FACULDADE DE TECNOLOGIA DE VALENÇA – FACTIVA

BACHARELADO EM BIOMÉDICINA
CURSO – HEMATOLOGIA

Roteiro de aula prática

Professor MSc Cayo Amaral Abreu

Coleta de sangue
1. Verificar se o local de coleta está limpo para iniciar o procedimento.

2. Preparar os materiais para coleta: Luvas, agulha, seringa, canhão de

coleta, garrote, algodão, álcool 70%, tubos para coleta, stop-blood.

3. Identificar os tubos de coleta.

4. Realizar a identificação do paciente para coleta do sangue.

5. Abrir o lacre da agulha de coleta em frente ao paciente.

6. Posicionar o braço do paciente e fazer a antissepsia (movimentos

circulares de dentro pra fora, ou movimento único contra o sentido do
pelo).

7. Garrotear o braço do paciente, cerca de 4 dedos acima do local de

coleta.

8. Fazer a punção numa angulação entre 30º à 40º, com o bisel voltado
para cima.

9. Realizar a punção ou inserir o primeiro tubo á vácuo, com etiqueta

voltada o braço do paciente.

10. Quando o sangue começar a fluir para dentro do tubo, desgarrotear o

braço do paciente e pedir para que ele abra a mão.

11. Homogeneizar imediatamente após a retirada de cada tubo, invertendo-

o suavemente de 5 à 10 vezes.

12. Após a retirada do último tubo, remover a agulha e fazer a compressão

no local da punção com algodão.

13. Exercer a pressão no local, evitando a formação de hematomas e

sangramentos.

14. Descarte a agulha imediatamente após sua remoção do braço do

paciente, no recipiente para materiais perfurocortante.

15. Fazer o curativo oclusivo no local da punção.

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Roteiro de aula prática

Professor MSc Cayo Amaral Abreu

Confecção de esfregaço em lâmina

1. Utilizar preferencialmente sangue sem anticoagulante, imediatamente

após a coleta.
2. Colocar 1 gota de sangue em uma das extremidades de uma lâmina
limpa e desengordurada.
3. Com o auxílio de uma lâmina de esfregaço (ou comum) posicione-a a
frente da gota em um ângulo de 45º.
4. Faça um leve recuo e depois avance em movimento único.
5. Comprimento do esfregaço não pode atingir a extremidade da lâmina.
6. O esfregaço deve formar uma franja na parte final da lâmina

Coloração de lâminas

May Grünwald-Giemsa
1. Cobrir lâmina com May Grünwald e deixar por 3 minutos
2. Adicionar 10 à 20 gotas de água e deixar por 1 minuto
3. Escorrer solução
4. Cobrir lâmina com Giemsa diluído (1 gota/ml de H2O) e deixar por 15
minutos
5. Escorrer solução
6. Limpar o verso da lâmina com auxílio de gaze limpa
7. Aguardar secagem da lâmina

Panótico rápido
1. Emergir lâmina 5 vezes na solução 1 (Triarilmetano + Metanol)
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Roteiro de aula prática

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2. Emergir 5 vezes na solução 2 (Xantenos + H20 deionizada)

3. Emergir 3 vezes na solução 3 (Tiazinas + H20 deionizada)
4. Lavar com H20 (pode-se emergir também)
5. Aguardar secagem da lâmina

Wright
1. Cobrir lâmina com corante Wright e deixar por 1 minuto
2. Acrescentar cerca de 20 gotas de água destilada e deixar por período
de 5-8 minutos
3. Lavar lâmina com água
4. Aguardar secagem da lâmina

Coloração para reticulócitos

Azul de Cresil-brilhante
1. Adicionar em um tubo de ensaio 100μl de azul de cresil-brilhante
2. Adicionar 100μl de sangue total com EDTA (1:1) e homogeneizar tubo
3. Colocar em banho maria à 37ºC por 20 minutos
4. Retirar tubo do banho maria e homogeneizar
5. Remover uma gota da solução e colocar em lâmina
6. Realizar o esfregaço
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Contagem de leucócitos por mm3 (μl)

