UFS UNIVERSIDADE FEDERAL DE SERGIPE

CCET CENTRO DE CINCIAS EXATAS E TECNOLGICAS

DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA DE MATERIAIS

Relatrio da Atividade Experimental: Espectrofotometria UV/VIS

So Cristvo 2011

UFS UNIVERSIDADE FEDERAL DE SERGIPE

CCET CENTRO DE CINCIAS EXATAS E TECNOLGICAS

DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA DE MATERIAIS

109414 Caracterizao de Materiais Turma: T1 Professor: JEREMIAS DE SOUZA MACEDO

Relatrio da Atividade Experimental: Espectrofotometria UV/VIS

Alunos: Alexsandra de Moraes Ferreira George Rocha Santos Lima

So Cristvo 2011

Sumrio
1. INTRODUO ........................................................................................................................................... 4

2.

OBJETIVOS ........................................................................................................................................... 6

3.

METODOLOGIA ........................................................................................................................................ 6 3.1 PREPARO DAS SOLUES PADRES DE AZUL DE METILENO ........................................................................... 6 3.2 CALIBRAO DO ESPECTROFOTMETRO E CONSTRUO DA LINHA BASE .................................................... 6 3.3 ESPECTRO DE ABSORO DO AZUL DE METILENO ......................................................................................... 7 3.4 CONSTRUO DA CURVA DE CALIBRAO .................................................................................................... 7

4.

RESULTADOS E DISCUSSES ..................................................................................................................... 7 4.1 PREPARO DAS SOLUES PADRES DE AZUL DE METILENO ........................................................................... 7 4.2 ESPECTRO DE ABSORO DO AZUL DE METILENO ......................................................................................... 8 4.3 CONSTRUO DA CURVA DE CALIBRAO .................................................................................................... 9 4.3.1 DETERMINAO DA CONCENTRAO DA AMOSTRA DESCONHECIDA ....................................................... 11

5.

CONCLUSO ............................................................................................................................................11

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ..........................................................................................................12

1.

INTRODUO

A espectrofotometria o mtodo de anlise ptico mais usado nas investigaes biolgicas e fsico-qumicas. Ela se baseia na interao (absoro ou emisso) da matria com a energia radiante.[1]Quando estimulada com um tipo radiao, a molcula do composto pode sofrer transies eletrnicas por ocasio da absoro de energia quantizada. O espectro eletrnico de absoro o registro grfico da resposta do sistema ao estmulo.[2] A regio ultravioleta do espectro geralmente considerada na faixa de 200 a 400 nm, e a regio do visvel entre 400 a 800 nm. Espectrofotometria na regio UV-VIS do espectro eletromagntico uma das tcnicas analticas mais empregadas, em funo de robustez, custo relativamente baixo e grande nmero de aplicaes desenvolvidas. [3] A absoro de energia UV-Vis modifica estrutura eletrnica da molcula em consequncia de transies eletrnicas envolvendo geralmente eltrons e n (no ligantes) envolvidos em ligaes. Isto requer que a molcula contenha pelos menos um grupo funcional insaturado (C=C, C=O, por exemplo) para fornecer os orbitais moleculares e n. Tal centro de absoro chamado cromforo, sendo responsvel principalmente pelas transies * e n *. Estas resultam da absoro de radiaes eletromagnticas que se enquadram em uma regio espectral experimentalmente conveniente, ao contrrio das transies n * e * que requerem geralmente radiaes mais energticas ( < 200 nm). [1] O espectrofotmetro um aparelho que permite a passagem de um feixe de luz monocromtica atravs de uma soluo, com isso ele mede a quantidade de luz que foi absorvida (absorbncia) e a luz que atravessou essa soluo (transmitncia). A partir de um prisma, o aparelho separa a luz em diversos feixes com diferentes comprimentos de onda. O espectrofotmetro permite saber qual a quantidade de luz que absorvida em cada comprimento de onda especfico. Esse registro chamado de espectro de absorbncia. O espectro de absoro caracterstico para cada espcie qumica, sendo possvel a identificao de uma espcie qumica por seu espectro de absoro.[4] As partes essenciais de um espectrofotmetro so uma fonte de energia radiante, um monocromador, um dispositivo para o isolamento de luz monocromtica, mais exatamente, faixas estreitas de energia radiante da fonte de luz, clulas de vidro ou de slica feixes de energia radiante que passam atravs do solvente ou da soluo.[5] O espectro ultravioleta e visvel nos fornece informaes limitadas sobre as estruturas qumicas de uma substncia. Mas, por causa da sensibilidade destas tcnicas e do alto grau de preciso e exatido em suas medidas, elas so empregadas extensivamente em determinaes

