Medicina Veterinária

Interpretação de exames em animais: hemograma e bioquímica sérica

Professora: Maíra Lima (@mairalimavet)

TECNOLOGIA LABORATORIAL EM MEDICINA VETERINÁRIA

apropriada em um tubo com ácido

1. Técnicas hematológicas etilenodiaminotetracético (EDTA). Quando se realiza
qualquer procedimento hematológico, é importante
➢ Técnicas básicas aplicáveis em qualquer que o sangue esteja completamente homogêneo. Os
hospital veterinário componentes celulares podem decantar
rapidamente quando se coloca o tubo sobre um
Homogeneização sanguínea – para todas as balcão ou na estante para tubos (Figura 1.1). O tubo
mensurações hematológicas pode ser colocado na estante giratória ou um rack de
inclinação projetado especificamente para
Assume-se que a amostra sanguínea tenha homogeneizar sangue (Figura 1.2).
sido coletada recentemente e de maneira

Figura 1.1 Esquerda: sedimentação de sangue. Figura 1.2 Exemplo de mesa mecânica de
Direita: homogeneização do sangue manualmente homogeneização sanguínea.
antes de coletar uma alíquota.

Volume globular ou hematócrito (Htc) por
centrifugação
O valor do volume globular (ou hematócrito)
é a porcentagem do sangue total composta pelos
eritrócitos. É mensurado a partir de uma coluna de
sangue que, após a centrifugação, resulta na
compactação máxima dos eritrócitos. Os materiais
necessários para obter o volume globular incluem
tubos de micro-hematócrito), material selante para
os tubos, centrífuga de micro-hematócrito e um
dispositivo para a leitura do tubo.
a. Inicialmente, o tubo de microhematócrito é
preenchido por capilaridade, segurando-o horizontal
ou levemente inclinado para baixo e encostando-se
a extremidade superior no sangue do tubo com
EDTA (Figura 1.3).
b. Na sequência, possibilite que o tubo seja
preenchido 2/3 de sua extensão.
c. Segure o tubo horizontalmente para evitar que o
sangue escorra para fora e, então, sele uma das
extremidades pressionando o tubo contra o material
selante por uma ou duas vezes (Figura 1.4). Mesmo
se existir ar entre o sangue e o selante não é um
problema, pois o ar preso é removido durante a
centrifugação.
d. O tubo é então colocado na centrífuga de micro-
hematócrito de acordo com as instruções do
fabricante (Figuras 1.5 e 1.6).
 Figura 1.3 Técnica adequada para o Figura 1.4 O tubo de micro-hematócrito é selado
preenchimento de um tubo de micro-hematócrito. pressionando-o de duas a três vezes no material
selante (seta).

Figura 1.5 Exemplo de uma centrífuga de Figura 1.6 Colocação dos tubos de micro-
micro-hematócrito. hematócrito no rotor da centrífuga. Observe a
orientação adequada de dois tubos (seta dupla).

Podem ser observadas três camadas distintas
no tubo após sua remoção da centrífuga: a coluna de
plasma no topo, os eritrócitos compactados na base
e uma pequena banda branca ao meio, conhecida
como capa flogística ou camada branca (Figura 1.7).
A capa flogística é constituída de células nucleadas
(predominantemente leucócitos) e de plaquetas.
A observação de quaisquer anormalidades na
coluna de plasma sobre os eritrócitos deve ser
registrada. Anormalidades comuns como icterícia,
lipidemia e hemólise são mostradas na Figura 1.7.
A observação da coloração ictérica do plasma
é útil ao diagnóstico em pequenos animais. No
entanto, não é confiável em grandes animais, pelo
fato de o soro dessas espécies geralmente ter uma
coloração mais amarelada devido aos pigmentos
carotenoides normais associados à sua dieta
herbívora.
A lipidemia é a coloração branca e opaca da
coluna de plasma que ocorre devido à presença de
quilomícrons. A lipidemia está associada mais
comumente à coleta de sangue pós-prandial, mas
também pode estar associada a distúrbios que
envolvam o metabolismo de lipídios.
A hemólise é a coloração vermelha da coluna
de plasma que geralmente é resultante da lise de
eritrócitos induzida por artefatos durante a coleta de
sangue. Uma pequena quantidade de eritrócitos
rompidos é suficiente para conferir um aspecto
visual de hemólise. Portanto, caso o hematócrito
esteja normal, pode-se assumir que seja apenas um
artefato.

