Número:

PROTOCOLO DE AULA PRÁTICA LAB-PAP-179

CURSO: BIOMEDICINA E FARMÁCIA Aprovação:
Diretoria Acadêmica
DISCIPLINA: IMUNOLOGIA CLÍNICA
Ser Educacional
ELABORADO POR: DATA: Revisão:
MARIANA ARAGÃO MATOS DONATO 28/03/2013 00

NOME DA PRÁTICA:
TIPAGEM SANGUÍNEA – LÂMINA E TUBO
OBJETIVOS DA PRÁTICA:

 Realizar teste de tipagem sanguínea em lâmina

OBS.: A quantidade (qtd) material listada abaixo é estimada para apenas um grupo de alunos. A
quantidade de grupos, por aula, deve ser definida pelo professor. Sugestão (04-06) aluno por grupo.
QTD DESCRIÇÃO DAS VIDRARIAS QTD REAGENTES E SOLUÇÕES
15 Lâminas 1 Reagente 1(ANTI-A)
15 Tubos 1 Reagente 2(ANTI-B)
1 Reagente 3(ANTI-AB)

QTD MATÉRIA-PRIMA/INSUMO OU ANALITO QTD EQUIPAMENTOS POR GRUPO

05 Amostra(sangue com EDTA) 1 Geladeira *
1 Micropipetas automáticas com capacidade de
50 µL

MÉTODO EXPERIMENTAL/PROCEDIMENTO

Teste em lâmina:
1 - Preparar uma suspensão de glóbulos a 40% no próprio soro, plasma ou solução salina à 0,9%.
2 – Colocar uma gota do reagente Anti-A no lado esquerdo da lâmina e uma gota de reagente Anti-B no lado
direito. Em uma segunda lâmina, colocar uma gota de reagente Anti-AB. Realizar os testes à temperatura
ambiente (20º a 25º C).
3 – Adicionar 1 gota da suspensão de hemácias a cada reagente.
4 – Misturar o reagente com a suspensão de glóbulos em uma área de 2x3 cm. Movimentar delicadamente a
lâmina para promover a mistura e examinar a presença ou não de aglutinação macroscópica. A aglutinação se
inicia em poucos segundos. Não observar a lâmina por mais de 2 minutos, quando não houver aglutinação.
Alternativamente, pode-se realizar o teste em lâmina utilizando-se uma suspensão de glóbulos à 10% em
solução salina à 0,9%.

Teste em tubo:
1 - Preparar uma suspensão a 3-5% do glóbulo a ser testado em solução salina à 0,9%.
2 – Adicionar uma gota de reagente Anti-A, Anti-B e Anti-AB respectivamente em três tubos de ensaio e
identificá-los.
3 – Acrescentar uma gota da suspensão de hemácias 3-5% a cada tubo. Misturar bem o conteúdo.
4 - Centrifugar por 15 segundos a 3400 rpm.
5 - Ressuspender delicadamente o botão de hemácias e examinar a presença ou não de aglutinação.
6 - Graduar e registrar o resultado.
A força centrífuga aplicada deve ser a mínima necessária para se obter um sobrenadante claro e um botão
nitidamente delineado que possa ser ressuspendido facilmente.

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 Número:
PROTOCOLO DE AULA PRÁTICA LAB-PAP-179
CURSO: BIOMEDICINA E FARMÁCIA Aprovação:
Diretoria Acadêmica
DISCIPLINA: IMUNOLOGIA CLÍNICA
Ser Educacional
ELABORADO POR: DATA: Revisão:
MARIANA ARAGÃO MATOS DONATO 28/03/2013 00

As centrífugas devem ser calibradas individualmente para se obter o tempo e velocidade ótimos de
centrifugação.
Nota: OS TESTES PARA CLASSIFICAÇÃO ABO NUNCA DEVEM SER INCUBADOS À 37° C.

INTERPRETAÇÃO DO RESULTADO
POSITIVO: excluindo-se as limitações do teste, a aglutinação dos glóbulos pelo reagente indica a presença do
antígeno correspondente. Igualmente, a aglutinação da amostra pelo reagente Anti-A,B indica a presença dos
antígenos A e/ou B, caracterizando não se tratar de grupo O.
NEGATIVO: excluindo-se as limitações do teste, a ausência de aglutinação no teste indica ausência do antígeno
correspondente.

LIMITAÇÕES DO TESTE
Resultado falso-negativo ou reações fracamente positivas podem ocorrer com amostras de sangue de
subgrupos A e B ou após estocagem prolongada.
Resultado falso-positivo pode ocorrer com hemácias colhidas do cordão de recém-nascidos.
As variáveis relativas ao procedimento técnico, tais como: técnica, suspensões muito concentradas ou diluídas,
centrifugação ou incubação inadequadas, solução salina à 0,9% contaminada ou vidraria suja podem causar
falsas reações positivas ou negativas.
As anomalias sorológicas inerentes à amostra podem causar reações inesperadas ou discrepância entre
tipagem direta e reversa.
O Grupo ABO de um indivíduo só pode ser determinado se existir uma concordância exata entre a classificação
direta e classificação reversa.
O reagente foi otimizado para as técnicas descritas. Outros procedimentos devem ser validados pelo usuário.
CONTROLES
1- O resultado obtido na tipagem ABO em adultos deve ser confirmada pela prova reversa com reagente de
células A1 e B (Rh negativos).
2- É importante que a reatividade e especificidade do reagente sejam confirmadas a cada dia de uso utilizando-
se um controle positivo, de preferência hemácia A2B e um controle negativo, hemácia do grupo O.
DESEMPENHO
Os anticorpos Anti-A, Anti-B, Anti-A,B (Monoclonal Murino) aglutinam especificamente hemácias humanas na
presença dos antígenos correspondentes.
A especificidade do produto é determinada através da inclusão de um painel de hemácias, representando os
antígenos com freqüência igual ou superior a 1% na população.
Para assegurar reatividade adequada, na análise final para liberação do lote, os reagentes são testados com
hemácias positivas para o antígeno correspondente. Em se tratando do reagente Anti-A, incluem-se amostras do
fenótipo A2B.

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