Roteiro Interativo de Técnicas Hematológicas

Universidade Federal Fluminense
Faculdade de Veterinária
Departamento de Clínica e Cirurgia
Disciplina de Laboratório Clínico Veterinário

“Roteiro Interativo de Técnicas
Hematológicas”
Trabalho de Monitoria 2003
Ananda Müller Pereira

Isabel Correia
Orientador: Márcia de Souza Xavier

ROTEIRO INTERATIVO
DE TÉCNICAS
HEMATOLÓGICAS
1. Confecção do esfregaço
-> Material:
Lâmina com ou sem parte fosca para marcação.
Compressa de gaze para limpeza da lâmina.
Grafite 2B para identificação.
Lâmina extensora – tem as arestas recortadas para

que o esfregaço seja mais estreito que a lâmina.
-> Procedimento:
Homogeneizar o sangue.
Os destros devem pegar a lâmina com a mão esquerda,
colocando o polegar em uma das extremidades e o
indicador na outra.
Colocar a gota de sangue (utilizar tubo capilar, pipeta
automática, ou até a tampa do tubo para isso).

Colocar a extensora na lâmina, sem encostar na gota, e
simular o movimento.
Encostar suavemente na gota, até que esta se espalhe.
Com a mão direita, segurar por cima da extensora, e
deslizá-la pela lâmina calma e lentamente, sem
interrupções.
A inclinação dependerá da fluidez do sangue.
Ex: sangue anêmico - extensora em angulo mais obtuso
(mais alta).
Secar com movimentos de agitação.
Identificar o esfregaço.
Confecção do esfregaço
2. Técnicas de coloração
2.1 Corante hematológico instantâneo
Os corantes devem ser abertos no momento da
utilização
O primeiro tubo contém o fixador. A lâmina deve
permanecer um tempo mínimo de 8 a 10 segundos.
O segundo tem corante vermelho – 8 a 10 segundos no
máximo.
O terceiro tem corante azul – 5 a 8 segundos no

máximo.
Cada fabricante possui um tempo determinado para a

coloração, este tempo pode variar de acordo com o
tempo de uso dos corantes.
Depois de colocar nos corantes, deve-se lavar a lâmina

com água comum para retirar o excesso, por cerca de
30 segundos.
Deixar secar.
Observar no microscópio toda a lâmina em objetiva
de 40X, com uma fina camada de óleo, sem que este
porém, encoste na objetiva. Depois, observar por
imersão (objetiva de 100X).

Corante hematológico instantâneo
2.2 MGG (May Grünwald / Giemsa)
Colocar o corante sobre todo o esfregaço, sem deixar
transbordar (deixar por 2 minutos).
Colocar água destilada, e soprar com uma pipeta vazia
e seca, para homogeneizar, formando um menisco
(mesma quantidade que a colocada de corante – não
deixar transbordar, deixar por 6 minutos).

2.2 MGG (May Grünwald / Giemsa)
Lavar com água corrente.
Observar no microscópio em imersão (objetiva de
100x).
3. Confecção do hematócrito
(Volume Globular ou VG)
Depois de homogeneizar o sangue, o tubo deve ser
aberto e inclinado, colocando-se o tubo capilar no seu
interior.
O sangue entrará no tubo por capilaridade, deve-se
encher 2/3 do tubo capilar.
Limpar com gaze o tubo capilar.

(Volume globular ou VG)
Fechar uma das extremidades do capilar. Pode-se
colocá-lo na chama do bico de Bünsen para fechar
(sempre a extremidade sem sangue), com cuidado para
a chama não entrar em contato com o sangue, ou usar
massa apropriada, colocando na extremidade com
sangue.
Fechamento do capilar
(volume globular ou VG)
Abrir a centrífuga e colocar o tubo com a parte
fechada voltada para fora. Tampar a mesma e depois
fechá-la apertando o botão lateral.
Apertar o botão de armar (que já está programado
para cinco minutos).

