HBsAg e Anti- HBs

Conceito HBsAg
um teste para detectar antgeno ou protena da superfcie
do vrus da hepatite B

Conceito Anti- HBs
Teste para detectar o anticorpo presente no organismo de
indivduos que j foram vacinados ou infectados, pelo vrus
da hepatite B
Finalidade do HBsAg:

Teste imunocromatogrfico para deteco qualitativa da
presena do antgeno de superfcie da hepatite B em soro
ou plasma humano;
O teste utiliza anticorpos monoclonais e policlonais para
deteco de vrios subtipo de hepatite B (somente in
vitro)
Princpio da Ao do HBsAg
TESTE POSITIVO
O antgeno da amostra liga-se ao conjugado gamaglobulina corante
formando complexo.Este flui para rea absorvente da placa ligando-
se ao anticorpo anti- HBsAg na rea de reao positiva (T),
determinando o surgimento de uma banda rosa
TESTE NEGATIVO
Na ausncia de antgeno no h aparecimento de banda colorida, a
mistura da reao continua a fluir para rea de controle (C) . O
conjugado no ligado se une ao reagente formando uma banda
colorida rosa clara, demonstrando que o reagente est funcionando
corretamente.
Procedimento do HBsAg:
1. Deixar a placa teste (1) atingir a temperatura
ambiente antes de retir-la do envelope laminado. A
placa teste e a amostra devem estar na temperatura
ambiente antes do uso.
2. Retirar a placa teste (1) da embalagem e usar
imediatamente.
3.Pipetar 100 L da amostra na cavidade de amostra ( )
da placa teste.
4. Fazer a leitura dos resultados em 15 minutos.
Interpretao:
Negativo: Somente uma banda rosa-clara aparecer na rea do
controle (C)
Positivo: Aparecero duas bandas rosa-claras, uma na rea teste (T) e
outra na rea do controle (C)
Limitaes do Teste HBsAg
1. O HBsAg - EIC um teste indicado para determinar fase aguda da
hepatite B e indivduos portadores do vrus.
2. um teste de triagem para caracterizar a presena de antgenos da
hepatite B, portanto, um resultado repetidamente positivo com este teste uma
presumvel evidncia da presena do vrus na amostra.
3. Resultados positivos devero sempre ser confirmados por outro teste.
4. Podem ocorrer resultados falso-positivos e falso-negativos com este
teste, cuja proporo depender da prevalncia da doena na populao
ensaiada.
5. Como em qualquer procedimento diagnstico, o resultado deste teste deve
ser sempre interpretado com outras informaes clnicas disponveis
Finalidade do Anti-HBs
Deteco quantitativa de anticorpos anti-antigenos de
superficie do virus da hepatite B para soro ou plasma
humano ( in vitro)
Princpio de Ao do Anti- HBs
um teste imunoenzimtico, tipo sanduche, que utiliza
protenas recombinantes da regio do envelope viral
HBV, para detectar a presena de anticorpos anti HBsAg
no soro ou plasma humano, com finalidade de
determinar a concentrao de anticorpos anti HBsAg
para monitorar a recuperao dos pacientes.
Procedimento do Anti HBs
Metodologia imunoenzimtica quantitativa em fase slida,
baseada no principio sanduiche para deteco de anticorpos
anti HBs incluindo Igg, IGM e IGA em soro ou plasma
humano.
A microplaca revestida com HBsAg recombinante, as
amostras revestidas com antgeno e aps incubadas.
Se positivo este ligar o antgeno que reveste a microplaca.
Princpio do ensaio
Ensaio imunoenzimtico (IEMA).
Amostras so encubadas com HBsAg conjugadas com
perioxidse (HRPO) em microcavidades revestidas.
Na encubao anticorpos reagem com antigenos
formando um sanduiche.
Aps lavagem. A atividade enzimatica da fase slida
diretamente proporcional a concentrao Anti-HBs da
amostra.
evidenciada por uma soluo cromgeno adicionada na
microplaca (Tetrametilbenzidina) e tampo substrato.
A intencidade da cor medida no espectofotmetro 450
e 405 nm
PROCEDIMENTO DO TESTE
(ensaio quantitativo)*


Deixar que todos os reagentes e amostras atinjam a temperatura
ambiente.
Misturar amostras por inverso antes do uso.

1. Prepare as microcavidades para o blank, calibradores e amostras.
2. Pipetar 50 L de calibradorees e amostras dentro das respectivas
microcavidades.
3. Pipetar 200 L de conjugado enzimtico em todas as microcavidades,
com exceo do que tiver o blank. 4. Cobrir a microplaca com o adesivo
para selagem e homogeneizar
delicadamente.
5. Incubar as microcavidades por 3horas10minutos em estufa ajustado
para 372C.

PROCEDIMENTO DO TESTE
(ensaio quantitativo)*

6. Remover o adesivo para selagem e aspirar cuidadosamente mistura
incubada de todas as microcavidades.
7. Lavar as microcavidades 6 vezes com 350 L de soluo para lavagem.
Aspirar todos os lquidos das microcavidades.
8. Pipetar 200 L de soluo substrato e Cromgeno (ver pargrafo sobre
reagente) em todas as microcavidades.
9. Incubar por 202 minutos a 372C, evitando exposio de luz direta.
10. Pipetar 100 L de reagente bloqueador em todas as microcavidades.
11. Ler a absorbncia das microcavidades, de preferncia, com um
espectrofotmetro bicromtico a 450 nm, com comprimento de onda de
referncia 620 nm (ajustar o equipamento no zero com a microcavidade
blank). Em caso de leitura overflow utilizar o filtro 405 nm. As leituras
devem ser completadas no espao de tempo de 15 minutos aps o
trmino do teste.

Resultado
na prtica clnica uma concentrao de anti-HBs maior
ou igual a 10 mUI/ml considerada um sinal tanto de
recuperao da doena aguda como tambm uma
resposta positiva de imunizao; em ambos os casos, o
paciente considerado imune ao vrus de Hepatite B.
Desta maneira, os nveis de concentrao anti-HBs entre
4 a 10 mUI/ml no devem ser consideradas suficientes
para garantir a imunidade ao vrus Hepatite B.