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Laboratório do Procedimento Operacional Padrão

Centro de Saúde POP 001
SISTEMA ABO

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PRINCÍPIO BOLÓGICO DO TESTE

Os reagentes causam aglutinação direta macroscópica das hemácias que carregam
os antígenos correspondentes. As hemácias possuidoras do antígeno A se aglutinam
quando misturadas ao reagente Anti-A; igualmente, hemácias possuidoras do antígeno B
se aglutinam na presença do reagente Anti-B. O teste adicional empregando-se o reagente
Anti-A,B facilita o reconhecimento de subgrupos raros de baixa reatividade aglutinando as
hemácias dos grupos A, B, e A,B, mas não as do grupo O. O uso do reagente Anti-A,B é
recomendado na seleção de doadores do grupo O e na confirmação de resultados
negativos obtidos nos testes onde se utilizam os reagentes Anti-A e Anti-B.

DESCRIÇÃO DO PRODUTO
O reagente é preparado utilizando-se anticorpos monoclonais de origem murina
reativos em lâmina e tubo, fornecendo um teste específico qualitativo para a identificação
dos antígenos A e B nas hemácias. Cada lote produzido é analisado, segundo os métodos
adotados pelo FDA, assegurando potência, especificidade, reatividade e avidez iguais ou
superiores aos padrões de referência internacionais. O diluente dos reagentes contém:
Cloreto de Sódio, Albumina Bovina, Tampão Fosfato e Azida de Sódio a 0,1%. Os
reagentes foram otimizados para serem usados como fornecidos sem adições ou diluições.

O produto é fornecido em frascos de 10 ml, acompanhados de conta-gotas. Cada

gota equivale a 50 µl. Corantes: ANTI-A (Azul Brilhante), ANTI-B (Amarelo de Tartrazina)

MATERIAIS NECESSÁRIOS
 Luvas de procedimentos;
 Jaleco de manga longa;
 Sapato fechado;
 Máscara;
 Óculos de proteção;
 Amostra de sangue coletadas em tubo anticoagulante EDTA;
 Pipetas;
 Ponteiras;
 Solução Fisiológicas 0,9%;
 Centrifuga;
 Tubo de hemólise;
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 Reagente (Anti-A, Anti-B e Anti-D);

Teste em lâmina: lâminas de vidro, pipetas Pasteur e solução salina a 0,9%.

ARMAZENAMENTOS E PRECAUÇÕES
Conservar em geladeira entre 2° e 8°C.

Não congelar ou expor o produto a temperaturas elevadas.

Não utilizar após o vencimento.

Não utilizar o produto se observar nítida turvação o que pode indicar contaminação
bacteriana ou deterioração do produto.

Não reutilizar os frascos vazios.

Evitar a contaminação do reagente. SOMENTE PARA USO DIAGNÓSTICO “IN

VITRO”.

Os materiais de origem biológica devem ser considerados como se fossem

“potencialmente infectantes”. Devem ser estabelecidos métodos adequados para o
manuseio e descarte equivalentes aos utilizados para as amostras de sangue. O não
seguimento das instruções de uso pode resultar em diminuição do desempenho ótima do
produto.

COLETA DA AMOSTRA
O sangue deve ser coletado por procedimento asséptico aprovado, com ou sem
adição de anticoagulante. As hemácias obtidas de coágulo podem ser tipadas em até cinco
dias após sangria. As amostras coletadas em EDTA ou Heparina devem ser tipadas em
até 48 horas. Se a demora para a execução do teste for inevitável, hemácias de sangue
coagulado e as colhidas em EDTA ou Heparina devem ser separadas do soro/plasma,
lavadas e ressuspendidas em solução preservativa de glóbulos. Estocar a 2°- 8°C por no
máximo 20 dias. O sangue coletado em anticoagulante ACD, CPD e CPDA-1 pode ser
tipado até a data de expiração se armazenado entre 2° e 8°C. O armazenamento
prolongado de hemácias antes da execução do teste pode causar deterioração de
antígenos e resultar em reações mais fracas.

