UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO- FACULDADE DE MEDICINA

VETERINÁRIA E ZOOTECNIA
DEPARTAMENTO DE CLÍNICA MÉDICA

VCM 311 - Patologia Clínica Veterinária

Roteiro de aula prática
HEMATOLOGIA CLÍNICA
HEMOGRAMA
ERITROGRAMA

1. Hematócrito (Volume Globular) - %

 Homogeneizar a amostra de sangue

 Preencher aproximadamente 3/4 do tubo capilar com sangue
 Obstruir uma das extremidades (com massa ou fogo)
 Centrifugar no microcentrifugador (13000 g) por 5 minutos (caprinos: 15 minutos).
 Usar tabela para relacionar o volume de eritrócitos com o volume total da amostra
de sangue contida no tubo capilar = Ht %.

OBS: Sempre avaliar o aspecto do plasma (ictérico, lipêmico, hemolisado).

2. Dosagem de Hemoglobina - g/dL

Em três tubos de ensaio de 10 mL devidamente identificados serão aferidos o “Branco”

de reagentes, o “Padrão” com concentração conhecida de hemoglobina e a “Amostra” a
ser analisada:

Tubos Branco Padrão Amostra

Reativo de Drabkin ou água 5,0 mL 5,0 mL 5,0 mL
destilada
Padrão (ex:10 g/dL)
KCn - VENENO! --- 20 µL ---

Sangue --- --- 20 µL

 Homogeneizar e aguardar pelo menos 10 minutos (temperatura ambiente)

 Leitura em espectrofotômetro ou fotocolorímetro ( = 540 nm)

Resultado: AbsP --- ConcP ConcA = AbsA . ConcP g/dL

AbsA --- ConcA AbsP

3. Contagem de Eritrócitos (hemácias)

3
A contagem do número total de eritrócitos por mm pode ser feita manualmente
em hemocitômetro (câmara de Neubauer) ou por contadores automáticos.
3.1. Diluição da amostra

Amostra: sangue com EDTA

Diluidores: Líquido de Gower ou Solução Fisiológica.

3.1.1. Microdiluição

Diluição 1:200 em pipeta hematimétrica para glóbulos vermelhos

Técnica:
- Homogeneizar o sangue;
- Aspirar o sangue até a marca 0,5 da pipeta de Thoma para glóbulos
vermelhos;
- Limpar o sangue da parte externa da pipeta;
- Aspirar a solução diluidora até a marca 101;
- Agitar
- Desprezar as primeiras gotas e preencher a câmara de Neubauer

3.1.2. Macrodiluição
Diluição 1:201 utilizando pipeta automática

Técnica:
- Em um tubo, colocar 4 mL de diluidor
- Homogeneizar o sangue;
- Pipetar 20 µL de sangue
- Homogeneizar
- Preencher a câmara de Neubauer

4.2. Contagem:

Aguardar a sedimentação das hemácias e ao colocar a câmara no microscópio,

não inclinar muito para que as células, por gravidade, não se desloquem para um lado
só. Focar o retículo de contagem em menor aumento (4x) e passar para as objetivas de
10x e, depois, 40x.
Contar as hemácias de cinco quadrados (4 cantos e 1 central) da área central da
câmara, delimitados pelas linhas triplas (do total de 25 quadrados=1 mm2). São incluídas
hemácias que estejam sobre dois lados da linha tripla (regra do “L”) e que encostem até
a segunda linha. Quanto aos outros dois lados, ignorar as hemácias que encostarem na
primeira linha interna. Multiplicar o resultado pelo respectivo fator de correção, calculado
a partir do método utilizado (micro ou macrodiluição).

3
Nº de hemácias por mm (µL)= nº de hemácias contadas X Fator de Correção

Fator de Correção
O fator de correção é calculado com base na :
 diluição (200 ou 201)
 área da câmara onde as células foram contadas
(fazer o cálculo para completar 1 mm2 – multiplicar por 5)
 altura da câmara (0,1 mm – para corrigir para 1 mm, multiplicar por 10).
(observar ilustração no fim do roteiro)
 Portanto:
Microdiluição:
200 x 5 x 10 x he contadas = he contadas x 10000 = he x 106/mm3

Macrodiluição:
6 3
201 x 5 x 10 x he contadas = he contadas x 10050 = he x 10 /mm

4. Índices Hematimétricos Absolutos

VCM (volume corpuscular médio) em fl = Ht x 10

He

HCM (hemoglobina corpuscular média) em pg = Hb x 10

He

CHCM (concentração hemoglobínica corpuscular média) em % = Hb x 100

Ht
5. Esquema da Câmara Hematimétrica de Neubauer Modificada

1 mm

1 mm