A centrífuga desliga sozinha. Retirar os capilares,
pegar a régua para leitura de hematócritos, colocar o
tubo sobre esta, de forma que o sangue coincida com
uma das extremidades e o plasma com a outra.
Verificar o resultado do hematócrito.

Centrífuga
Observar se o plasma está: ictérico (amarelado),
hemolisado (avermelhado), lipêmico (esbranquiçado) ou
incolor (que é o normal). O plasma dos herbívoros é
fisiologicamente amarelado.
Capilares com Plasmas Variados
Normal
Hemolisado
Ictérico
Plasma Ictérico
Plasma
Hemolisado
Plasmas Variados
Plasma hemolisado Plasma lipêmico Plasma ictérico

4. Contagem na câmara de Neubauer
Contagem Contagem
de de
Leucócitos Hemácias
Contagem
de
Plaquetas
4. Contagem na câmara de Neubauer
Deve-se começar a contar em , depois em e por

último dentro do quadrado, ou seja, em . Quando as
linhas e forem compostas por 3 linhas, conta-se
até a linha do meio.
Montagem da câmara de Neubauer
Câmara espelhada
Câmara comum
Lembrete: Não esqueça de limpar a
câmara e secá-la com gaze, antes
das contagens. Não esqueça de
homogeneizar as soluções antes de
montar a Câmara de Neubauer.
4.1 Contagem de Hemácias
Utilizar solução fisiológica ou líquido de Gower ou
Marcano.
A diluição é de 1:200 (4mL do diluente para 20µL de
sangue homogeneizado).
Utilizar pipeta de 5mL ou 10mL.
A solução deve ficar turva (se não estiver é porque
ocorreu hemólise).
4.1 Contagem de Hemácias
A contagem deve ser feita em até 20 minutos.
Visualização: objetiva de 40X (obs: iniciar na objetiva
de 10X centralizar o primeiro quadrado a ser contado
e depois passar para a de 40X).
Contar 5 quadrados (dos 25 do quadrado central do
retículo de Neubauer).
O resultado deve ser multiplicado por 10.000.
Unidade: Hemácias/µL ou Hemácias/mm³.

4.2 Contagem de Leucócitos
Utilizar líquido de Türk.
A diluição é de 1:20 (0,38mL do diluente para 20µL de
sangue).
Utilizar pipeta de 1mL (pode ter ou não as divisões
centesimais. Se não tiver, pode-se adicionar 0,4mL de
diluente no tubo e, depois, com a pipeta automática
retirar 20µL).
4.2 Contagem de Leucócitos
O teste deve ser realizado em até 30 minutos.
Visualização: Objetiva de 10X.
Contar 4 quadrados de 1mm2.
O resultado deve ser multiplicado por 50.
Unidade: Leucócitos/µL ou Leucócitos/mm³.

4.3 Contagem de Plaquetas
Utilizar oxalato de amônio a 1% (líquido de Brecher).
A diluição é de 1:100 (1,98mL do diluente para 2µL de
sangue homogeneizado).
Utilizar pipeta de 2mL. (pode ter ou não as divisões
centesimais. Se não tiver, pode-se adicionar 2mL de
diluente no tubo e, depois, com a pipeta automática
retirar 20µL).
A contagem deve ser feita após 2 minutos. Passados

os 2 minutos, deve-se colocar a câmara de Neubauer,
montada com a solução, dentro da câmara úmida por
10 – 20 minutos.
Visualização: objetiva de 40X, porém deve-se iniciar

na de 10x (proceder de forma semelhante à
hematimetria).
Contar os 25 quadrados do quadrado central.

O resultado deve ser multiplicado por 1.000.
Unidade: Plaquetas/µL ou Plaquetas/mm³.

Grumos de plaquetas no esfregaço sangüíneo
Diluições: procedimento
Marcano Türk
Oxalato de Amônio
5. Contagem de reticulócitos
Feita somente em animais anêmicos.
Colocar em um tubo pequeno uma gota de NAM (Novo
Azul de Metileno) para 20µL de sangue
homogeneizado.
Aguardar 20 minutos
Confeccionar um esfregaço.
Depois de secar, deve-se identificar e observar em
imersão. Contar 500 células. Em seguida, fazer a
proporção: a cada 500 hemácias quantos reticulócitos
foram contados (%).

