CLASSIFICAÇÃO ABO

Aula Prática
Fundamento:
Consiste na determinação dos grupos sanguíneos a partir de uma reação de
aglutinação, pesquisando-se antígenos eritrocitários na membrana das hemácias
(classificação direta) e anticorpos no soro (classificação reversa). Quando
hemácias são testadas com anti-soros contendo anticorpos específicos e ocorre
interação entre as hemácias e o anti-soro, presume-se que estas células sejam
dotadas do antígeno contra o qual o anticorpo é dirigido.

Material ✔REAGENTES
✔Sangue colhido com EDTA ✔Soros anti-A, anti-B e anti-AB
(ou sem anticoagulante) ✔Células “A1” e “B”
✔Centrífuga ✔Solução NaCl 0,9% (solução salina)
✔Tubos de ensaio (12 x 75 mm)
✔Bastão plástico/vidro
✔Caneta piloto
✔Pipeta Pasteur
✔Aglutinoscópio
✔Lâminas de vidro
 PREPARO DA SUSPENSÃO DE HEMÁCIAS a 5%

✔Em um tubo de hemólise colocar 20 gotas de sangue total (sangue

com anticoagulante).
✔Encher o tubo com solução salina 0,9% até 1 cm da borda.
✔Homogeneizar por inversão e centrifugar a 3.400 rpm por 1
minuto.
✔Retirar o tubo da centrífuga, sem misturar e aspirar o
sobrenadante até 1 cm da superfície dos glóbulos.
✔Repetir os itens 2, 3 e 4 por mais 2 vezes. Após a terceira
lavagem, retirar toda a quantidade de sobrenadante.
✔Retirar 1 gota das hemácias lavadas e transferir para outro tubo de
hemólise.
✔Adicionar 19 gotas de solução de NaCl 0,9% e homogeneizar.
PROCEDIMENTOS
CLASSIFICAÇÃO EM TUBO (PROVA DIRETA)

● Preparar uma suspensão a 5% das hemácias a testar;

● Rotular 3 tubos de hemólise: anti-A, anti-B e anti-AB;
● Colocar em cada tubo 2 gotas dos anti-soros anti-A, anti-B
e anti-AB, respectivamente;
● Adicionar 1 gota da suspensão de hemácias a 5% a cada
um dos tubos;
● Misturar levemente e centrifugar a 3.400 rpm por 15
segundos;
● Ressuspender delicadamente o botão de hemácias formado
e realizar a leitura observando se houve ou não
aglutinação.
PROCEDIMENTOS
CLASSIFICAÇÃO EM TUBO (PROVA REVERSA)

● Rotular dois tubos de hemólise: A e B;

● Colocar 2 gotas do soro a testar em cada tubo;
● Adicionar uma gota de suspensão de células “A1”
ao tubo “A”, e uma gota de células “B” ao tubo
“B”;
● Misturar levemente e centrifugar a 3.400 rpm
por 15 segundos;
● Ressuspender delicadamente o botão de
hemácias formado e realizar a leitura
observando se houve ou não aglutinação.
INTERPRETAÇÃO DOS GRUPOS SANGUÍNEOS ABO

PROVA DIRETA PROVA REVERSA

GRUPO
Reação com anti-soros: Reação com hemácias-teste:
SANGÜÍNEO
Anti-A Anti-B Anti-AB Células “A1” Células “B”
+ - + - + A
- + + + - B
+ + + - - AB
- - - + + O
 CAUSAS DE ERRO

✔Falhas na identificação e/ou troca de amostras;

✔Erro na interpretação dos resultados;

✔Vidraria mal lavada e com resíduos;

✔Reagentes vencidos ou contaminados;

✔Falha ao adicionar reagentes

OBSERVAÇÕES

✔Não realizar classificação reversa em recém-nascidos, pois

no sangue de cordão ainda não existem anticorpos naturais.
Os anticorpos só começam a ser produzidos a partir do 3º
mês de vida;

✔Na classificação reversa em imunodeprimidos (AIDS e LLC),

pode ocorrer discrepância (reversa não coincidir com direta)
por haver uma redução acentuada de anticorpos circulantes;
BIBLIOGRAFIA:

VALGUEIRO, M.C., GÓES, S.M.P. Práticas em Imunologia

eritrocitária. São Paulo: Medsi, 1999