EXTRAO LQUIDO-LQUIDO DO -CAROTENO E LICOPENO DA POLPA DO TOMATE E ANLISE POR CCD (CROMATOGRAFIA DE CAMADA DELGADA)

Franklin Kaic Dutra PEREIRA , Milena Tarciana FACCIO , Larissa Maria Gomes DUTRA , Nislanne 3 1 Pereira LINHARES , Paulo Sergio Gomes da SILVA
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Curso de Licenciatura em Qumica, Universidade Federal de Campina Grande, CES, Cuit-PB. E-mail: franklin_kaic@hotmail.com. Telefone: (83) 3372 1920. 2 Curso de Bacharelado em Nutrio, Universidade Federal de Campina Grande UFCG, CES, Cuit-PB. Email: lara-dutra@hotmail.com. Telefone: (83) 3372 1937 3 Curso de Licenciatura em Qumica, Universidade Estadual da Paraba, Campus I, Campina Grande PB. Email: lenypynk@hotmail.com. Telefone: (83) 3315 3356.

RESUMO
A cromatografia em camada delgada (CCD) consiste na separao dos componentes de um mistura atravs da migrao diferencial sobre uma camada delgada de adsorvente retido sobre uma superfcie plana. O processo de separao esta fundamentado, principalmente no fenmeno de adsoro. As substncias ascendem por capilaridade diferente de acordo com sua natureza e com a intensidade da interao solvente com adsorvente. Este trabalho tem como objetivo extrair o licopeno e o -caroteno do extrato de tomate industrial, esse processo possvel devido s propriedades de solubilidades dos compostos orgnicos, o licopeno solvel em lcool etlico devido s polaridades iguais, isso favorece a extrao do licopeno quando o extrato tratado com lcool, j que o caroteno no solvel em lcool. Para a extrao do -caroteno utilizado o clorofrmio, pois o caroteno solvel neste por terem polaridades iguais, a adio da soluo de NaCl utilizada para retirar a gua e as impurezas da soluo de -caroteno e clorofrmio. O aquecimento em banhomaria serve para favorecer a extrao e garantir que todo o licopeno e o -caroteno fossem extrados em seus respectivos solventes apropriados.

PALAVRAS CHAVES: carotenoides. 1 INTRODUO

Extrao

lquido-lquido,

cromatografia

delgada,

A cromatografia em coluna foi primeiramente empregada em 1906 pelo botnico russo TSWETT para isolar pigmentos de plantas. Outra configurao, a forma aberta denominada cromatografia em camada delgada, Thin-Layer

Chromatography (CCD), foi introduzida no incio da dcada de 50 por KIRCHNER e posteriormente popularizada por STAHL, (Snyder et al., 1979).

Citam Cass et al. (2001), que o primeiro tratamento matemtico da teoria da cromatografia foi desenvolvido em 1952 por Martin e Synge, rendendo a estes pesquisadores o prmio Nobel. Trs tipos de fludos com amplas diferenas de propriedades fsico-qumicas; lquidos e gases, de baixa e alta densidade (includos aqui os gases no estado supercrtico) podem ser empregados como fase mvel (Guiochon, 1993). So quatro os mecanismos de separao ou processos responsveis pela reteno do soluto pela fase estacionria. Estes em consequncia conduzem a quatro mtodos bsicos, alm do lquido-slido tm-se: lquido-lquido (partio), a troca inica e a excluso por tamanho. A tcnica da extrao envolve a separao de um composto, presente na forma de uma soluo ou suspenso em um determinado solvente, atravs da agitao com um segundo solvente, no qual o composto orgnico seja mais solvel e que seja pouco miscvel com o solvente que inicialmente contm a substncia. Quando as duas fases so lquidos imiscveis, o mtodo conhecido como "extrao lquido-lquido. Neste tipo de extrao o composto estar distribudo entre os dois solventes. O sucesso da separao depende da diferena de solubilidade do composto nos dois solventes. Geralmente, o composto a ser extrado insolvel ou parcialmente solvel num solvente, mas muito solvel no outro solvente. Em uma extrao lquido-lquido, o composto que se deseja obter encontrase dissolvido em um solvente A e para extra-lo, emprega-se outro solvente B, sendo os dois solventes imiscveis. A e B so agitados e o composto ento se distribui entre os dois solventes de acordo com as respectivas solubilidades. A razo entre as concentraes do soluto em cada solvente denominada "coeficiente de distribuio ou de partio", (K). Com a extrao de compostos orgnicos pode-se realizar uma cromatografia, que um mtodo fsico-qumico de separao que se fundamenta na migrao diferencial dos componentes de uma mistura devido a diferentes interaes entre duas fases imiscveis: fase mvel (gs, lquido ou um fluido supercrtico) e uma fase