O resultado é expresso em %.
Obs: Não se conta reticulócito em eqüídeos.

Reticulócitos
Reticulócito
Reticulócito
Reticulócitos
6. Dosagens
6.1 Dosagem de Hemoglobina
As soluções necessárias para realização da dosagem
de hemoglobina, são vendidas na forma de kit. Neste
há um frasco contendo uma solução que quando
misturada a água destilada, origina o reativo de
Drabkin; e ampolas que quando adicionadas a água
destilada, formam a solução padrão de hemoglobina.
Esses procedimentos vêm descritos numa bula que
acompanha o produto.
Dosagens
Utilizar Reativo de Drabkin.
Considerando que serão quatro grupos realizando as
dosagens, cada grupo deve efetuar as seguintes
etapas:
Diluir 20µL de sangue em 5mL de Reativo de Drabkin.
O procedimento deve ser feito em três tubos.
Em um outro tubo, diluir 20µL de solução padrão em
5mL de Reativo de Drabkin. Deve-se utilizar luvas na
manipulação do padrão .
Utilizar pipeta de 5 ou 10mL.
A dosagem deve ser feita
após no mínimo 5 minutos e
no máximo 2 horas.
A solução terá cor
ligeiramente marrom.
Como realizar a leitura de Hb?
Passar as 4 diluições para tubos menores e limpar com
gaze.
Verificar se o branco (tubo com água destilada ou
Reativo de Drabkin) está no aparelho.
Ligar o espectofotômetro, ir até o botão número 1 e
verificar se está em 540nm (comprimento de onda).

Ir ao botão número 2 e verificar se está em T (de
tramitância).
Ir ao botão número 3 e colocar em 100 (pode-se
utilizar o botão maior – ajuste mais grosseiro, ou o
menor – ajuste mais fino).

Ir ao botão número 2 e colocar em A (de absorbância)
e verificar se está zerado. Se não estiver, voltar ao
botão número 3 com velocidade mais lenta.
Colocar os tubos (primeiro o tubo com o padrão) e
anotar os resultados.
Colocar o branco de volta, colocar o botão número 2
em T e desligar o aparelho.
Espectofotômetro
Como realizar os cálculos?
Após a dosagem, haverá 4 resultados; o resultado do
padrão da Hb de cada grupo, o primeiro resultado da
leitura da hemoglobina (Hb1), o segundo resultado da
leitura da hemoglobina (Hb2), o terceiro resultado da
leitura da hemoglobina (Hb3).

Como realizar os cálculos?
Se os valores de Hb1, Hb2, e Hb3 forem semelhantes,
deve-se fazer uma média e usá-la para o cálculo.
Se a variação for significativa, deve-se então realizar
uma regra de três para cada resultado de
hemoglobina.
6.2 Dosagem de Proteínas Totais
Zerar o refratômetro com água destilada (deve-se
colocar a água e fechar, o azul da marcação deve
estar na linha do W ou 1.000).
Secar o prisma do refratômetro com gaze.

Depois de rodar o hematócrito na centrífuga e
verificar seu resultado na régua, quebrar o mesmo
acima da capa leucocitária (camada branca) e retirar
os cacos de vidro que sobrarem, (mantendo o capilar
na horizontal).
Colocar o plasma no prisma do refratômetro.

Fechar o refratômetro.
Utilizar a primeira escala do refratômetro (a da
esquerda) – g/dL.
Verificar o resultado, observando que a escala sobe
de 0,2 a 0,2g/dL.
Limpar o refratômetro com uma gaze.
Não considerar valores quebrados.