quantitativas. As aplicaes da espectrofotometria so para determinao de compostos orgnicos e inorgnicos, resumindo: 1-) Anlise comparativa de substncias (problema e padro); 2-) Anlise de compostos orgnicos e inorgnicos que apresentam ligaes duplas e triplas, ligaes conjugadas , cromforos , complexos inorgnicos com metais de transio; 3-) Em compostos orgnicos que apresentam grupos carbonilas, dienos conjugados , aromtico, etc. A espectrofotometria UV-VIS se aplica a molculas orgnicas, ons inorgnicos ou complexos em dissoluo e molculas que apresentam conjugao. Esta tcnica pode ser usada em determinaes qualitativas e quantitativas. Esta tcnica muito usada em laboratrios de controle de qualidade, pesquisa e desenvolvimento de anlises clnicas e toxilgicas. Uma larga aplicao na indstria qumica nas anlises de guas: potvel, caldeiras, resfriamento e na preparao de gua desmineralizada, onde se determina principalmente ferro, sulfatos, fosfatos e outras. [6] De um ponto de vista prtico, o aspecto mais importante do clculo quntico a determinao de quanta luz absorvida pela amostra. Isto descrito pela Lei de BeerLambert, que d a relao entre a intensidade da luz incidindo na soluo (I0), e a intensidade da luz saindo da soluo (I).[4] Log (I0/ I) =A=cl

onde: A= absorbncia = absorvidade molecular ou coeficiente de extino c= concentrao do material absorvedor l= espessura da amostra da amostra atravs da qual a luz passa A determinao de concentrao de um soluto em uma soluo-problema por espectrofotometria envolve a comparao da absorbncia da soluo-problema com uma soluo de referncia, na qual j se conhece a concentrao do soluto. Em geral, utilizada uma soluo-padro com diferentes concentraes (pontos), que tem sua absorbncia determinada. Esses pontos so preparados diluindo-se a soluo-padro na proporo necessria para a obteno das concentraes desejadas. Com os valores de absorbncia e de concentrao conhecidos, pode-se traar um grfico cujo perfil conhecido como curva-padro. Nesse grfico, a reta, indica a

proporcionalidade entre o aumento da concentrao e da absorbncia e a poro linear correspondente ao limite de sensibilidade do mtodo espectrofotomtrico para o soluto em questo.[4] O azul de metileno um composto aromtico heterocclico, slido verde escuro, solvel em gua, produzindo soluo azul, inodoro, com frmula molecular: C16H18ClN3S e massa molar 319.85 g/mol. O azul de metileno usado como um corante bacteriolgico e como indicador. Tem muitas aplicaes nos mais variados campos como a biologia e da qumica. Azul de metileno um frmaco de cor azul, vendido em farmcias comuns. O azul de metileno um antdoto especfico indicado a pacientes com sintomas e/ou sinais de hipxia (mudanas mentais, taquicardia, dispnia, dor torcica).[7]

2.

OBJETIVOS

Obter o espectro de absoro do azul de metileno e construir uma curva de calibrao a partir de solues padres.

Determinar a concentrao de uma amostra desconhecida a partir da curva de calibrao.

3.

METODOLOGIA

3.1 Preparo das solues padres de Azul de Metileno Para o presente trabalho, utilizou-se 100 mL de uma soluo estoque de Azul de Metileno 10-3 mol. L-1. A partir desta, preparou-se 5 solues padres com concentraes de 10-6, 0,5. 10-5, 10-5, 0,5. 10-4, 10-4 mol.L-1.

3.2 Calibrao do Espectrofotmetro e Construo da Linha Base Para o experimento, utilizou-se um espectrofotmetro de duplo feixe. Para a calibrao do equipamento, gua foi utilizada como o branco. Colocou-se a mesma em uma cubeta no compartimento do aparelho e fez-se a leitura, construindo a linha base. A

calibrao necessria para eliminar a diferena de absorbncia do branco, promovendo ento a leitura real de absorbncia da soluo. A faixa de comprimento de onda variou na regio de ultravioleta/visvel, 200 a 800 nm.

3.3 Espectro de Absoro do Azul de Metileno Aps a calibrao do equipamento, iniciou-se o processo de construo do espectro de absoro. Definiu-se a faixa de comprimento de onda na regio do UV/VIS, colocou-se em um compartimento do equipamento, a cubeta com o branco (gua destilada) e no outro a cubeta com a soluo padro de Azul de Metileno 10-6 mol. L-1. Como o espectrofotmetro era de duplo feixe, a anlise feita simultaneamente. Repetiu-se o procedimento para as outras concentraes descritas no item 3.1 em ordem crescente de concentrao.