Macro diluição

1. Homogeneizar o sangue
2. Adicionar 20μl de sangue em 380μl (1/20) de solução fisiológica
3. Homogeneizar bastante
4. Captar 10μl da solução e colocar em câmara de Neubauer
5. Contar os leucócitos nos 4 quadrantes
6. Realizar o cálculo aplicando a fórmula (diluição 1/20):

𝑛º 𝑑𝑒 𝑙𝑒𝑢𝑐ó𝑐𝑖𝑡𝑜𝑠 𝑒𝑚 𝑚𝑚3 = 𝐿𝑒𝑢𝑐ó𝑐𝑖𝑡𝑜𝑠 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑎𝑑𝑜𝑠 × 50

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Roteiro de aula prática

Professor MSc Cayo Amaral Abreu

Contagem diferencial de leucócitos

1. Colocar a lâmina em microscópio

2. Colocar uma gota de óleo de imersão
3. Observar em objetiva de 100x o 2º terço (ou 3º quarto) do esfregaço
4. Realizar a leitura da lâmina em “zig-zag” para que não se repita o
mesmo campo de contagem
5. Contar 100 células leucocitárias, diferenciando-as.

Coloração para reticulócitos

Azul de Cresil-brilhante
1. Adicionar em um tubo de ensaio 100μl de azul de cresil-brilhante
2. Adicionar 100μl de sangue total com EDTA (1:1) e homogeneizar tubo
3. Colocar em banho maria à 37ºC por 20 minutos
4. Retirar tubo do banho maria e homogeneizar
5. Remover uma gota da solução e colocar em lâmina
6. Realizar o esfregaço
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Contagem de reticulócitos

1. Contar reticulócitos presentes em 10 diferentes campos

2. Realizar uma média de reticulócitos em cada campo
3. Calcular o índice de reticulócitos aplicando a seguinte fórmula

𝑀é𝑑𝑖𝑎 𝑑𝑒 𝑟𝑒𝑡𝑖𝑐𝑢𝑙ó𝑐𝑖𝑡𝑜𝑠 × 𝐻𝑡 𝑑𝑜 𝑝𝑎𝑐𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒

% 𝑑𝑒 𝑟𝑒𝑡𝑖𝑐𝑢𝑙ó𝑐𝑖𝑡𝑜𝑠 =
45 (𝐻𝑡 𝑚é𝑑𝑖𝑜 𝑛𝑜𝑟𝑚𝑎𝑙)

4. Para o cálculo da quantidade de reticulócitos em mm3 de sangue

basta realizar uma regra de 3 com o volume de eritrócitos em mm 3 de
sangue

Velocidade de Hemossedimentação (VHS)

Método de Westergreen
1. Adicionar tubo capilar (200mm x 2,5mm) no tubo com EDTA,
inclinando suavemente para facilitar a passagem do sangue
2. Após o sangue atingir a marca, tapar a ponta com um dos dedos
3. Realizar a limpeza do tubo com uma gaze
4. Usar a massa de modelar/sabão para tampar a ponta oposta
5. Manter o tubo em temperatura ambiente e na posição vertical
6. Fazer a leitura da camada de eritrócitos após 1 hora

VR - ♀0 – 20mm ♂ 0 – 15mm
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Contagem de plaquetas

Método de Fonio

1. Em uma lâmina corada utilizar a objetiva de 100x e realizar uma

contagem dos eritrócitos em um campo de leitura
2. Contar em 10 campos diferentes, o número de plaquetas
3. Aplicar a fórmula abaixo para determinar a quantidade de plaquetas
em mm3 de sangue.

𝑛º 𝑑𝑒 𝑒𝑟𝑖𝑡𝑟ó𝑐𝑖𝑡𝑜𝑠(𝑚𝑚3 ) × 𝑛º 𝑑𝑒 𝑝𝑙𝑎𝑞𝑢𝑒𝑡𝑎𝑠 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑎𝑑𝑎𝑠

𝑛º 𝑑𝑒 𝑒𝑟𝑖𝑡𝑟ó𝑐𝑖𝑡𝑜𝑠 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑎𝑑𝑜𝑠

VR - ♀ e ♂ 140.000 – 400.000 mm3.