Dosagem de Proteínas Totais
Capilar quebrado
Refratômetro
Escala do refratômetro
Escala de dosagem de proteínas

6.3 Dosagem de Fibrinogênio
Centrifugar 4 ou 6 microhematócritos
Dosar as proteínas totais de dois ou três destes.
Colocar os demais em banho-maria a 56oC, em tubos
de hemólise com água suficiente para cobrir o plasma
por 3 minutos.
6.3 Dosagem de Fibrinogênio
Os tubos devem ir novamente para a centrífuga por 5
minutos.
Depois deve-se quebrá-los e colocá-los no
refratômetro para fazer a leitura.
O primeiro resultado (proteínas totais) deve ser
diminuído deste, encontrando assim o fibrinogênio
(expresso em mg/dL).
Dosagem de Fibrinogênio
Microcapilares
Banho-Maria
Refratômetro
7. Hematoscopia
7.1 Hematoscopia Eritrocitária
Efetuada na região anterior à franja.
Deve-se observar:
a) Tamanho (índice hematimétrico correspondente – VGM):
a.1) Normocitose (tamanho normal).
a.2) Macrocitose (tamanho aumentado).
a.3) Microcitose (tamanho diminuído).

b) Coloração (relacionada à quantidade de hemoglobina
contida no eritrócito; índice hematimétrico
correspondente – CHGM):
b.1)Normocromia (coloração normal).
b.2)Anisocromia (variação na coloração):

b.2)Anisocromia (variação na coloração):
Policromasia (eritrócito com coloração policromática,
indicando a absorção de dois tipos de corantes –
ocorre pela presença de hemácias jovens -
reticulócitos. No cão, é comum encontrar até 1% de
reticulócitos).
Hipocromia (eritrócito com coloração diminuída,
indicando diminuição na quantidade de hemoglobina).

Hipercromia (Não observada na hematoscopia, uma
vez que, não existe condição fisiológica para formação
de eritrócitos hipercrômicos. Portando, um CHGM alto
deve ser considerado como erro de cálculo ou
hemólise).
As alterações podem variar de discretas (+) a
acentuadas (+++).
c) Forma
c.1) Cão – Hemácias grandes, quando comparadas aos
outros animais domésticos, bicôncavas, com halo de
palidez central.
c.2) Felino – Hemácias bicôncavas, com halo de
palidez central muito mais discreto.
- Possuem discreta crenação.
c.3) Eqüídeos – Hemácias bicôncavas, com pequeno
halo de palidez central muito mais discreto.

c.4) Ruminantes – Hemácias discóides sem halo
central.
c.5) Poiquilocitose (morfologia anormal).
Acantócitos – Prolongamentos em forma de dedo de
luva.
Esferócitos – Hemácias pequenas e arredondadas,
que se coram intensamente e não possuem o halo de
palidez central.
Eliptócitos – Hemácias ovais.

Esferócitos
c.5) Poiquilocitose (morfologia anormal).
Leptócitos – Eritrócitos com alteração de membrana,
de maneira que esta se dobra, ficando a hemácia com
uma parte mais escura. Pode ser em ponte ou em alvo.
Esquizócitos – Hemácias de forma irregular ou bizarra
(lágrima, raquete, foice).
Excentrócitos – Hemácias com concentrado de
hemoglobina em um dos pólos e área não corada na
região contra-lateral.
Formas evolutivas dos eritrócitos
Eritroblasto/Rubriblasto
Pró-rubrícito
Rubrícito
Meta-rubrícito
Eritrócito basofílico com corpúsculo de Howell-Jolly
Eritrócito basofílico
Eritrócito maduro
Eritrócitos de cão com morfologia normal
Anisocitose e policromasia eritrocitárias
policromatófilo
Meta-rubrícito
d) Inclusões
d.1) Corpúsculo de Howell-Jolly – Eritrócito com
fragmentos de núcleo, formando inclusões de cor
púrpura. Pode aparecer tanto na hemácia
policromática como no eritrócito.
d.2) Ponteado basófilo – Hemácias com pontos azuis
(presença de RNA), comum em ruminantes. Em
carnívoros indica intoxicação por chumbo.