3.4 Construo da Curva de Calibrao Aps coletar os dados do espectro de adsoro para cada concentrao padro, construiu-se uma curva de calibrao Concentrao x Absorbncia, utilizando os valores obtidos no comprimento de onda de mxima absorbncia.

4.

RESULTADOS E DISCUSSES

4.1 Preparo das solues padres de Azul de Metileno Inicialmente, utilizou-se 0.003198 g de Azul de Metileno e preparou-se 100 mL de uma soluo 0,001 mol. L-1 . O valor da massa utilizada foi obtida a partir da Equao 1. = Eq.1

onde a concentrao molar em mol.L-1 m a massa da amostra MM a massa molar da amostra V o volume da soluo m = . MM. V = 10-3 mol. L-1. 319,8 g.mol-1.0,1 L = 0,003198 g A partir desta soluo, preparou-se 25 mL de uma soluo padro de 10-6 mol. L-1. Os clculos para o volume da amostra estoque foram feitos segundo a Equao 2: C1V1= C2V2 0,001 mol. L-1 . V1 = 25. 10-6 mol. L-1 V1= 0,025 mL Do mesmo modo, preparou-se as solues de concentrao 0,5. 10-5, 10-5, 0,5. 10-4 e 10-4 mol.L-1. Eq.2

4.2 Espectro de Absoro do Azul de Metileno A anlise espectrofotomtrica forneceu valores de absorbncia nos diferentes comprimentos de onda da faixa UV/VIS. A partir desses dados, obteve-se o espectro mostrado na Figura 1.

Figura 1: Espectro de Absoro do Azul de Metileno em diferentes comprimentos de onda da faixa UV/VIS para todas as concentraes descontados os valores de linha base.

Observa-se que as curvas referentes s duas maiores concentraes apresentaram altas absorbncias com relao s trs primeiras, o que fornece indcios de desvio da lei de Beer. Porm, o mesmo s pode ser afirmado aps a verificao da linearidade da relao concentrao x absorbncia mxima, ou seja, a construo a curva de calibrao (item 4.3). Excluindo-se os possveis pontos estourados observa-se com maior clareza, na Figura 2, o espectro para baixas concentraes.

Figura 2: Espectro de Absoro do Azul de Metileno em diferentes comprimentos de onda excluindo-se as concentraes que possivelmente no obedecem a Lei de Beer.

4.3

Construo da Curva de Calibrao

Analisando os dados obtidos na espectrofotometria e o espectro obtido, observou-se que a mxima absorbncia ocorreu para um comprimento de onda de 664 nm. Fixando-se esse comprimento de onda, utilizou-se os valores de absorbncia nesse comprimento de onda para cada concentrao, Tabela 1, e construiu-se a curva de calibrao, Figura 3.

Tabela 1: Concentraes e absorbncias no comprimento de onda mximo de 664 nm. Concentrao (mol. L-1) 10-6 mol/L 0,5. 10-5 10-5 0,5. 10-4 10-4 Concentrao (ppm) 0,3198 1,599 3,198 15,99 31,98 Absorbncia 0,02333 0,289137 0,629775 2,724066 4,007542

Concentrao x Absorbncia
4.5 4 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0 0 0.00002 0.00004 [ ] y = 40753x + 0.1818 R = 0.9698

Absorbncia

0.00006 mol.L-1

0.00008

0.0001

0.00012

Figura 3: Curva de calibrao do Azul de Metileno para todas as concentraes

Analisando o grfico obtido, observa-se uma relao linear no muito boa entre os dados coletados, o que confirma o previsto no espectro para todas as concentraes (Figura 1). Excluindo-se agora os pontos referentes s solues de alta concentrao um novo grfico gerado, respondendo satisfatoriamente a relao de linearidade da Lei de Beer (Figura 4).

Concentrao x Absorbncia
0.7 0.6 Absorbncia 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 0 0.000002 0.000004 0.000006 0.000008 [ ] mol.L-1 0.00001 0.000012 y = 67413x - 0.0455 R = 1

Figura 4: Curva de Calibrao do Azul de Metileno para as concentraes que obedecem a Lei de Beer

Estudos realizados por Zhao e Malinowski et. al.[8] Atribuem o no seguimento da Lei de Beer a formao de monmeros, MB+, dmeros (MB)22+ e trimeros, (MB)33+ com o aumento da concentrao do azul de metileno em soluo aquosa. Acosta et. al.
[9]

verificou

que a absortividade molar varia a partir de concentraes acima 10-6 mol/L de forma drstica, tambm associada formao de complexos do azul de metileno.

