DETERMINAO DOS GRUPOS SANGUNEOS DO SISTEMA ABO

Antonio Altair M. Oliveira Domenico H.G.P. Barbieri Lcia Helena M. Bruneri Primavera Borelli 1. PRINCPIO A determinao do grupo sanguneo consiste na identificao dos antgenos do sistema ABO existentes nos eritrcitos e que so geneticamente determinados por 3 genes, respectivamente, os genes A, B e O. Tais genes so autossmicos (genes alelos) presentes em um nico lcus ou ento muito prximos entre si, dificultando o crossing-over. Conforme a existncia dos antgenos A e B , as hemcias sero classificadas (fenotipicamente) como sendo do grupo A, B, AB ou O. No soro de indivduos de cada um dos grupos, existem anticorpos chamados naturais: Anti-A (em indivduos do grupo B); anti-B (em indivduos do grupo A); anti-A e anti-B (em indivduos do grupo O), sendo que os indivduos do grupo AB no possuem os anticorpos anti-A e anti-B em seu soro. Os grupos sanguneos so transmitidos por genes autossmicos e para a sua determinao empregam-se soros padres, cujas principais qualidades devem ser: ESPECIFICIDADE (antigenicidade), POTNCIA (ttulo) e AVIDEZ (rapidez para que se estabelea a aglutinao). COMPORTAMENTO DA PROVA DIRETA
HEMCIAS DO INDIVDUO TESTADAS COM SORO ANTI-A ANTI-B Aglutinao Aglutinao Aglutinao Aglutinao ANTGENO PRESENTES NAS HEMCIAS A B AB O GRUPO SANGUNEO

A B AB O

COMPORTAMENTO DA PROVA REVERSA SORO DO INDIVDUO ANTICORPO PRESENTE TESTADO COM HEMCIAS NO SORO TIPO A TIPO B Aglutinao Anti-A Aglutinao Anti-B Aglutinao Aglutinao Anti-A Anti-B

2. PROVA DIRETA
- EM TUBO a. preparar uma suspenso a 5% das hemcias (2,5 ml de salina e 2 a 3 gotas de sangue); b. em dois tubos de 12 x 75 mm, adicionar 2 gotas de suspenso acima; em um deles colocar uma gota de soro anti-A e no outro uma gota de soro Anti-B. Homogeneizar; c. centrifugar por 15 segundos a 1.000 r.p.m.; d. inclinando e agitando delicadamente o tubo, observar a presena ou no de aglutinao.

3. PROVA REVERSA
Na prova reversa utiliza-se o soro (ou plasma) do paciente e suspenses de hemcias (5%) conhecidas (hemcias do tipo A, Rh negativo e do tipo B, Rh negativo). a. em dois tubos de ensaio 12x75mm, colocar duas gotas do soro ou do plasma; em um dos tubos adicionar 2 gotas de suspenso de hemcias A, Rh negativo e, no outro, duas gotas da suspenso de hemcias B, Rh negativo; b. homogeneizar; c. centrifugar por 15 segundos a 1.000 r.p.m.; d. inclinando e agitando delicadamente os tubos, observar a presena ou no de aglutinao. e.

DETERMINAO DO FATOR Rh
1. PRINCPIO
Os antgenos eritrocitrios do sitema Rh-hr (D, C, E e seus respectivos alelos d, c, e) so determinados geneticamente . O sistema Rh comandado por 2 genes estruturais, intimamente ligados: 1 gene codifica o Ag D e outro codifica os Ags C ou c, E ou e. Os soros especficos existentes para identificao destes antgenos so os soros anti-D, anti-C, anti-E, anti-c, anti-e, no existindo o soro anti-d. Propriedades destes soros: a. so adquiridos por imunizao; b. possuem um timo de temperatura de 37 graus C; c. especificidade; d. potncia; e. reao em meio albuminoso. A separao dos indivduos em Rh positivo ou Rh negativo se faz segundo a presena ou no na hemcia, de antgeno D (Rh).

Soro

Anti-Rho (D)

REAO COM HEMCIAS DO PACIENTE Aglutinao positiva Ausncia de aglutinao

GENTIPO FATOR Rh

D/D ou D/-/-

2. TCNICA EM TUBO:
a. preparar a partir do sangue total em estudo, uma suspenso salina de hemcias a 5%; b. colocar em tubos (12 x75 mm) 2 gotas da suspenso acima e 2 gotas do soro anti-D; homogeneizar; c. centrifugar a 1.000 r.p.m. por 15 segundos; d. inclinar e agitando suavemente o tubo observar a presena ou no de aglutinao; e. se houver aglutinao, o indivduo classificado como Rh positivo; caso no haja aglutinao, colocar o tubo em banho a 37.C, durante 30 a 45 minutos; f. proceder como no item c; g. leitura: se houver aglutinao, o paciente classificado como Rh positivo, se no houver, dever-se- fazer pesquisa do fator Du. OBS: Em paralelo, fazer um controle positivo (com hemcias O, Rh positivo), um controle negativo (com hemcias O, Rh negativo) e um controle de albumina. 3. TCNICA PARA PESQUISA DO FATOR D DE BAIXA EXPRESSO a. proceder como nos itens a e g da tcnica em tubo; b. a seguir, lavar as hemcias 3 vezes com soluo fisiolgica (centrifugar a 3.000 r.p.m. por 1 minuto); c. aps a ltima lavagem, adicionar duas gotas do Soro de Coombs (soro anti-globulina humana) e agitar; d. centrifugar a 1.000 r.p.m. por 15 segundos e proceder a leitura. Presena de aglutinao: o paciente classificado como D positivo. Ausncia de aglutinao: o paciente classificado como Rh negativo.