Corpúsculos de Howell-Jolly
Meta-rubrícito
d.3) Inclusões parasitárias – Anaplasma, Babesia,
Haemobartonella.
d.4) Inclusões Viróticas - Sinegaglia Lentz.
d.5) Inclusões tóxicas – Corpúsculos de Heinz
(inclusão arredondada que aparece em uma das
extremidades da hemácia).
Corpúsculos de Heinz (Coloração NAM)
Babesia
Foto: Nádia Almosny

Babesia

Haemobartonella
Sinegaglia Lentz

7.2 Hematoscopia Leucocitária
Feita nas bordas medianas do esfregaço, ao mesmo
tempo que a leucometria específica.
Deve-se verificar: aspecto, tamanho e presença de
inclusões como Ehrlichia.

Esfregaço sangüíneo:
número crescente de leucócitos
A – animal leucopênico
B – animal com LG
normal
C - animal com leucocitose

Ehrlichia

Ehrlichia

8. Morfologia dos Leucócitos
8.1 Granulócitos
a) Basófilos
Possuem grânulos citoplasmáticos que variam da cor lilás

(basofílicos) ao azul enegrecido, que acompanham a cor
do núcleo.
a.1) Felinos: apresentam núcleo segmentado ou lobulado

com cromatina frouxa, similar ao núcleo do monócito.
Citoplasma revestido por inúmeros grânulos
arredondados, de tom lilás, bem claro, quase
imperceptível.
a.2) Cães: apresentam núcleo segmentado ou lobulado.
Citoplasma de cor arroxeada ou acinzentada, com
poucos e discretos grânulos escuros, podendo ser bem
esparsos em algumas células.
a.3) Herbívoros: devido à grande quantidade de
grânulos, não se visualiza o núcleo. Possuem aspecto de
borrão de carimbo.
b) Eosinófilos
Possuem grânulos citoplasmáticos alaranjados.
b.1) Felinos: grânulos em forma de microbastonetes,
muito pequenos, que podem cobrir o núcleo. O
aspecto é de grão de areia. Pode-se visualizar
“tracinhos” (sentido longitudinal) ou “bolinhas”,
quando a célula está inteira. Quando a célula está
rompida, observa-se melhor a morfologia dos
grânulos.
b.2) Cães: grânulos redondos que variam em tamanho
e quantidade. Pode haver vacúolos redondos e
refringentes no citoplasma.
b.3) Eqüídeos: grânulos alaranjados grandes, muitas
vezes encobrindo o núcleo. Estes grânulos forçam a
parede da célula, que fica parecendo uma amora.
b.4) Ruminantes e suínos: grânulos menores e
arredondados, com tamanho e distribuição
homogêneos. Podem encobrir o núcleo.

Eosinófilo de Cão
Eosinófilo de Eqüino
Eosinófilo de Felino
c) Neutrófilos
Fases evolutivas:
c.1) Mielócito – Núcleo redondo, cromatina
esponjosa e citoplasma basofílico.
c.2) Metamielócito – Núcleo riniforme, cromatina
mais condensada e citoplasma menos basofílico, em
relação ao segmentado.
c.3) Bastão – Núcleo em forma de bastão e cromatina
condensada. Citoplasma incolor ou levemente
basofílico.
c.4) Segmentado – Núcleo lobulado ou segmentado até
cinco vezes, com cromatina densa, roxo-escura.
Citoplasma incolor ou levemente rosado em todas as
espécies, sendo que esta coloração é bem mais intensa
nos bovinos.
Fases evolutivas dos neutrófilos
Mieloblasto com nucléolo
Pró-granulócito
Mielócito neutrofílico
Metamielócito neutrofílico
Bastão neutrofílico
Neutrófilo monolobado
Neutrófilo segmentado
Morfologia normal dos neutrófilos
Neutrófilos hipersegmentados
8.2 Agranulócitos
a) Linfócitos
Elevada relação núcleo:citoplasma, quase não se vê
citoplasma. Cromatina bem condensada e citoplasma
incolor. Podem estar presentes grânulos azurófilos.
Linfócito reacional ou reativo – Cromatina mais
esponjosa, citoplasma moderado a intensamente
corado de azul (nucléolos podem ser visíveis).