PROCEDIMENTO DO TESTE
1 - Preparar uma suspensão de glóbulos a 40% no próprio soro, plasma ou solução
salina a 0,9%.
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2 – Colocar uma gota do reagente Anti-A no lado esquerdo da lâmina e uma gota
de reagente Anti-B no lado direito. Em uma segunda lâmina, colocar uma gota de reagente
Anti-AB. Realizar os testes à temperatura ambiente (20º a 25º C).

3 – Adicionar 1 gota da suspensão de hemácias a cada reagente.

4 – Misturar o reagente com a suspensão de glóbulos em uma área de 2x3 cm.

Movimentar delicadamente a lâmina para promover a mistura e examinar a presença ou
não de aglutinação macroscópica. A aglutinação se inicia em poucos segundos. Não
observar a lâmina por mais de 2 minutos, quando não houver aglutinação.
Alternativamente, pode-se realizar o teste em lâmina utilizando-se uma suspensão de
glóbulos à 10% em solução salina à 0,9%.

INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS

POSITIVO: excluindo-se as limitações do teste, a aglutinação dos glóbulos pelo
reagente indica a presença do antígeno correspondente. Igualmente, a aglutinação da
amostra pelo reagente Anti-A, B indica a presença dos antígenos A e/ou B, caracterizando
não se tratar de grupo O.

NEGATIVO: excluindo-se as limitações do teste, a ausência de aglutinação no teste

indica ausência do antígeno correspondente.

O padrão de reação esperada com os fenótipos comuns é como se segue:

Classificação Direta Classificação Grup

Reversa o
Anti Anti- Anti- A1 B ABO
-A B A,B
+ o + o + A
o + + + o B
o o o + + O
+ + + o o AB
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Nota: A hemólise observada na tipagem direta ABO não deve ser interpretada
como resultado positivo, pois pode ser causada por contaminação bacteriana. Qualquer
discrepância entre a prova direta e reversa deve ser resolvida antes da liberação do
resultado de grupo sanguíneo.

LIMITAÇÕES DO TESTE
Resultado falso-negativo ou reações fracamente positivas podem ocorrer com
amostras de sangue de subgrupos A e B ou após estocagem prolongada. Resultado falso-
positivo pode ocorrer com hemácias colhidas do cordão de recém-nascidos. As variáveis
relativas ao procedimento técnico, tais como: técnica, suspensões muito concentradas ou
diluídas, centrifugação ou incubação inadequadas, solução salina à 0,9% contaminada ou
vidraria suja podem causar falsas reações positivas ou negativas. As anomalias
sorológicas inerentes à amostra podem causar reações inesperadas ou discrepância entre
tipagem direta e reversa. O Grupo ABO de um indivíduo só pode ser determinado se existir
uma concordância exata entre a classificação direta e classificação reversa. O reagente foi
otimizado para as técnicas descritas. Outros procedimentos devem ser validados pelo
usuário.

CONTROLES
1- O resultado obtido na tipagem ABO em adultos deve ser confirmada pela prova
reversa com reagente de células A1 e B (Rh negativos).

2- É importante que a reatividade e especificidade do reagente sejam confirmadas a

cada dia de uso utilizando-se um controle positivo, de preferência hemácia A2B e um
controle negativo, hemácia do grupo O.

DESEMPENHO
Os anticorpos Anti-A, Anti-B, Anti-A, B (Monoclonal Murino) aglutinam
especificamente hemácias humanas na presença dos antígenos correspondentes. A
especificidade do produto é determinada através da inclusão de um painel de hemácias,
representando os antígenos com freqüência igual ou superior a 1% na população. Para
assegurar reatividade adequada, na análise final para liberação do lote, os reagentes são
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testados com hemácias positivas para o antígeno correspondente. Em se tratando do

reagente Anti-A, incluem-se amostras do fenótipo A2B.

Nome: Stéfany Kawani Biscaia Análise Crítica Nome: Arlete Pereira Peres

e Cargo: Bioquímica.
Elaboração Cargo: Estagiaria de Enfermagem
Visto: Visto:
Data: 15/02/2023 Aprovação Data: 15/02/2023

Situação de revisão:

Situação Data Alteração