Matrizes:
Tipo I: Atum, espécies relacionadas ao atum, bonito, farinha de salmão, sardinha, anchova,
marlim, bacalhau, cavala.

12. Especificidade

X-reactive compound Cross Reactivity (%)

Histamina 100
3-metilhistamina <0.01
Tiramina <0.01
Triptamina <0.01
Putrescina <0.01
Histidine <0.01
Cadaverina <0.01
Espermina <0.01
Trimetilamina <0.01
Serotonina <0.01
L-triptofano <0.01
L-fenilalanina <0.01
L-histidina <0.01
L-tirosina <0.01

13. Avaliação de desempenho

13.1 Materiais de referência
Vários materiais de referência estão sendo usados para a avaliação de cada produto da ProGnosis Bio tech S.A.
no contexto do Controle de Qualidade realizado pelo Departamento de Controle de Qualidade.
Solicite um relatório de validação, incluindo os resultados, em info@prognosis-biotech.com.

14. Referências
[1] Papageorgiou G, Ntantasios AN, Voulgari D, Badra K, Gotsopoulos M and Athanasiou SD, An innovative
symmetric lateral flow system for the quantification of Aflatoxin M1. 8th International Symposium on RAFA,
7-10 November 2017, Prague, Czech Republic.
[2] Ntantasios AN, Arampatzis A, Voulgari D, Badra K, Papageorgiou G, Athanasiou SD and Gotsopoulos M,
Innovative lateral flow method for the quantification of Aflatoxin M1. IDF DAIRY SUMMIT, 29 October -03
November 2017, Belfast, Northern Ireland, UK.
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