b) Monócitos
Mononucleados, núcleo com forma amebóide,
apresentando elevado pleomorfismo e cromatina
esponjosa. Citoplasma azul acinzentado, podendo
apresentar vacúolos em qualquer espécie.
Cão - núcleo pode ser atípico e citoplasma de cor
variada.
Morfologia normal dos linfócitos
Tipos leucocitários
Eosinófilo
Monócito
Segmentado
Segmentado
Monócito
Linfócito Linfócito
Basófilo
9. Leucometria Específica
Efetuada nas bordas medianas do esfregaço,
especificando cada tipo de leucócito.
Conta-se nas bordas do esfregaço sangüíneo, em
zigue-zague, 100 células (50 leucócitos em cada
borda)
• Leucometria Específica
Segue-se a seqüência padronizada da fórmula de Schilling:
Basófilos/Eosinófilos/Mielócitos/Metamielócitos/bastões/segmentados/Linfócitos/Monócitos
Neutrófilos
9.1 Leucometria específica relativa
Mantêm-se a distribuição padronizada da fórmula de
Schilling, contando-se no esfregaço os leucócitos.
O resultado é dado em porcentagem, de acordo com o
número de cada tipo leucocitário contado.

9.2 Leucometria específica absoluta
É obtida multiplicando as porcentagens encontradas
na leucometria específica relativa pela leucometria
global.
São obtidas as quantidades totais de cada tipo
leucocitário no sangue.
Unidade: Leucócitos/µL ou Leucócitos/mm³.

10. Índices Hematimétricos
10.1 Volume Globular Médio (VGM)
É o volume médio de cada eritrócito.
Fórmula: VGM = Volume Globular (VG) x 10

Hematimetria (Hemácias x 106)
Unidade: Fentolitros (fL).

10.1 Volume Globular Médio (VGM)
De acordo com o VGM a hemácia pode ser classificada
como normocítica, macrocítica ou microcítica. O
resultado do VGM deve ser sempre conferido no
esfregaço sangüíneo (hematoscopia eritrocitária).

10.2 Concentração de Hemoglobina Globular
Média (CHGM)
É a concentração de hemoglobina dentro de cada
hemácia.
Fórmula: CHGM = Hemoglobinometria (Hb) x 100

Volume Globular (VG)
Unidade: Porcentagem (%)

10.2 Concentração de Hemoglobina Globular
Média (CHGM)
De acordo com o CHGM a hemácia pode ser
classificada como normocrômica ou hipocrômica. O
resultado do CHGM deve ser sempre conferido na
hematoscopia eritrocitária.
10.3 Hemoglobina Globular Média (HGM)
Índice semelhante ao CHGM, só que expresso em
massa de hemoglobina.
Fórmula: HGM = Hemoglobinometria (Hb) x 10

Hematimetria (Hemácia x 106)
Unidade: Picogramas (pg).

QUESTIONÁRIO
QUESTIONÁRIO
1) Qual é o fator de correção utilizado para se obter o
resultado de hemácias/µL?
QUESTIONÁRIO
R.: 10.000
QUESTIONÁRIO
R.: 10.000
2) Qual é a diluição (sangue:reagente) e quais são os

volumes utilizados para a contagem de leucócitos?
QUESTIONÁRIO
R.: 10.000
2) Qual é a diluição (sangue:reagente) e quais são os

volumes utilizados para a contagem de leucócitos?
R.: Diluição: 1:20
Volume do diluente: 0,38mL
Volume do sangue: 20µL

QUESTIONÁRIO
3) Quanto tempo depois de montada a câmara de

Neubauer a contagem de plaquetas deve ser
efetuada?
QUESTIONÁRIO

efetuada?
R.: 10 a 20 minutos.
QUESTIONÁRIO

efetuada?
4) Na realização da plaquetometria, quantos e quais

quadrados devem ser contados na câmara de
Neubauer?
QUESTIONÁRIO

efetuada?