estacionria (fixa, em uma coluna ou superfcie slida). Os vrios tipos de combinaes entre fases mveis e estacionrias torna a cromatografia uma tcnica extremamente verstil e de grande aplicao. A cromatografia pode ser utilizada para a identificao de compostos, por comparao com padres previamente existentes, para a purificao de compostos, separando-se as substncias indesejveis e para a separao dos componentes de uma mistura.

1.1. Carotenoides Carotenoides so pigmentos amarelos, laranjas e vermelhos sintetizados por vegetais, sendo alguns dos mais conhecidos o betacaroteno, alfa-caroteno, licopeno e lutena. O betacaroteno um exemplo de um carotenoide provitamina A, ou seja, o que significa que pode ser convertido em retinol pelo nosso corpo, composto importante para o crescimento sseo e para a viso. O licopeno por sua vez tem forte ao antioxidante no combate aos radicais livres com efeito anticancergeno sobre a prstata. (FONTONA, 2012). O betacaroteno e o licopeno podem ser obtidos principalmente em frutas e vegetais de colorao vermelha ou alaranjada. Por meio de uma extrao com solventes orgnicos possvel se obter esses compostos a partir de extrato de tomate comum. Os carotenoides so, em geral, pigmentos naturais responsveis pelas cores de amarelo a laranja ou vermelho de muitas frutas, hortalias, gema de ovo, crustceos cozidos e alguns peixes. Esses compostos tem ganhado evidncia por terem efeitos benficos sade. A caracterstica de maior destaque nestas molculas um sistema extenso de duplas ligaes conjugadas que confere aos carotenoides as suas atraentes cores. Carotenoides hidrocarbonetos so

denominados simplesmente de carotenos. (ROSEIN, 2006). Dentre os principais carotenos esto os ismeros Licopeno e -caroteno. O Licopeno possui uma estrutura acclica com ligaes duplas conjugadas e vem

sendo estudado, por exemplo, para o tratamento do cncer de esfago, pulmo e prstata. O -caroteno possui tambm ligaes duplas conjugadas, mas com estrutura bicclica, e o carotenoide de maior potncia vitamnica A (SILVA, 2001). O tomate possui esses dois compostos. Na Figura 1, so mostradas as estruturas desses compostos. Figura 1 - Frmulas estruturais de traos para o -caroteno e para o Licopeno

Fonte: SILVA, 2001

Apesar de serem ismeros, esses compostos apresentam diferentes solubilidades em solventes orgnicos devido s suas diferentes estruturas moleculares. Assim, consegue-se obter extratos de cada um desses compostos atravs de uma extrao lquido-lquido de uma soluo concentrada de tomate (extrato de tomate) em alguns solventes orgnicos.

1.2. CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA A cromatografia em camada fina (ou delgada) uma tcnica simples, barata e muito importante para a separao rpida e anlise qualitativa de pequenas quantidades de material. Ela usada para determinar a pureza do composto, identificar componentes em uma mistura comparando-os com padres, acompanhar

o curso de uma reao pelo aparecimento dos produtos e desaparecimento dos reagentes e ainda para isolar componentes puros de uma mistura. Na cromatografia de camada delgada a fase lquida ascende por uma camada fina do adsorvente estendida sobre um suporte. O suporte mais tpico uma placa de vidro (outros materiais podem ser usados). Sobre a placa espalha-se uma camada fina de adsorvente suspenso em gua (ou outro solvente) e deixa-se secar. A placa coberta e seca chama-se placa de camada fina. Quando a placa de camada fina colocada verticalmente em um recipiente fechado (cuba cromatogrfica) que contm uma pequena quantidade de solvente, este ir eluir pela camada do adsorvente por ao capilar (RGO, et. al. 199). Figura 2 Cromatografia em CCD