Figura 1.7 Observe os 4 tubos na foto central. O tubo
da esquerda está normal. Observe os eritrócitos
compactados na base, a camada plasmática no topo
e a capa flogística no meio (seta; ampliado à
esquerda). O segundo tubo demonstra lipidemia, o
terceiro hemólise e o quarto, icterícia. Observe
também que o hematócrito está consideravelmente
menor no quarto tubo. Os dois tubos adicionais
demonstram anormalidades na capa flogística
(ampliados à direita). O primeiro desses tubos tem
uma capa flogística aumentada que se correlaciona
a elevação na concentração de leucócitos. O
segundo (direita) é de uma ovelha com leucemia e
tem uma capa flogística dramaticamente
aumentada. Existe anemia grave. Com tais
anormalidades na concentração celular, a separação
entre leucócitos e eritrócitos não se completa e a
divisão pode não estar bem nítida. O que está sendo
interpretado como o “topo” da coluna de eritrócitos
está indicado pela ponta de seta.
O volume globular é mensurado em um
dispositivo de leitura, tal como um cartão leitor para
micro-hematócrito (Figura 1.8). O procedimento é
realizado posicionando-se a base da coluna de
eritrócitos na linha 0 e o topo da coluna de plasma
na linha 100. Faz-se então a leitura, na escala,
correspondente à posição do topo da coluna de
eritrócitos, obtendo-se o valor do volume globular.
Figura 1.8 Determinação do volume globular em um
cartão de leitura para micro-hematócrito, utilizando
dois tubos com amostras de sangue do mesmo
paciente. Observe que a escala possibilita que o tubo
seja lido mesmo com diferenças consideráveis no
preenchimento. Inicialmente, alinha-se o limite
entre o selante e a coluna de eritrócitos com a linha
0 (zero) e, posteriormente, a extremidade superior
da coluna de plasma com a linha 100; a partir de
então, a leitura é feita no topo da coluna de
eritrócitos na escala. As posições desses passos
estão indicadas pelas setas. Observe nesse exemplo
que o volume globular é 46%.
Estimativa de proteínas plasmáticas por
refratometria
Após a observação e a mensuração do
hematócrito, a coluna de plasma pode ser utilizada
para estimar a concentração de proteínas
plasmáticas por meio do uso do refratômetro (Figura
1.9). A escala para um soluto específico pode ser
desenvolvida pela mensuração do índice refratário,
calibrado para soluções com concentrações de
soluto conhecida. No diagnóstico clínico, a
refratometria é utilizada para estimar a
concentração de proteínas plasmáticas e a
densidade específica da urina.
Figura 1.9 Refratômetros. Refratômetro veterinário,
apresenta uma escala de densidade específica da
urina para cães e gatos que pode ser calibrada para
pequenas diferenças entre as espécies durante a
mensuração.
A concentração de proteínas plasmáticas é
mensurada utilizando-se a coluna de plasma do tubo
de micro-hematócrito. O tubo é quebrado no nível
da capa flogística (Figura 1.10) e a porção do tubo
contendo o plasma é utilizada para preencher o
refratômetro (Figura 1.11). O aparelho é então
empunhado de maneira que uma fonte de luz
ambiente possa passar através do prisma embebido
com o plasma e então se lê o grau de refração da luz
em uma escala visível por meio da ocular (Figura
1.12).
 Figura 1.10 Preparação do tubo de micro-hematócrito para Figura 1.11 Preenchimento do refratômetro
a mensuração da concentração de proteínas plasmáticas. com plasma do tubo de micro-hematócrito.

Figura 1.12 Representação da escala de um refratômetro vista

através da ocular. A refração da luz cria uma interface brilhante-
sombreada, possibilitando a leitura na escala apropriada.

Determinação da concentração total de leucócitos A preparação de um esfregaço sanguíneo de