Neubauer?
QUESTIONÁRIO

efetuada?

Neubauer?
R.: Os 25 quadrados do quadrado central.
QUESTIONÁRIO
5) Ao se colocar o microhematócrito na centrífuga,
qual extremidade deve ser voltada para fora ?
QUESTIONÁRIO
R.: A extremidade fechada.
QUESTIONÁRIO
6) Ao se confeccionar o hematócrito de um eqüino,

verificou-se que seu plasma estava levemente
amarelado. O que isso significa?
QUESTIONÁRIO
6) Ao se confeccionar o hematócrito de um eqüino,

verificou-se que seu plasma estava levemente
amarelado. O que isso significa?
R.: Considerando que o plasma dos herbívoros é
fisiologicamente amarelado, pode-se dizer que seu
plasma está normal.
QUESTIONÁRIO
7) Qual é a seqüência de coloração da coloração
hematológica instantânea?
(a) Azul; vermelho; fixador.
(b) Azul; fixador; vermelho.
(c) Fixador; azul; vermelho.
(d) Fixador; vermelho; azul.
(e) A ordem não interfere na coloração.

QUESTIONÁRIO
7) Qual é a seqüência de coloração do panótico
instantâneo?
(a) Azul; vermelho; fixador.
(b) Azul; fixador; vermelho.
(c) Fixador; azul; vermelho.
(d) Fixador; vermelho; azul.
(e) A ordem não interfere na coloração.

QUESTIONÁRIO
8) Na técnica de coloração por MGG: depois de colocar
o corante e deixar por dois minutos, deve-se lavar o
esfregaço em seguida com água corrente.
( ) V
( ) F
QUESTIONÁRIO
8) Na técnica de coloração por MGG: depois de colocar
o corante e deixar por dois minutos, deve-se lavar o
esfregaço em seguida com água corrente.
( ) V
( X) F
QUESTIONÁRIO
9) Quando e como é feita a contagem de reticulócitos
no sangue?
R.: Deve ser feita em animais anêmicos, com exceção do
eqüídeos. Coloca-se em um tubo pequeno uma gota
de NAM (Novo Azul de Metileno) para 20 µL de
sangue homogeneizado. Em seguida confecciona-se
um esfregaço com a diluição, sem necessidade de
franja. Depois de seco, deve-se identificá-lo e
observá-lo por imersão, contando 500 células. Faz-
se, então, a proporção para cada 500 hemácias
quantos reticulócitos foram contados.
QUESTIONÁRIO
10) Qual seqüência de ajustes no espectofotômetro deve
ser utilizada para a dosagem de Hemoglobina?

QUESTIONÁRIO
10) Qual seqüência de ajustes no espectofotômetro deve
ser utilizada para a dosagem de Hemoglobina?
R.: Após ajustar o aparelho para 100 (tramitância), voltar ao
botão número 2, colocar em A (de absorbância) e
verificar se está zerado. Se não estiver, voltar ao
botão número 3. Colocar os tubos (primeiro o tubo com
o padrão) e anotar os resultados. Colocar o botão
número 2 em T, colocar o branco de volta e desligar o
aparelho.
QUESTIONÁRIO
11) Qual é a escala do refratômetro para dosagem de
proteínas?
QUESTIONÁRIO
11) Qual é a escala do refratômetro para dosagem de
proteínas?
R.: 0,2g/dL. A “coluna” da esquerda.

QUESTIONÁRIO
12) Ao se fazer a dosagem de fibrinogênio, foi obtido o

seguinte resultado:
1a Leitura: proteínas plasmáticas totais = x
2a Leitura (após banho-maria e centrifugação) = x
Considerando que o animal está produzindo fibrinogênio e
que não houve erro de técnica, como explicar este
resultado?
QUESTIONÁRIO
12) Ao se fazer a dosagem de fibrinogênio, foi obtido o

seguinte resultado:
1a Leitura: proteínas plasmáticas totais = x
2a Leitura (após banho-maria e centrifugação) = x
Considerando que o animal está produzindo fibrinogênio e
que não houve erro de técnica, como explicar este
resultado?
R.: O valor de fibrinogênio é menor que 200mg/dL.

