Introdução

n Bactérias isoladas e identificadas de amostras clínicas

necessitam de exame complementar para analisar o perfil de
susceptibilidade daquela espécie frente aos antimicrobianos
(Antibiograma).
n Os fármacos disponíveis no combate as infecções são analisados
por grupos (aminoglicosídeos, betalactâmicos, fluorquinolonas,
macrolídeos, peptídeos, carbapenêmicos e sulfas) e
em concentrações padronizadas (proporcionais às
concentrações atingidas no soro de pacientes em tratamento)
obtidas por estudo in vitro.
n A análise do perfil de susceptibilidade das bactérias
aos agentes antimicrobianos está relacionada à
várias técnicas ou métodos laboratoriais in vitro
utilizados para determinar a sensibilidade e a
resistência de determinado microrganismo a estes
fármacos.
 Antibiograma -Conceito
n Teste para verificar o comportamento dos
microrganismos (sensibilidade ou resistência) “in
vitro”, frente a diversos antimicrobianos, para a
escolha do antimicrobiano ideal
Objetivos para a realização Antibiograma
n Avaliação da atividade e do espectro de ação de
novos agentes antimicrobianos;
n Estudos de populações bacterianas, para estabelecer
o perfil de susceptibilidade frente aos antimicrobianos
n Em bactérias que possam apresentar comportamento
incerto diante da terapêutica empírica.
n Análise epidemiológica de padrões de resistência em
linhagens bacterianas diversas
 Principais Indicações
Para microrganismos isolados e identificados como
agentes causadores de infecção.

Quando o micro-organismo causador da infecção

apresenta, estatisticamente, grande variabilidade no
espectro de resistência ou tendência à mesma.

Ex: Staphylococcus aureus, Pseudomonas spp.,

Infecções relacionadas a assistência à saúde (IRAS)
 Padronização do Antibiograma

n Parâmetros para a realização dos Testes de

Susceptibilidade aos Antimicrobianos
n Procedência do isolado (isolado clínico/isolado de
colonização (Amostra de Vigilância)
n Se o paciente já iniciou TTO com Antimicrobiano
n Qualidade da amostra clínica.
n Critérios de Padronização (CLSI, BrCast, EUCAST)
 Métodos Manuais
n Disco difusão – técnica Kirby-Bauer
n Diluição em caldo-macro diluição
n Diluição em caldo-micro diluição
n Difusão em ágar com diferentes gradientes de
concentração do fármaco
n Diluição em ágar
 Método Automatizado
n Métodos que através da turbidimetria,
colorimetria e fotometria estimam a
concentração inibitória mínima (CIM).

n Sistemas disponíveis: Vitek®, Phoenix®

Microscam®
Métodos diversos
Método difusão disco-(Técnica Kirby-Bauer)

16 a 24h, 35
ºC

Suspensão bacteriana
MacFarland)
(0,5McFarland
)

Disposição dos discos

impregnados com
antimicrobianos

Ágar Mueller-Hinton
 Método difusão em disco
A metodologia de Kirby e Bauer para antibiograma é a mais
difundida e utilizada até hoje na rotina de análises clínicas,
devido a:
• Praticidade de execução;
• Baixo custo;
• Confiabilidade de seus resultados.

Apesar de sua relativa simplicidade de execução, a técnica de Kirby

e Bauer exige que as instruções sejam seguidas rigorosamente de
forma que os resultados obtidos correspondam à realidade e
possam ser comparados com as tabelas internacionais.
 Preparação Antibiograma-Materiais
n Inóculo bacteriano
n Escala de MacFarland
n Discos Antimicrobianos (12 discos por placa
de 150 mm)
n Swab (para semeio bacteriano)
n Placa de Petri com Meio Mueller Hinton
n Pinça de metal
Isolado Bacteriano

Preparação do Inoculo
Bacteriano –Pureza do Isolado
 Escala de MacFarland

A escala de McFarland é o padrão de turvação mais frequentemente utilizado nos

laboratórios de microbiologia, para determinar a intensidade da multiplicação em
meios de cultivo líquidos.
Procedimento

Monteiro A, 2010
 Procedimento
1. Preparo de uma suspensão de
bactérias de cultivo recente na
escala 0,5 de MacFarland;
2. Inoculação desta suspensão na
superfície de uma placa de Ágar
Mueller Hinton, realizando o
semeio com swab estéril;
3. Adição dos discos de papel
impregnados com os
antimicrobianos;
 Procedimento
n Incubação
n Leitura :
Análise do padrão de crescimento
ou inibição ao redor de cada disco,
sendo então medido o tamanho de
cada halo e o resultado pesquisado
em tabelas apropriadas segundo
a espécie bacteriana em análise
 Interpretação dos Resultados

•Leitura: Ausência de halo: resistência

Presença de halo: sensibilidade ou resistência
Parâmetros Leitura
 Leitura dos Diversos Antimicrobianos
n Nas bactérias
Hemolíticas o meio
de cultivo é preparado
com adição de sangue.
 Critérios
Sensível (S): o isolado que é inibido quando doses usuais dos
antimicrobianos utilizados.