Duas abordagens gerais estão disponíveis
para determinar a concentração de
leucócitos.Historicamente, a concentração celular
era mensurada manualmente utilizando uma
diluição sanguínea colocada em um hemocitômetro
(câmara de Neubauer), sendo as células contadas
durante a observação microscópica. Esse
procedimento, assim como o material utilizado, é
considerado obsoleto na prática veterinária.
Preparação de esfregaços sanguíneos
O esfregaço sanguíneo é uma ferramenta
essencial para a determinação das concentrações
individuais dos tipos de leucócitos (ou seja,
contagem diferencial) e para a avaliação de
importantes anormalidades patológicas envolvendo
leucócitos, eritrócitos e plaquetas.
boa qualidade necessita do domínio de uma técnica
em específico (Figuras 1.13 a 1.15).
a. Uma gota de sangue é colocada próximo à
extremidade da primeira lâmina apoiada sobre um
balcão.
b. A segunda lâmina é posicionada sobre a primeira,
à frente da gota de sangue, de maneira que forme
uma “cunha” consistindo em um ângulo de 30 a 45°.
c. A segunda lâmina, chamada agora de lâmina
deslizadora, é então trazida para trás até encostar na
gota de sangue e, em seguida, impelida até o final da
primeira lâmina.
d. Deve ser realizado em um movimento único e
rápido. A pressão sobre a lâmina deslizadora deve
ser mínima.
Geralmente, uma técnica ruim consiste em
impelir a lâmina deslizadora muito devagar, criando
assim uma camada muito fina. Isso resulta na
distribuição escassa dos leucócitos no final do
esfregaço e em artefatos na avaliação dos
eritrócitos. Em sangue com viscosidade diminuída, aumentar o ângulo da cunha para evitar uma
como nos pacientes com anemia grave, pode ser útil camada muito fina.

Figura 1.13 Preparação do esfregaço sanguíneo. Figura 1.14 Preparação do esfregaço sanguíneo.

Figura 1.15 Preparação do esfregaço sanguíneo. A

lâmina deslizadora é impelida para frente com um
movimento direcional rápido (seta). É importante que
o movimento mostrado entre as Figuras 1.13 e 1.15
seja um procedimento único e rápido envolvendo a
movimentação no punho.

Coloração disponíveis e, por conveniência, são os mais

Depois da preparação, o esfregaço sanguíneo
é geralmente corado dentro de minutos. Contudo,
pode ser corado dentro de horas ou dias se for
enviado a um laboratório diagnóstico. O sistema de
coloração utilizado para a avaliação microscópica
dos elementos celulares é a coloração de Wright ou
a de Wright modificada pela adição de Giemsa. Esse
é um procedimento relativamente complexo, no
entanto, procedimentos de coloração rápida que
mimetizam a coloração clássica de Wright estão
utilizados na prática veterinária.
O kit de coloração mais conhecido é o
panótico rápido “Diff-Quick” (Dade Behring Inc,
Newark, DE) (Figura 1.16). Essas técnicas de
coloração rápida podem resultar em núcleos
excessivamente corados e em pouca definição dos
detalhes da cromatina, mas podem fornecer
qualidade suficiente para a contagem diferencial de
leucócitos e uma varredura para anormalidades
morfológicas.

Figura 1.16 Aparatos para a coloração de esfregaços

sanguíneos e citologia. Frascos para coloração
manual contendo os corantes rápidos. As lâminas
são manualmente transferidas de um frasco para o
outro de acordo com as instruções do fabricante.

