UNIVERSIDADE FEDERAL DO PAR

INSTITUTO DE TECNOLOGIA
FACULDADE DE ENGENHARIA DE ALIMENTOS
PROFESSOR: HERV ROGEZ








RELATRIO DE BIOQUMICA DE ALIMENTOS II
















Belm, 2011


UNIVERSIDADE FEDERAL DO PAR
INSTITUTO DE TECNOLOGIA
FACULDADE DE ENGENHARIA DE ALIMENTOS
PROFESSOR: HERV ROGEZ



ISOLAMENTO DE PIGMENTOS DO CHEIRO-VERDE POR
CROMATOGRAFIA EM COLUNA




LIVIA MARTINS DE MIRANDA- 09091001701





Trabalho apresentado disciplina de
Bioqumica de Alimentos II, sobre o
isolamento de pigmentos do cheiro-verde
por cromatografia em coluna pelo professor
Herv Rogez, com requisito avaliativo para
obteno de nota.





Belm, 2011
1. INTRODUO
O cheiro verde uma hortalia herbcea e condimentar, ainda no destacada
pelo volume ou valor comercializado (FILGUEIRA, 2003). tambm utilizada como
matria-prima na indstria de alimentos (MAKISHIMA, 1984), na forma desidratada,
sendo de grande importncia socioeconmica, principalmente por ser fonte rica em
vitaminas C e E, -caroteno, tiamina, riboflavina e minerais orgnicos (WILLS et al.,
1986).
As folhas das plantas contm um certo nmero de pigmentos corados que
geralmente pertencem a uma das duas categorias: clorofilas ou carotenides Os
pigmentos mais abundantes nas folhas so as clorofilas a e b e o -caroteno, bem como
pequenas quantidades de outros pigmentos como a xantofila (RICHARDSON;
CASTEEN, 1997).
As clorofilas so os pigmentos verdes que atuam como as principais molculas
foto receptoras das plantas. Elas so capazes de absorver certos tipos de comprimentos
de onda da luz visvel que ento so convertidos em energia pelas plantas. Duas formas
diferentes destes pigmentos so as clorofilas a e b. Os carotenides so pigmentos
amarelos que tambm esto envolvidos no processo fotossinttico. Adicionalmente, os
cloroplastos tambm contm vrios derivados de carotenos contendo oxignio
chamados de xantofilas. As xantofilas distinguem-se dos carotenos pela presena de
oxignio na sua estrutura molecular. Os complexos carotenoide-protena so geralmente
mais estveis do que os carotenoides livres. Como os carotenoides so altamente
insaturados, o oxignio e a luz so os fatores que mais os afetam (BOBBIO, 2003).
A cromatografia um mtodo de separao de misturas de substncias nos seus
componentes puros. Existem vrias formas de cromatografia, mas em todas, a mistura
de substncias separada nos seus componentes puros, por passagem da mistura num
material insolvel, para o qual as substncias tm vrios graus de afinidade. As
substncias com forte afinidade para o material insolvel movem-se muito lentamente,
enquanto as que tm pouca afinidade ou sem afinidade movem-se rapidamente
(HARRIS, 2001).
Na cromatografia em coluna, o slido utilizado na fase fixa deve ser um material
insolvel na fase mvel associada (eluente) sendo que os mais empregados so a slica
gel (SiO2) e alumina (Al2O3), geralmente na forma de p finamente dividido. A
mistura a ser separada colocada na coluna com um eluente pouco polar e aumenta-se
gradativamente a polaridade do eluente e consequentemente o seu poder de arraste de
substncias mais polares. O fluxo de eluente deve ser contnuo. Os diferentes
componentes da mistura mover-se-o com velocidades distintas dependendo de sua
afinidade relativa pelo adsorvente (grupos polares interagem melhor com o adsorvente)
e tambm pelo eluente. Assim, a capacidade de um determinado eluente em arrastar um
composto adsorvido na coluna depende quase diretamente da polaridade do solvente
com relao ao composto. medida que os compostos da mistura so separados,
bandas ou zonas mveis comeam a ser formadas; cada banda contendo somente um
composto (HARRIS, 2001).

2. OBJETIVO
A aula prtica teve como objetivo visualizar o isolamento de pigmentos naturais
(clorofilas a, b, carotenos e xantofilas) presentes no cheiro- verde.

3. MATERIAIS E MTODOS
3.1 MATERIAIS
Cheiro-verde;
Alumina (Al
2
O
3
);
Carbonato de clcio (CaCO
3
);
Metanol (MeOH);
ter de petrleo;
Benzeno (C
6
H
6
);
Sulfato de sdio anidro;
Acetato de etila (CH
3
COOCH
2
CH
3
);
Coluna cromatogrfica (25cm);
Areia branca;
Balana semi - analtica da marca Logen Scientific;
Becker;
Proveta;
Erlenmayer;
Esptula;
Basto de vidro;
Almofariz e pistilo;
Rgua;
Bomba de vcuo;
Papel filtro;
Pipeta;

3.2 MTODOS
3.2.1 Preparo da coluna
Foram introduzidos 20 ml de ter de petrleo na coluna cromatogrfica e com a
ajuda de um basto de vidro, colocou-se um pedao de algodo at o fundo para retirar-
se as bolhas de ar. Aps, acrescentou-se 1 cm de areia branca, 1,5 cm de alumina, 10 cm
de carbonato de sdio e 1cm de areia (ela evita que o carbonato, que mais leve do
que a areia, se disperse) na respectiva ordem, para constituir o que chamado de fase
slida ou fixa. Todo esse procedimento foi realizado com a torneira da coluna
fechada.