Bibliografia e fotos
Alan H. Rebar; Guia de Hematologia para cães e gatos.
Alan H. Rebar; Hemogram interpretation for dogs and cats.
Lon J. Rich; The morfology of canine and feline blood cells.

Agradecimentos
Gostaríamos de agradecer a todos aqueles que, de alguma
forma, contribuíram para a realização deste trabalho. Caros
orientadores, amigos e namorados, obrigada pelo tempo gasto,
por nos apoiarem, e sobretudo pela paciência.
Até a próxima...

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Departamento de Clínica e Cirurgia

Disciplina de Laboratório Clínico Veterinário

Trabalho de Monitoria 2003

Ananda Müller Pereira

Orientador: Márcia de Souza Xavier

Lâmina com ou sem parte fosca para marcação.

Compressa de gaze para limpeza da lâmina.

Grafite 2B para identificação.

Lâmina extensora – tem as arestas recortadas para

Os destros devem pegar a lâmina com a mão esquerda,

colocando o polegar em uma das extremidades e o

Colocar a gota de sangue (utilizar tubo capilar, pipeta

automática, ou até a tampa do tubo para isso).

Colocar a extensora na lâmina, sem encostar na gota, e

Encostar suavemente na gota, até que esta se espalhe.

Com a mão direita, segurar por cima da extensora, e

deslizá-la pela lâmina calma e lentamente, sem

A inclinação dependerá da fluidez do sangue.

Ex: sangue anêmico - extensora em angulo mais obtuso

Secar com movimentos de agitação.

Os corantes devem ser abertos no momento da

O primeiro tubo contém o fixador. A lâmina deve

permanecer um tempo mínimo de 8 a 10 segundos.

O segundo tem corante vermelho – 8 a 10 segundos no

O terceiro tem corante azul – 5 a 8 segundos no

Cada fabricante possui um tempo determinado para a

Depois de colocar nos corantes, deve-se lavar a lâmina

Observar no microscópio toda a lâmina em objetiva

de 40X, com uma fina camada de óleo, sem que este

porém, encoste na objetiva. Depois, observar por

imersão (objetiva de 100X).

Colocar o corante sobre todo o esfregaço, sem deixar

transbordar (deixar por 2 minutos).

Colocar água destilada, e soprar com uma pipeta vazia

e seca, para homogeneizar, formando um menisco

(mesma quantidade que a colocada de corante – não

deixar transbordar, deixar por 6 minutos).

Lavar com água corrente.

Observar no microscópio em imersão (objetiva de

Depois de homogeneizar o sangue, o tubo deve ser

aberto e inclinado, colocando-se o tubo capilar no seu

O sangue entrará no tubo por capilaridade, deve-se

encher 2/3 do tubo capilar.

Limpar com gaze o tubo capilar.

Fechar uma das extremidades do capilar. Pode-se

colocá-lo na chama do bico de Bünsen para fechar

(sempre a extremidade sem sangue), com cuidado para

a chama não entrar em contato com o sangue, ou usar

massa apropriada, colocando na extremidade com

Abrir a centrífuga e colocar o tubo com a parte

fechada voltada para fora. Tampar a mesma e depois

fechá-la apertando o botão lateral.

Apertar o botão de armar (que já está programado

para cinco minutos).

A centrífuga desliga sozinha. Retirar os capilares,

pegar a régua para leitura de hematócritos, colocar o

tubo sobre esta, de forma que o sangue coincida com

uma das extremidades e o plasma com a outra.

Verificar o resultado do hematócrito.

Observar se o plasma está: ictérico (amarelado),

hemolisado (avermelhado), lipêmico (esbranquiçado) ou

incolor (que é o normal). O plasma dos herbívoros é

Plasma hemolisado Plasma lipêmico Plasma ictérico