Habilidade para examinar esfregaços sanguíneos oriente a lâmina de maneira correta para a
observação microscópica (Figura 1.17). A parte mais
Uma vez corado, a anatomia de um esfregaço larga do esfregaço é a área mais espessa, ou corpo,
sanguíneo deve ser conhecida a fim de que se na qual as células estão sobrepostas e os leucócitos
estão arredondados tornando, por isso, difícil a
avaliação microscópica de todos os componentes.
A parte final do esfregaço é chamada de
cauda ou franja. Artefatos nessa área incluem
leucócitos rompidos e pode-se verificar a inabilidade
em se avaliar a palidez central dos eritrócitos.
A área de contagem é uma pequena área
entre o corpo e a cauda e consiste em uma
monocamada de células na qual a microscopia é
ideal. Os leucócitos estão achatados de modo que os
detalhes internos estão mais evidentes.
É importante examinar o aspecto
macroscópico do esfregaço, reconhecendo
Figura 1.17 Anatomia de um esfregaço corado. Observe a
cauda (seta fina) e a área espessa ou corpo da lâmina (seta
espessa). A área de contagem, está presente em uma área
relativamente pequena, que está delineada
aproximadamente pelas linhas através da lâmina.
Observando a figura 1.18 vemos que
esfregaço da esquerda está muito pálido; essa é a
aparência em quadros de anemia grave. Nessa
situação, a viscosidade do sangue está reduzida,
resultando em um esfregaço muito mais fino. O
esfregaço da direita foi preparado de maneira
inadequada e não possibilita a obtenção de
informações precisas. A lâmina deslizadora foi
empurrada muito lentamente, produzindo um
esfregaço fino e com estrias. Observe as estrias e a
irregularidade sobre a maior parte da lâmina.
Também existe sangue no final da lâmina,
resultando em uma linha de células densamente
concentradas (ponta de seta). Não é possível
encontrar uma boa monocamada para a avaliação
morfológica dos eritrócitos nessa lâmina. Além
disso, os leucócitos estão concentrados
desproporcionalmente no final da lâmina, na qual
normalmente está a cauda. Nesse caso, será difícil –
e provavelmente impreciso – realizar a contagem
diferencial. Uma lâmina muito fina, resultante de
artefatos. Preparações inadequadas podem ser
reconhecidas, alertando, dessa maneira, o avaliador
quanto a artefatos que podem ser evitados e
prevenindo quanto a qualquer interpretação
errônea associada a eles. As anormalidades mais
comuns que podem ser reconhecidas
macroscopicamente são demonstradas na Figura
1.18. A anormalidade mais importante e comum é a
preparação de um esfregaço muito fino, que pode
ser reconhecido por estrias que progridem em
direção à região da cauda. Isso resulta em uma
distribuição leucocitária que induz a erros
importantes na contagem diferencial.
Figura 1.18 Aparência macros-cópica de
esfregaços sanguíneos. Todos os três
esfregaços estão dispostos na mesma
direção.
deslizamento muito lento, é o problema técnico
mais comumente encontrado nos laboratórios
veterinários.
O avaliador deve localizar a área de
contagem utilizando a objetiva de 10×. A cauda é
reconhecida pela perda da palidez central dos
eritrócitos e por um padrão reticulado na
distribuição eritrocitária no esfregaço (Figura 1.19).
Um exame rápido e em baixa magnificação da cauda
é útil na detecção e identificação de anormalidades,
tais como as microfilárias, aglomerações de
plaquetas e células grandes e incomuns que se
depositam preferencialmente ali (Figura 1.20). O
corpo do esfregaço é reconhecido por uma
superposição progressiva dos eritrócitos à medida
que o avaliador move a objetiva em direção à área
espessa. Em áreas muito espessas, a avaliação das
células fica gravemente comprometida (Figura 1.21).
A área de contagem é reconhecida por uma
monocamada de células dispersas uniformemente
(Figuras 1.22 e 1.23).
 Figura 1.19 Aparência da região da cauda em baixa Figura 1.20 Itens grandes impelidos para a cauda. À
magnificação. É mais fácil que ocorra nessa área esquerda, microfilária (seta) em um animal com
falsa interpretação de anormalidades patológicas. dirofilariose. À direita, grande aglomeração de
plaquetas com leucócitos aprisionados.

Figura 1.21 Aparência, em alta magnificação, das
células na área do corpo da lâmina. Observe a
sobreposição dos eritrócitos, a identificação de
leucócitos específicos (setas) é difícil ou impossível.
Nessa área, os leucócitos são esféricos ou
arredondados em vez de achatados. Não é possível
observar detalhes intracelulares, nem mesmo
diferenciar o citoplasma do núcleo.
Figura 1.22 Aparência, em alta magnificação, das
células na área de contagem ou monocamada.
Observe a sobreposição mínima dos eritrócitos,
facilitando a avaliação de sua morfologia (ponta de
seta). Os leucócitos (seta) estão achatados nessa
área, o que torna possível enxergar detalhes do
citoplasma e do núcleo. Observe que as bordas
nucleares estão finamente delineadas pelo
citoplasma circundante.

Uma vez que a área de contagem seja
localizada, um avaliador experiente consegue
estimar a concentração de leucócitos em um
esfregaço sanguíneo bem preparado. Isso é útil
como um tipo de mensuração qualitativa grosseira e
recomenda-se que o avaliador adquira experiência
no processo por meio de comparações repetitivas da
densidade leucocitária em esfregaços bem
preparados e a contagem total de leucócitos
realizada em um contador celular. A aparência, em
baixa magnificação, de contagem leucocitária dentro
da faixa normal, leucopenia e leucocitose
acentuadas são mostradas nas Figuras 1.23,1.24 e
1.25, respectivamente.
 Figura 1.23 Aparência, em baixa magnificação, da área de contagem.
Observe as células uniformemente dispersas e a capacidade de visualizar
a palidez central dos eritrócitos. A densidade dos leucócitos (seta) é a
esperada para uma concentração leucocitária dentro dos limites
normais.

Figura 1.24 Aparência, em baixa magnificação, da área de contagem,

apresentando diminuição acentuada da concentração leucocitária.
Raros leucócitos estão presentes por campo (seta).