Fonte: Rgo, et. al, 1999. A amostra colocada na parte inferior da placa, atravs de aplicaes sucessivas de uma soluo da amostra com um pequeno capilar. Deve-se formar uma pequena mancha circular. medida que o solvente sobe pela placa, a amostra compartilhada entre a fase lquida mvel e a fase slida estacionria. Durante este

processo, os diversos componentes da mistura so separados. Como na cromatografia de coluna, as substncias menos polares avanam mais rapidamente que as substncias mais polares. Esta diferena na velocidade resultar em uma separao dos componentes da amostra. Quando estiverem presentes vrias substncias, cada uma se comportar segundo suas propriedades de solubilidade e adsoro, dependendo dos grupos funcionais presentes na sua estrutura (Figura 2).

2 METODOLOGIA 2.1. ETAPA I Extrao do licopeno e do betacaroteno Com o intuito da realizao da Cromatografia de Camada Delgada para o licopeno e o betacaroteno foi necessria a extrao desses compostos a partir de extrato de tomate. Em um bquer, inicialmente pesou-se aproximadamente 10 gramas de extrato de tomate. Enquanto o extrato de tomate era pesado, o banhomaria foi colocado para aquecer. Ao extrato pesado, adicionou-se 10 mL de Etanol 95%, e ao verificar-se com o auxlio de um termmetro que a temperatura do banho estava em 40 C, o bquer foi levado ao aquecimento, e mexeu-se a mistura cuidadosamente utilizando uma esptula pelo perodo de 5 minutos. Com a mistura agora aquecida e bem diluda, utilizando um papel de filtro circular, preparou-se um filtro estriado (em forma de leque) e filtrou-se a mistura para um erlenmeyer. Pressionou-se o papel de filtro contra o funil para a mxima obteno de lquido. Reservou-se a polpa obtida em um bquer para a extrao do betacaroteno, e ao lquido obtido adicionou-se uma pequena quantidade de Sulfato de sdio anidro, enquanto o erlenmeyer foi agitado por cerca de 1 minuto, com o intuito de retirar alguma gua ainda existente. A mistura foi mantida em repouso por 3 minutos, em seguida realizou-se nova filtrao obtendo-se assim o licopeno, de colorao amarelada.

Aps a obteno do licopeno, polpa previamente reservada adicionou-se, na capela, 10 mL de clorofrmio e manteve-se a mistura em constante agitao com auxlio de uma esptula por 5 minutos. Filtrou-se ento a mistura para um erlenmeyer, conduzindo-a em seguida para um funil de separao, onde se adicionou ao sistema 4 mL de soluo saturada de Cloreto de Sdio. Foram realizadas as tcnicas de agitao recomendadas para um funil de separao (com a torneira fechada e o funil tampado, mover a vidraria em movimentos circulares, e em seguida ao recolocar o funil no suporte remover a tampa por alguns segundos para que qualquer gs desprendido fosse liberado), e em seguida realizou-se a separao das fases, sendo a parte mais densa da mistura heterognea (parte inferior) a que foi recolhida para o erlenmeyer. Adicionou-se uma pequena quantidade de sulfato de sdio anidro, e assim foi obtido o betacaroteno, de colorao laranja viva. O licopeno e betacaroteno obtidos foram transferidos para pequenos frascos escuros recobertos por papel alumnio, a fim de isol-los da luz solar. 2.2. ETAPA II Cromatografia de Camada Delgada Para a realizao da cromatografia de camada delgada, utilizaram-se as placas. Em cada uma das trs placas, com o auxlio de capilares, foram aplicadas amostras de licopeno e betacaroteno. s trs cmaras de eluio utilizadas foi adicionado um papel de filtro, e solventes diferentes, sendo eles hexano, clorofrmio e uma mistura dos dois anteriores. As placas foram ento colocadas nas cmaras de eluio, at que houvesse uma boa adsoro. Em seguida as placas foram conduzidas capela, para que se desse a evaporao dos solventes para poderem ir ento para as cmaras de revelao, que continham cristais de iodo, por cerca de 8 minutos, at que ficou visvel o arraste das amostras pela placa.

