Acadmicos: Bruna Farias, Lucas Geraldini Coelho, Maria Gabriela Alves,

Phellipe Rodero Bataglini e Thaynny Oliveira

DETERMINAO DA ATIVIDADE DA AMILASE SALIVAR (A)

1. INTRODUO
A amilase, tambm chamada de distase, uma enzima que catalisa a
liberao das ligaes glicosdicas 1-4 do amido e glicognio. Existem dois
tipos de amilase: as -amilases e as -amilases. As -amilases so
encontradas nas bactrias, nos tecidos e nos fludos animais, incluindo o
sangue, a urina e a saliva. As -amilases so encontradas em plantas de
organizaes mais complexa.
As -amilases agem sobre o amido, produzindo uma ruptura progressiva das
molculas. Desta forma, o amido se desdobra, inicialmente, em dextrinas
redutoras, que so logo hidrolisadas, transformando-se em unidades menores.
O amido hidrolisado pela -amilase at maltose.
Em um meio contendo iodo e amido ocorre formao de um complexo
coloidal azul. Este complexo ficar comprometido (perda da cor) quando a este
meio for adicionado certa quantidade de amilase. Uma vez que, esta enzima
capaz de hidrolisar o amido, fazendo com que ocorra uma diminuio da
intensidade da cor azul. Quanto maior a atividade enzimtica da amilase menor
a intensidade de cor.
A -amilase tem temperatura e pH tima de 37C e 7,0-7,2, respectivamente.
A atividade da amilase salivar (A) mede o tempo mnimo que a amilase leva
para digerir totalmente o amido em condies timas de temperatura, pH e
concentrao de cloretos. Quando o amido estiver totalmente digerido, isto ,
transformado em maltose, teremos reao negativa com o iodo e
consequentemente a soluo ficar com a cor castanha do iodo. Dizemos,
ento, que foi atingido o ponto acromtico. Na prtica, incuba-se a saliva com o
amido em condies timas de temperatura (37C), pH e concentrao de
cloretos e, de minuto a minuto, faz-se a leitura da digesto do amido pela
reao com o iodo, at ser atingido ponto acromtico. O resultado expresso
em unidades amilsicas (ua). Uma unidade amilsica a atividade da amilase
para digerir totalmente 50mg de amido (5ml de soluo de amido a 1g%), em
10 minutos, em condies timas de temperatura, pH e cloreto. Normalmente,
A varia entre 100 a 150 ua/ml de saliva.
Em pacientes muito susceptveis crie dental, os valores de A so muito
elevados em relao aos pacientes resistentes crie dental, onde os valores
de A so bem menores.
O Lugol ou soluo de Lugol uma soluo de Iodo (1%) em equilbrio com KI
(2%) em gua destilada. Este produto se emprega frequentemente como
desinfetante e antissptico. O soluto de Lugol um indicador para testar a
presena de amido, tendo em vista suas propriedades. O corante ir colorir o
amido medida que interage com a estrutura enrolada do polissacardeo,
produzindo cor azul escura (ENGELBRECHT, Fred e WENDT, Thomas).

2. OBJETIVOS
Determinar a atividade da amilase salivar.
Analisar o efeito do tempo de incubao sobre a atividade enzimtica.

3. MATERIAIS E MTODOS

Materiais:
Bquer de 10mL
Pipeta de 2 e 5mL
Tubos de ensaio
Estantes para tubos
Garra de madeira
Tubos de hemlise (11)
Erlenmeyer
Conta-gotas
Cronmetro
Saliva diluda
Soluo de amido 1%
Soluo de iodo
Soluo salina

Mtodo:
Colocou-se 1 mL de amido a 1% (50mg de amido + 5 ml de gua), num
tubo de hemlise.
Adicionou-se 2 gotas de soluo salina: saliva colhida de um
componente do grupo pelo seguinte procedimento: lavou-se bem a boca
com gua, colocou-se um chumao de algodo sob a lngua o qual foi
removido aps estar embebido em saliva, o material foi espremido para
coletar cerca de 2 mL de saliva livre de espuma. Pipetou-se 1 mL de
saliva e misturou-se com 9 mL de gua destilada. Deste recipiente,
pipetou-se 1 mL da saliva diluda e adicionou-se 9 mL de gua.
Adicionou-se 1 mL de saliva diluda (1:100) Diluio Seriada.
A Soluo foi levada para banho-maria a 37C.
Aguardou-se o tempo conforme a tabela 1 e adicionou-se 2 gotas de
Iodo em cada um dos tubos de hemlise. Observou-se os resultado e
estes foram anotados na Tabela 1, alm de utilizados para os clculos
do tempo de viragem da reao.