3.2.2 Preparo do extrato de cheiro verde
O cheiro verde foi macerado, com o auxlio do pistilo, com um pouco de areia
que ajudou a causar atrito rompendo assim as clulas das folhas mais facilmente. 40 ml
de metanol e 80 de ter de petrleo tambm foram adicionados para posteriormente
fazer a filtrao a vcuo.

3.2.3 Anlise cromatogrfica em coluna
Foram introduzidos na coluna 2 ml do extrato de cheiro verde deixando escoar
at a superfcie da areia, acrescentando ter de petrleo. Para a fase lquida ou mvel
foi preparada uma soluo de 100 ml de ter de petrleo e acetato de etila (3:1) para no
permitir o secamento do pico da coluna Se o adsorvente secar ou tiver bolhas de ar, a
obteno da separao completa de uma mistura ser provavelmente impossvel, pois os
dois fatores causam inclinao das bandas resultando em separao parcial.

4. RESULTADOS E DISCUSSO
Tendo-se a fase fixa utilizada - areia, alumina e carbonato de sdio - e a fase
mvel - mistura de ter de petrleo acetato de etila, - pode-se ento fazer anlise do
comportamento para cada solvente utilizado a partir do estudo das interaes entre a
fase mvel e a fase fixa obtendo-se os seguintes resultados: Aps a adio do extrato de
cheiro verde e do eluente observou-se que as estruturas das clorofilas a e b, apresentam
um metal (magnsio) no centro de uma porfirina (uma substncia que contm quatro
unidades ligeiramente modificadas de pirrol) e favorecem interaes mais fortes com a
fase fixa.
As xantofilas, apesar dos grupos hidroxila, possuem uma cadeia carbnica
relativamente longa responsvel pela pouca afinidade com a fase fixa.
O caroteno, um hidrocarboneto insaturado, mostrou interaes mais efetivas
com a fase mvel que com a fixa. Logo, o grau de afinidade de cada pigmento com a
fase fixa seria, as clorofilas a e b como as que tm maior afinidade seguidas pelas
xantofilas e por ltimo os carotenos como os que tm menor afinidade com a fase fixa.
A polaridade tambm tem influncia na afinidade dos pigmentos com as fases,
de um modo geral, os compostos apolares atravessam a coluna com uma velocidade
maior do que os compostos polares, porque os primeiros tm menor afinidade com a
fase fixa que polar, logo, os carotenos, que atravessaram primeiro e mais rpido a
coluna, no possuem tanta afinidade com a fase fixa, sendo assim os mais apolares dos
pigmentos analisados. A clorofila a foi a que atravessou a coluna logo aps, mostrando
um grau de polaridade diferente do caroteno (menos apolar). A clorofila b tambm
apresentou um grau de polaridade diferente, j que demorou mais a sair da coluna. As
xantofilas foram as que mostraram um grau de afinidade maior com a fase fixa, sendo as
que saram por ltimo da coluna.















5. CONCLUSO
A separao e visualizao dos pigmentos foram obtidas, possibilitando a
visualizao de sada dos carotenos, clorofilas a, b e xantofilas na respectiva ordem,
concluindo-se que o grau de polaridade e a estrutura molecular dos compostos
influenciam no grau de afinidade de cada um dos pigmentos pelas fases fixa ou
mvel, sendo o caroteno o mais apolar seguido pela clorofila a, b, e por ltimo a
xantofila que seria a menos apolar dos pigmentos.



















6. REFERNCIAS
B.C. Richardson, T.G. Casteen, Experience the Extraordinary Chemistry of
Ordinary Things: a Laboratory Manual , 3
rd
edition, John Wiley & Sons, Inc., New
York, 1997.

BOBBIO, P. A. Introduo Quimica de Alimentos. 3 ed. Moderna, So Paulo. 2003

FILGUEIRA, F.A.R. Novo Manual de Olericultura: agrotecnologia moderna na
produo e comercializao de hortalias. Viosa: UFV, 2003. 412p.

HARRIS, D.C., Anlise Qumica Quantitativa, 5
a
ed., LTC, RJ, 2001.

MAKISHIMA, N. Aspectos gerais da cultura da salsa. Informe Agropecurio, Belo
Horizonte, v.10, n. 120, p. 78-80, 1984.

WILLIS, R.B.H.; LIM, JSK.; GREENFIELD, H Composition of Australian foods. Leaf,
stem and other vegetables. Food Technology in Australia, Sidney, n.10, p. 416- 417,
1986.