Intermediário (I): Inclui cepas cujas CIMs do antimicrobiano atinge

níveis no sangue e nos tecidos, mas a taxa de resposta pode ser
menor do que aquela encontrada para cepas sensíveis.

Resistente (R): A categoria R inclui cepas que não são inibidas ou

destruídas pelas concentrações sistêmicas alcançadas pelo
antimicrobiano, quando o esquema usual de doses do
antimicrobiano é utilizado.

Trabulsi-Alterthum 2015
Resultado
 Método Manual Etest®
n Difusão em ágar com diferentes gradientes de
concentração do fármaco
n Estimar a concentração inibitória mínima (CIM)
 Etest®
n Vários estudos demonstram que a CIM determinada pelo
Etest® apresenta concordância com os métodos de diluição em
ágar ou tubo, para diferentes antimicrobianos, em geral, com
uma variação permitida de +/- 1 diluição.
 Etest®

CIM 4µm

Etest® com oxacilina -CIM 4µm

 Método Manual

n Microdiluição em placa

Barone & Fernandes, 2018

Micro-diluição em Caldo

Barone & Fernandes, 2018

Método Automatizado-Vitek®
Método Automatizado BD-Phoenix®
Método Automatizado- Microscam® Siemmens
Resultado do Antibiograma (CIM)
 Fatores que podem interferir no resultado do
Antibiograma
n Inoculo bacteriano fora do padrão estabelecido
n Inoculo bacteriano com mais de um MO (Misto)
n Formulação do meio de cultivo (pH)
n Espessura do meio na placa
n Tempo e atmosfera de incubação
n Armazenamento inadequado dos discos
n Critérios inadequados para medição dos halos de inibição dos
fármacos
Critérios de Análise do perfil de susceptibilidade

Critérios por diferentes Comitês

n CLSI –Estados Unidos
n Eucast-Europeu
n BrCAST –Brasileiro
 BrCAST
Leitura do Antibiograma
n As instruções para a leitura dos halos de inibição listadas a
seguir fazem parte do método de disco-difusão do EUCAST.

n As bordas dos halos de inibição devem ser lidas no ponto de

inibição completa do crescimento bacteriano, avaliada a olho
nu, com a placa posicionada a cerca de 30 cm dos olhos (para
exceções e instruções de leitura específicas.

n Aferir o diâmetro do halo com régua, paquímetro ou um leitor

automatizado de halos de inibição

BrCAST,2014
Leitura

BrCAST,2014
E. coli com ESBL H. influenzae com
mutações em PBP
BrCAST,2014
Amostra oxacilina resistente e cefoxitina sensível mecA
positiva

LBBM,2015
Antibiograma Enterobactérias
Pesquisa de ESBL
 Etest® para ESBL
n Redução da diluição maior ou igual três

LBBM, 2015
Teste para pesquisa de MBls

LBBM,2012
 Etest® para MBL
n Critério de positividade : Redução ³ 3.0 diluições

LBBM,2012
 Pesquisa de resistência bacteriana

Detecção de
Metalo-betalactamase com EDTA

E-teste ceftalozone-tazobactan
 Referências
n Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Principais Síndromes Infecciosas. 65p.

n Arakawa Y, Shibata S, Shibayama K, Kurokawa H, Yagi T, Fujiwara H, Goto M. Convenient

test for screening metallo-β-lactamase-producing gram-negative bacteria by using thiol
compounds. J Clin Microbiol 2000;38:40–43.

n CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) (2014) Performance standards for
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S20.Wayne, PA, USA:CLSI.

n Koneman E.W., Allen S.D., Janda W.M., Schreckenberger P.C. & Winn Jr W.C. Diagnóstico
Microbiológico Texto e Atlas colorido. Editora Guanabara Koogan. Sexta Ed. 2006.

n Matthew E. Falagas Drosos E. Karageorgopoulos. Pandrug Resistance (PDR), Extensive

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Need for International Harmonization in Terminology.Clinical Infectious Diseases, Volume
46, Issue 7, 1 April 2008, Pages 1121–1122.

n Picão R. e Gales A. ß-Lactamases de Espectro Ampliado em Pseudomonas

aeruginosa:Pesadelo ou só Imaginação? Prática Hospitalar, 49 jan-
Fev/2007
BR CAST (Brazilian Committee for Antimicrobial Sensitivity Tests).
Guidelines for the detection of resistance mechanisms and specific resistance of clinical and /
or epidemiological importance. Portuguese version, 2015.

Jorge Sampaio Membro do Comitê Gestor do BrCAST – 2016-2018 Sociedade Brasileira de

Microbiologia

Microbiologia Editores Luiz Trabulsi – Flavio Alterthum Sexta Edição São Paulo Editora
Atheneu 2015