PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRO

Pesquisa de anticorpos irregulares (coombs indireto)

A pesquisa de anticorpos irregulares ou coombs indireto detectam
imunoglobulinas IgG ou fraes do complemento ligadas s hemcias, o que
pode ocorrer em situaes patolgicas levando principalmente hemlise. Este
teste faz parte da rotina de exames no pr-natal de gestantes Rh negativo,
triagem de anemias hemolticas e provas pr-transfusionais.
PRINCPIO DO TESTE
O soro Anti-IgG (Soro de Coombs) Prothemo destina-se pesquisa de
anticorpos da frao gamaglobulina humana, quer estejam adsorvidos s
hemcias humanas in vivo (Teste de Coombs Direto), quer estejam livres no
plasma, o que se detecta aps adsoro in vitro (Teste de Coombs Indireto).

COLETA DA AMOSTRA
O sangue deve ser coletado por procedimento assptico aprovado, com ou
sem adio de anticoagulante.
As hemcias obtidas de cogulo podem ser utilizadas em at 5 dias aps
sangria. As amostras coletadas em EDTA ou Heparina devem ser utilizadas em
at 48 horas. Se a demora para a execuo do teste for inevitvel, hemcias
de sangue coagulado e as colhidas em EDTA ou Heparina devem ser
separadas do soro/plasma, lavadas e ressuspendidas em soluo preservativa
de glbulos. Estocar a 2 a 8 C, por no mximo, 20 dias.
O sangue coletado em anticoagulante ACD, CPD e CPDA-1 pode ser utilizado
at a data de expirao, se armazenado entre 2 e 8C.
O armazenamento prolongado de hemcias antes da execuo do teste pode
causar deteriorao de antgenos e resultar em reaes mais fracas.

MATERIAIS NECESSRIOS:
- Estante de metal porta tubos
- Pipetas 100l e 2,0mL
- Tubos de ensaio 120 x 100 mm
- Soluo salina 0,9%
- Soro de Coombs


PROCEDIMENTO DO TESTE
1. Colocar em um tubo de hemlise uma gota de suspenso de hemcias a 5%
escolhidas para o teste, previamente preparadas em soluo salina 0,9%.
2. Adicionar duas gotas de soro a ser testado.
3. Acrescentar duas gotas de Albumina Bovina a 22% .
4. Incubar o tubo em Banho-Maria durante 15-30 minutos a 37C.
5. Lavar as hemcias do tubo por trs vezes com soluo salina 0,9%,
secando as bordas do tubo na ltima lavagem para retirar toda a soluo.
6. Acrescentar duas gotas do Soro Anti-IgG (Soro de Coombs) . Misturar bem.
7. Centrifugar a 3 400 rpm por 15 segundos.
8. Agitar suavemente o tubo para pesquisar aglutinao.

INTERPRETAO:
POSITIVO: (Presena de aglutinao): Presena de anticorpos livres no soro
do paciente, os quais correspondem a um ou mais antgenos presentes nas
hemcias usadas no teste.
NEGATIVO: (Ausncia de aglutinao): Sem presena de anticorpos livres no
soro do paciente.
LIMITAES DO PROCEDIMENTO TCNICO
I - Resultados FALSO-NEGATIVOS podem ocorrer:
1. Quando as hemcias no forem apropriadamente lavadas ou globulinas
humanas estiverem presentes na vidraria, resultando numa neutralizao das
antiglobulinas humanas.
2. Quando os anticorpos se eluem das hemcias durante incubao adequada,
no permitindo uma apropriada sensibilizao dos glbulos.
3. Quando hemcias e/ou reagente no so adequadamente conservados na
temperatura indicada, perdendo a reatividade.
4. Quando o Soro Anti-IgG (Soro de Coombs) foi omitido durante o teste.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
AGNCIA TRANSFUSIONAL - HOSPITAL UNIVERSITRIO JLIO MULLER Procedimento
operacional padro nas provas pr transfunsionais. Disponivel em:
http://www.ufmt.br/ufmt/site/userfiles/file/hujm/Comissoes%20e%20Comites/POP%20-
%20Provas%20pr%C3%A9%20-%20transfusionais.pdf>. Acessado em 04/07/2014.
Laboratrio de Imuno-hematologia. Disponivel em:
http://www.famema.br/hemocentro/hematologia.htm>. Acessado em 04/07/2014.
Normas e rotinas operacionais do laboratrio de anlises clnicas. Disponivel em:
http://pt.scribd.com/doc/28239025/Normas-e-Rotinas-Operacionais-Do>. Acessado em
04/07/2014.
PROTHEMO Produtos Hemoterpicos Ltda. Disponivel em:
http://www.prothemo.com.br/conteudo/templates/prothemo/instrucoes/inst_antiigg_nov20
09.pdf >. Acessado em: 05/07/2014.