Figura 1.25 Aparência, em baixa magnificação, da área de contagem com

acentuado aumento na concentração leucocitária. A densidade de
leucócitos é consideravelmente maior do que a observada na Figura
1.23.

Procedimentos utilizando a objetiva de 100× com a contagem diferencial de leucócitos pela

óleo de imersão
Uma vez que a área de contagem seja
localizada e essas avaliações estejam completas, o
microscópio deve ser ajustado para a observação em
alta magnificação com óleo de imersão. O avaliador
irá, então, realizar uma avaliação sistemática das
três principais linhagens celulares. Isso inclui a
contagem diferencial de leucócitos, com anotações
sobre quaisquer células anormais, avaliação da
morfologia dos eritrócitos e avaliação das plaquetas.
Dentro da área de contagem, o avaliador irá
movimentar a lâmina por meio dos campos e obter
classificação de, no mínimo, 100 células encontradas
consecutivamente. As células são classificadas em,
no mínimo, cinco a seis categorias, sendo que as
células anormais devem ser classificadas na
categoria “outras”, em que uma especificação é feita
de uma amostra individual.
As seis categorias de células normais –
neutrófilos, bastonetes (neutrófilos não
segmentados), linfócitos, monócitos, eosinófilos e
basófilos – são mostrados na Figura 1.26. Iremos ver
detalhes visuais adicionais em relação à identificação
leucocitária que podem ser úteis na contagem
diferencial mais à frente.
 Figura 1.26 Leucócitos básicos encontrados na contagem diferencial.
Canto esquerdo superior. Neutrófilos. Observe o neutrófilo
segmentado (seta) e a constrição no contorno nuclear. O bastonete
(B) tem contorno nuclear suave e paralelo. Acima no meio. Monócito
(Mono). O núcleo pode ter qualquer forma, de redondo à forma de
feijão e de ameboide a bastão, como nesse exemplo. O citoplasma é
azul-acinzentado e pode variavelmente conter vacúolos. Canto
superior direito. Dois linfócitos (L). Canto inferior esquerdo. Um
eosinófilo (Eo). Observe que os grânulos se coram de maneira
semelhante aos eritrócitos circundantes. Ocasionalmente, grânulos
podem ser “lavados” durante o procedimento de coloração, deixando
vacúolos. Canto inferior direito. Basófilo (Baso) com grânulos negros
que coram de maneira semelhante à cromatina nuclear. Observe o
neutrófilo adjacente (ponta de seta) e que essas células podem
apresentar grânulos pequenos, fracamente corados e muito menores
do que os dos eosinófilos ou basófilos.

Após a contagem das 100 células, o número
de cada tipo de leucócito é relativo a uma fração de
100, ou seja, uma porcentagem da população
leucocitária. Uma vez que as células tenham sido
categorizadas em porcentagens, elas devem ser
convertidas em números absolutos para propósitos
de interpretação. Isso é feito multiplicando-se a
concentração total de leucócitos pela porcentagem
de cada tipo de leucócito, o que resulta no número
absoluto ou na concentração de cada leucócito na
amostra sanguínea. O exemplo a seguir ilustra a
conversão das porcentagens em números absolutos:

A presença da adequação das plaquetas pode
ser interpretada em um esfregaço bem preparado.
Um mínimo de 8 a 12 plaquetas por campo em alta
magnificação (1.000×) e óleo de imersão deve ser
interpretado como adequado. No entanto, o número
visualizado pode ser consideravelmente maior do
que o descrito devido à grande faixa de
concentração normal de plaquetas.
Esse número é apenas uma diretriz para a
maioria dos microscópios com um amplo campo de
visão. Ele deve ser ajustado para baixo, quando for
utilizado um microscópio com campo de visão
estreito, e para cima, quando for utilizado um
microscópio com campo de visão extremamente
amplo. Caso as plaquetas aparentem estar
diminuídas, deve-se procurar por aglomerados
plaquetários na cauda do esfregaço utilizando baixa
magnificação.
A capacidade de procurar por aglomerados
de plaquetas também é importante se o contador
celular fornecer valores baixos da concentração
plaquetária; esse é um problema frequente em
gatos. A morfologia das plaquetas também deve ser
observada. Plaquetas que se aproximem do
diâmetro dos eritrócitos, ou que sejam maiores do
que eles, são referidas como macroplaquetas ou
plaquetas gigantes. Em cães, isso sugere acelerada
regeneração de plaquetas, porém essa interpretação
geralmente não se aplica às macroplaquetas em
gatos.