Aula 3: Práticas

laboratoriais em
hematologia

Prof.ª Dra. Camila Amato Montalbano

 Metodologia Manual de hemograma
• Contagem de Leucócitos, Hemácias e Plaquetas: Câmara de
Neubauer
• Dosagem da Hemoglobina:
Método colorimétrico (Cianometahemoglobina)

• Determinação do Hematócrito:
Método do microhematócrito (centrifugação)

• Cálculo dos Índices Hematimétricos:

• VCM = (Ht / Hem) x 10
• HCM = (Hb / Hem) x 10
• CHCM = (Hb/Ht) x 100
• Análise Morfológica dos eritrócitos, leucócitos e Plaquetas:
Esfregaço corado
Método automatizado de
hemograma
 Método
automatizado
de hemograma
 Contagem de hemácias na câmara de
Neubauer
1. Colocar em tubo de ensaio 4 ml de soro fisiológico e 20 µL
de sangue.
2. A diluição é 1:200
3. Homogeneizar
4. Colocar a lamínula na câmara de Neubauer (lembrar de
colocar água destilada nas bordas da lamínula para que
ela se fixe)
5. Preencher o espaço entre a câmara e a lamínula com a
amostra diluída, preencher dos dois lado com micropipeta
tomando cuidado para não vazar
6. Levar para o microscópio contar o 5 quadrantes de acordo
com a figura a seguir:
• Depois de contar os 5 quadrantes somá-los e fazer a média.
Por exemplo:
• 387 + 381 +486 + 426 + 431 = 422,2
5
Então aplica-se a seguinte fórmula: Contamos 5 quadrante mas eram 25
fator da câmera

Hemácias/ mL = média x 5 x 10 x 200 fator de diluição

Hemácias/ mL = 422,2 x 5 x 10 x 200

Hemácias/ mL = 4.222.000
 Hemoglobina
• Dosagem no analisador bioquímico seguindo as instruções do
fabricante do kit
• Coloca-se em um tubo de ensaio 5000 microlitros do reagente e 20
microlitros de amostra de sangue total
• Homogeneizar por 5 minutos para que haja lise das hemácias e a
hemoglobina se libere
• Passar a amostra e padrão no analisador bioquímico e ler a
absorbância em 520 e 550 Nm
• Faz-se o cálculo:
• Hemoglobina= absorbância teste x 10
absorbância padrão
Hemoglobina
 Contagem de reticulócitos
• Reticulócitos Hemácias jovens (3 dias na medula e 1 dia no
sangue antes de se transformar em hemácia madura)
• Valores de referência 0,5 a 2% (ou de 35.000 a 120.000 mm3)
• 1- Em um tubo de hemólise, adicionar 100 μL de Azul Cresil
Brilhante;
• 2- Neste mesmo tubo, adicionar 100 μL do sangue total com EDTA
(ou seja, propoção 1:1 ou v/v);
• 3- Homogeneizar e deixar 15 minutos em banho-maria;
• 4- Após este período, retirar do banho-maria e homogeneizar
novamente;
• 5- Realizar o esfregaço sanguíneo normalmente e esperar secar;
• 6- Realizar a leitura em microscópio óptico com objetiva de
imersão (aumento de 1000x).
Contagem de reticulócitos
Contagem de reticulócitos
1. Contar os reticulócitos presentes em 10 diferentes campos
(anotando quantos reticulócitos foram encontrados em
cada campo);
2. Anotar a média dos campos.
3. A partir da média de reticulócitos contados, deve ser
calculada a % em relação à quantidade total de hemácias
no sangue. Para isso, é necessário saber o valor do
hematócrito (Ht) do paciente e a quantidade de hemácias.
Exemplo de cálculo de contagem
de reticulócitos
Vídeo de prática de contagem de hemácias,
dosagem de hemoglobina e contagem de
reticulócitos
Esfregaço sanguíneo
 Obrigada!!!!!!
montalbano.c@hotmail.com