4.3.1 Determinao da Concentrao da Amostra Desconhecida A amostra desconhecida apresentou uma absorbncia de 1,345926 no comprimento de onde de 664 nm. Substituindo-se esse valor na equao da reta obtida na curva de calibrao foi possvel calcular a concentrao da amostra desconhecida, Equao. 3. y = 67413x - 0,0455 x= x= x = 2,06 . 10-5 mol. L-1 Eq. 3

Este valor foi encontrado por uma extrapolao da curva de calibrao. O correto seria diluir a amostra para um valor de absorbncia dentro da curva e a partir de correlaes encontrar a concentrao da soluo estoque. Com os dados da curva de calibrao, pode-se calcular tambm a absortividade molar do Azul de Metileno. A absortividade molar () uma grandeza caracterstica da espcie absorvente, cuja magnitude depende do comprimento de onda da radiao incidente. No presente trabalho a absortividade molar foi obtida pelo coeficiente angular da reta e teve o valor de = 67413 L. cm-1. mol-1. O alto valor pode ser explicado pela prpria estrutura do azul de metileno, um cromforo forte com varias insaturaes, eltrons disponveis e heterotomos, provavelmente sua excitao se d de um orbital para um orbital *, anlogo ao que pode-se perceber no caroteno.

5.

CONCLUSES

A espectrofotometria mostrou-se uma tcnica bastante eficiente na determinao da concentrao da amostra desconhecida de Azul de Metileno.

Diferentes pesquisadores estudaram o espectro visvel do azul de metileno e atriburam ao mesmo o no respeito a Lei de Beer pela formao de monmeros, dmeros e trimeros com o aumento da concentrao do corante. Os pontos que estouraram a curva de calibrao podem ser considerados frutos dessa mistura de compostos a base de azul de metileno, mas a curva construda com os pontos restantes apresentou boa linearidade, apresentando um R de 1. imprescindvel ressaltar que para se obter uma curva de calibrao com a menor margem de erro possvel, a fim de no comprometer os resultados do experimento, deve-se estar atento durante toda execuo do procedimento, com o preparo correto das solues padres. Deve-se tambm, tomar o mximo cuidado ao manusear as cubetas a fim de evitar as perdas por reflexo e espalhamento, lembrando-se que a cubeta de referncia deve conter o mesmo solvente utilizado (branco). Outro fator relevante, diz respeito ao nmero de pontos para construo da curva de calibrao, que deveria ser de no mnimo 5 ou 6, para maior certeza na determinao da concentrao da amostra. Atravs do grfico da Figura 4, calculou-se a concentrao da amostra desconhecida e encontrou-se o valor de 2,06 . 10-5 mol. L-1. Obteve-se tambm o valor de = 67413 L. cm-1. mol-1 para a absortividade molar.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS [1] SKOOG, D. A.; HOLLER, F. ; NIEMAN, T. A. ; Princpios de Anlise Instrumental, 5o ed., Ed. Bookman, Porto Alegre, 2002.

[2]Espectrofotometria

de

Absoro

Molecular

UV-VIS.

Disponvel

em:

http://pt.scribd.com/doc/70821159/Relat-Rio-Espectrofotometria-de-Absor-o-Molecular-UVVIS. Acesso em: 01/11/2011.

[3] ROCHA, F.R.P.; TEIXEIRA, L.S.G. Estratgias para Aumento da Sensibilidade em Espectrofotometria UV-VIS. Quim. Nova, Vol. 27, No. 5, 807-812, 2004.

[4] Vinad, Maria Elisabeth do Canto; Vinad, Elsa Regina do Canto, Mtodos espectroscpicos de analise quantitativa, editora UFSM.

[5] EWING,GALEN WOOD. Mtodos instrumentais de anlise qumica. Editora Edgard Blucher.1972.

[6] Espectroscopia na Regio do UV-VIS. Disponvel em: www.scribd.com/doc/.../SlidesEspectroscopia-na-Regiao-do-UV-VIS. Acessado em 01/11/2011.

[7] Wikipdia. Disponvel em: http://pt.wikipedia.org/wiki/Azul_de_metileno. Acessado em 01/11/2011.

[8]ZHAO, Z. e MALINOWSKI, E. R. Determination of the Hydration of Methylene Blue aggregates and Their Dissociation Constants Using Visible Spectroscopy, Applied Spectroscopy, v. 53, 12, 1999.

[9]ACOSTA, A. A. Silcio Poroso Funcionalizado com Molculas de Azul de Metileno para Aplicaes em Sensores Qumicos, Mestrado em Engenharia, So Paulo, 2009.