3 RESULTADOS E DISCUSSO

Realizaram-se os passos da metodologia e foram obtidos os carotenoides: licopeno e betacaroteno, presentes no extrato de tomate, que foram utilizados na cromatografia. Primeiramente, aps a mistura do extrato de tomate com o etanol a 95%, houve a separao dos carotenoides do extrato de tomate, em que os carotenoides diluram-se no etanol formando uma fase lquida (etanol 95% com os carotenoides) e uma polpa do extrato, a partir do princpio da extrao lquido-lquido em que o composto se solubiliza no solvente em que ele possui maior afinidade, no caso, o etanol no devendo passar de 40 para obter uma maior pureza. Em seguida foi obtida a maior quantidade possvel de lquido contendo o licopeno e o betacaroteno atravs da filtrao. Para separao dos carotenoides foi feita uma nova filtrao, depois da adio do sulfato de sdio anidro para que este reaja com o lquido filtrado, obtendo-se o licopeno. A partir da polpa retida no papel filtro foi extrado o betacaroteno, que estava cristalizado. Aps extrao, foi possvel observar a partir de qual dos solventes utilizados clorofrmio, hexano e mistura de ambos seria obtido um maior arraste do licopeno e do betacaroteno, tendo como adstringente a slica gel, e o fator de reteno. Ento, observam-se na Figura 3, que aps a revelao por iodo, a mistura de clorofrmio e hexano houve um maior deslocamento de ambas as substncias extradas. A partir do arraste das substncias possvel calcular o fator de reteno para cada uma das placas, onde vemos na Figura 4:

Figura 3 Analogia do resultado obtido laboratorialmente

Fonte: prpria (2012).

Figura 4 Resultado do ndice de reteno

Fonte: prpria (2012). 4 CONCLUSO Ao realizar a extrao, observa-se um olhar metodolgico para aulas laboratoriais de qumica orgnica, com o intuito de motivar os alunos a um melhor entendimento sobre a extrao lquido-lquido. Em relao extrao, foi minunciosamente quantificada nas substncias necessrias para realizao do mesmo. Sobre a CCD, a mistura de clorofrmio e hexano houve um maior

deslocamento de ambas as substncias extradas, com o clorofrmio, no obteve nenhum deslocamento, e com o hexano, s o betacaroteno. Assim d para fazer os clculos do ndice de reteno, mostrado nos resultados. 5 REFERNCIAS CASS, Q. B., DEGANI, A.L.G., Desenvolvimento de Mtodos por HPLC, Fundamentos, Estratgias e Validao, EdUFDCar, 77p, 2001. Chasan, L. T., WILLET, W. C. A prospective study of carotenoid and vitamin A intakes and risk of cataract extraction in US women. Am J Clin Nutr 70(4): 50916. 1999. COSTA NETO, Claudio. Analise Orgnica. Mtodos e Procedimentos para Caracterizao de Organoqumios. Vol 1 e 2. Editora UFRJ. Rio de Janeiro; 2004. FONTONA, J. D.; MENDES, S. V.; PERSIKE, D. S.; PERACETTA, L. F.; PASSOS, M. Carotenides: cores atraentes e ao biolgica. Disponvel no site: http://www.biotecnologia.com.br/revista/bio13/caroteno.pdf. Acessado dia: 12/10/2102. GUIOCHON, G.A., Chromatography, Today and Tomorrow , Analytical Acta, 283, 309-319, 1993. Kimura, M.; Rodriguez-Amaya, D. B.; Farfan, A. Fontes Brasileiras de Carotenoides v. 1, p. 16-26, 2008. RGO, E.R. do; FINGER, F.L.; CASALI, V.W.D. Qualidade de frutos de tomate da cv. Santa Clara, mutante de fruto amarelo e seus hbridos F1 . Horticultura Brasileira, Braslia, v. 17, n. 2, p. 106-109, julho 1999. Silva, A. G. Extrao e estabilidade dos carotenoides obtidos de tomate processado (Lycopersicon esculentum Mill). p 16-24, 2001. SNYDER, KIRKLAND, J. J., Introduction to Modern Liquid Chromatography, sec. Ed., John Wiley & Sons, INC, 863p, 1979. Ronsein, G; Miyamoto, S.; Bechara, E.; Di Mascio, P.; Qumica Nova, 2006, Vol. 29, No. 3, 563-568.