Tabela 1: Tempo de durao de reao e colorao obtida.
TUBO 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Azul
Castanho


Calculou-se o tempo o tempo mnimo da amilase para digerir o amido, ou seja,
at a colorao do substrato ser modificada. E, ento respondeu-se qual o
valor obtido da atividade da amilase salivar, partir da seguinte frmula:

A = 10D/T ua/ml de saliva

A = Atividade da amilase salivar mnima para digesto completa do amido em
condies ideais
D = Diluio utilizada
T = Tempo de viragem

4. RESULTADO E DISCUSSO
O tempo mnimo encontrado para que a amilase degradasse completamente o
amido foi 5 minutos. Nos tubos 1, 2 e 3 aps a adio de iodo observou-se uma
colorao azul-escuro (colorao tambm encontrada nos tubos 8 e 10 por
motivos abordados adiante). O amido quando tratado com Lugol modifica sua
colorao formando um complexo de cor azul-intensa. J no tubo 4 foi
encontrado uma colorao levemente mais clara, observando a degradao
parcial do amido. Isso ocorre porque esta substncia forma um complexo de
adsoro (complexos de transferncia de carga) com o iodo. O amido
composto basicamente de amilose e amilopectina. A amilose possui
conformao helicoidal, acredita-se que a cor azul intensa seja resultante da
adsoro do iodo nessas cadeias. (UFPA, 2001). Portanto, em at 4 minutos a
amilase no degradou completamente o substrato.
Nos tubos 5, 6, 7 e 9 aps a adio de Iodo observou-se uma colorao
castanho clara, isso ocorre quando o amido estiver totalmente digerido, isto ,
transformado em maltose. O Lugol um reagente de polissacardeos. No
reage com monossacardeos ou dissacardeos. Pelo fato de frutose e glicose
serem monossacardeos, no h esse tipo de ligao, e, portanto, a cor
castanha do Iodo permanece. (NUNES, Sandra). Portanto, encontrou-se o T
tempo mnimo para a amilase digerir completamente o amido em condies
timas.
A colorao azul nos tubos 8 e 10 se deve ao fato da errnea diluio e
pipetagem, pois, ao pipetar a soluo diluda ocorreu uma concentrao de
amilase maior do que a esperada, provavelmente ocorrida por serem os
primeiros tubos de ensaio que foram montados, o que indica uma que a mistura
da diluio no havia ainda sido feita, culminando em uma reao amido-iodo
que resultou na colorao azul-escuro.
A partir dos valores obtidos e utilizados na frmula, o valor de A foi de 200
ua/ml de saliva. Baseado em MORIEL, Patricia et. al. o valor est dentro da
normalidade para o perodo ps-prandial. Como o doador da saliva havia
terminado sua refeio havia poucos minutos, ainda persistia a alta atividade
dessa enzima. O valor mdio encontrado para indivduos saudveis e em jejum
nessa pesquisa foi de 150 ua/ml de saliva.
A amilase salivar uma importante enzima presente na cavidade oral. A sua
principal funo promover a hidrlise do amido transformando-o em maltose,
o qual pode servir como substrato para as bactrias orais executarem as suas
funes como: a produo de cidos de fermentao, que podem promover a
desmineralizao do esmalte, facilitando a formao da crie. (Apud
STEINBERG & ZIMMERMAN, 1978). Logo, pode-se inferir que quanto maior a
atividade dessa enzima no indivduo, maior ser a degradao dos grandes
carboidratos, como amido, em pequenos (ex: maltose), logo, esse estar mais
propcio a adquirir cries. Por outro lado, indivduos com menor atividade
enzimtica da amilase, so menos susceptveis crie dentria.

5. CONCLUSO
No experimento realizado, utilizou-se a mesma temperatura, pH e mesmo
volume e concentrao de reagentes e produtos, tendo como nica varivel o
tempo. E, com tal trabalho demonstrou-se que este um fator determinante e
importante no resultado final de uma reao, visto que os tubos iniciais
expressavam uma reao ainda no estabelecida, enquanto que os ltimos
tubos expuseram o produto completamente formado. Portanto, para que possa
ser produzir determinado produto utilizando-se da ao enzimtica no
processo, deve-se contabilizar o tempo como um dos fatores de grande
importncia.

6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS:
ENGELBRECHT, Fred; WENDT,Thomas. Deteco de acar: um problema
dirio quando se enfrenta a diabetes. Revista Science in School. Disponvel
em: < http://www.scienceinschool.org/2008/issue9/diabetes/portuguese>
Acessado em 10 de maro de 2014.
UNIVERSIDADE FEDERAL DO PAR. Iodometria: deteco do ponto final.
Disponvel em:< http://www.ufpa.br/quimicanalitica/detectapfinaliodo.htm >.
Acessado em: 10 de maro de 2014.
MORIEL, Patricia et al. Influncia do fumo na atividade da amilase salivar e na
curva glicmica. Rev. Nutr. [online]. 2010, vol.23, n.4 [cited 2014-07-11], pp.
565-572 . Disponvel em:
<http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1415
52732010000400007&lng=en&nrm=iso>. Acessado em 11 de junho de 2014.
NUNES, Sandra. et al. Bioqumica prtica: protocolo para anlise de
biomolculas e exerccios complementares. Disponvel em: <
http://www.repositorio.ufma.br:8080/jspui/bitstream/1/445/1/Livro%20de%20Bio
quimica%20Pratica.pdf >. Acessado em 8 de maro de 2014.
Steinberg AD, Zimmerman S. The Lincoln dental caries study: a three year
evaluation of dental caries in persons with various mental disorders. J AmDent
Assoc. 1978; 97(6): 981-4.