Fisiologia Geral

2022/2023

Trabalho Prático Nº 5

Contagem de eritrócitos e contagem total de leucócitos

1. Enquadramento
Os elementos figurados do sangue incluem os eritrócitos (hemácias ou glóbulos vermelhos),
vários tipos de leucócitos (glóbulos brancos) e plaquetas (trombócitos). Hemograma é o nome
dado ao conjunto de análises dos elementos figurados do sangue e assume uma importância
primordial numa avaliação fisiológica. O hemograma é composto por três tipos de
determinações básicas que incluem as avaliações relativas aos eritrócitos (ou série vermelha),
aos leucócitos (ou série branca) e às plaquetas (ou série plaquetária). No contexto do estudo da
série vermelha (eritrograma), a contagem de eritrócitos (CE) é um parâmetro central, revelando
ajustes fisiológicos, assim como alguns tipos de alterações patológicas do sistema eritropoético
e anemias. A avaliação da serie branca (leucograma) assenta em dois parâmetros - contagem
total de leucócitos (CTL) e contagem diferencial de leucócitos (CDL), e fornece indicações sobre
a capacidade do organismo para responder e eliminar infecções.

2. Princípios dos métodos

O hemograma pode ser realizado utilizando métodos não automatizados, erradamente
denominados de “manuais” e, também, por meios automatizados com ampla variação
tecnológica e electrónica associada à informática. Várias publicações científicas compararam as
metodologias não automatizada e automatizada, demonstrando que os resultados obtidos não
apresentam diferenças estatisticamente significativas. Apesar da tendência para a utilização
crescente de equipamentos automatizados, os métodos não automatizados continuam a ter
grande aplicabilidade. Neste quadro, as contagens de eritrócitos (CE) e de leucócitos (CTL) são
feitas por microscopia, usando câmara de Neubauer (ver imagem abaixo).

Os métodos para contagem global das células sanguíneas envolvem, geralmente, a diluição do
sangue numa proporção adequada e num líquido diluidor específico, i.e., líquido de Hayem ou
soro fisiológico para a CE, e líquido de Türck (lisa os eritrócitos, mantendo a morfologia dos
leucócitos) para a CTL. As contagens são efectuadas em áreas específicas da câmara de
Neubauer.

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Imagem da câmara de Neubauer (esquerda) e do retículo com as diferentes áreas de contagem
(direita).

3. Procedimento experimental e tratamento de resultados

Obter uma amostra de sangue tratado com anticoagulante (ex. citrato de sódio, EDTA).

3.1. Contagem de eritrócitos (CE) em câmara de Neubauer

1. Pipetar 4 mL do líquido diluidor (soro fisiológico) para um tubo de ensaio.
2. Pipetar 20 µL de sangue para o tubo de ensaio (diluição de 1:200), lavando o interior da
ponta por aspiração e expulsão do soro fisiológico.
3. Agitar suavemente por inversão para uma correcta homogeneização.
4. Preencher os dois retículos da câmara de contagem, evitando o excesso de líquido e bolhas
de ar sob a lamela.
5. Deixar repousar um a dois minutos para sedimentação dos glóbulos.

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6. Focar a câmara no microscópio com pequena ampliação para localizar o retículo. Em
seguida, focar com ampliação de 100x ou 400x.
7. Fazer a contagem dos eritrócitos encontrados nos 5 campos específicos do retículo (4
quadrados médios laterais externos e 1 central, dentro do quadrado grande central).
8. Calcular o total de eritrócitos expresso em milhões de células por mm3.

Valores de referência para humanos:

♂ - 4,5 a 5,5 milhões/mm3 ♀ - 4,0 a 5,0 milhões/mm3
Recém-nascidos – 5,5 a 7,0 milhões/mm3

3.2. Contagem total de leucócitos (CTL) em câmara de Neubauer

1. Pipetar 20 µL de sangue para um microtubo com 380 µL de líquido diluidor de Türk*
(representa uma diluição de 1:20), lavando o interior da ponta por aspiração e expulsão do
líquido.
2. Agitar suavemente, por inversão do microtubo, durante dois minutos.
3. Preencher os dois retículos da câmara de contagem, evitando o excesso de líquido e bolhas
de ar sob a lamela.
4. Deixar repousar um a dois minutos para sedimentação dos glóbulos.
5. Focar a câmara no microscópio com pequena ampliação para localizar o retículo. Em
seguida, focar com ampliação de 400x.
6. Fazer a contagem dos leucócitos encontrados nas áreas específicas do retículo (4 quadrados
grandes laterais externos, com 1 mm2 de área cada).
7. Calcular o total de leucócitos expresso em nº de células por mm3.

* Composição do líquido diluidor de Türk: 2 mL ácido acético glacial + 1 mL azul de metileno

a 1% + 97 mL água destilada.

Valores de referência para humanos:

♂ e ♀ - 5.000 a 10.000/mm3
Crianças até 7 anos – 5.000 a 15.000/mm3
Recém-nascidos – 10.000 a 25.000/mm3

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