ANTIBIOGRAMA

Antibiograma

❑O antibiograma tem como objetivo determinar o

perfil de sensibilidade e resistência de bactérias aos

antibióticos.
 Antibiograma
❑ Os testes de sensibilidade são indicados, com maior frequência,

quando se acredita que o organismo causador pertence a uma

espécie capaz de apresentar resistência aos agentes
antimicrobianos normalmente usados.

❑ Esta susceptibilidade pode ser aferida por testes de diluição em

tubo ou pelos testes de difusão em ágar.

NCCLS. Performance Standards for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests;

Approved Standard—8 ed, 2003.)
 Mecanismos de resistência

❑ Os mecanismos de resistência incluem a produção de enzimas

que inativam a droga; a alteração dos alvos de ação da droga;

alteração da permeabilidade da membrana externa ou efluxo da
droga.

❑ Alguns organismos ainda possuem sensibilidade previsível a

agentes antimicrobianos, e a terapia empírica é amplamente

reconhecida.
 MÉTODO DE DIFUSÃO EM ÁGAR
(Kirby-Bauer)
❑ Difusão em ágar → Capacidade de difusão do antibiótico que se

encontra impregnado em discos de papel de filtro, através de um

meio sólido, inibindo o crescimento microbiano, evidenciado pela
formação de halos de inibição em torno dos discos.

❑ São usadas concentrações pré-estabelecidas de antibióticos.

 MÉTODO DE DIFUSÃO EM DISCO
(Kirby-Bauer)
❑ O diâmetro do halo de inibição é

proporcional à quantidade de agente

antimicrobiano presente no disco, à
solubilidade do agente, ao coeficiente de
difusão no meio de cultura sólido e à eficácia do
agente antimicrobiano.
Um halo (zona transparente) de inibição
é formado em volta do disco, onde não há ❑ Este método é rotineiramente usado para
crescimento do microrganismo.
Após 24-48 h de incubação, o diâmetro do determinar a sensibilidade a antibióticos
halo é medido.
de microrganismos.
 Reagentes para o Kirby-Bauer
❑ Meio Ágar Müeller-Hinton

❑ Dentre os muitos meios disponíveis, o ágar Müeller-Hinton é

considerado o melhor para testes rotineiros de sensibilidade contra
bactérias não fastidiosas, pelas seguintes razões:
✓ Demonstra reprodutibilidade aceitável entre os diferentes lotes nos
testes de sensibilidade.

✓ Permite crescimento satisfatório de microrganismos não fastidiosos. As

bactérias fastidiosas necessitam de nutrientes e vitaminas que são
específicos para o seu desenvolvimento, e não se desenvolvem bem
em meios de cultura convencionais.

✓ Existe um grande acervo de dados e experiência relativos a testes de

sensibilidade realizados com esse meio.
MÉTODO DE DIFUSÃO EM DISCO
(Kirby-Bauer)-Meio de cultura

Especificações Técnicas:
Composição g/L
Extrato de Carne 2,0
Ácido Hidrolisado de Caseína 17,5
Amido 1,5
Agar 17
pH Final: 7,3 + 0,1 a 25°C

MEIO DE CULTURA MUELLER HINTON

 MÉTODO DE DIFUSÃO EM DISCO
(Kirby-Bauer)
❑ Procedimento: conduzido em condições assépticas.

❑ Mergulhar um swab estéril no tubo com a cultura bacteriana a ser

transferida. Usar um swab por cultura.

❑ Retirar o excesso de cultura, apertando o algodão do swab contra a parede

interna do tubo de ensaio.
 MÉTODO DE DIFUSÃO EM DISCO
(Kirby-Bauer)
❑ Transferir as culturas para placas de Petri com meio ágar
Mueller-Hinton, esfregando o swab em toda a superfície do meio.
Em seguida deixar a cultura secar por 5 a 10 minutos a
temperatura ambiente.
 Procedimento Kirby-Bauer

❑ Com auxílio de uma pinça, previamente flambada, transferir

assepticamente os discos de papel com concentrações conhecidas

de antibióticos para a superfície do meio inoculado.
✓ É preciso pressionar os discos de papel levemente para aderi-los ao

meio.
 Procedimento Kirby-Bauer

❑ Incubar as placas a 35oC por 24h.

❑ Avaliar o crescimento nas placas, procurando identificar as zonas

de inibição em torno do disco de papel.

❑ Os diâmetros dos halos de inibição total são mensurados, incluindo
o diâmetro do disco.

Fonte: http://www.profbio.com.br/aulas/ac2_06.pdf
 Procedimento Kirby-Bauer
Observações
❑ Meio deve ser semeado em toda a superfície de forma que o crescimento ocorra

sobre todo o meio.

❑ O número máximo de discos por placa deve ser 5.

❑ Distância entre os discos: 15 mm da borda da placa e entre os discos.

Sobreposição de halos
 Procedimento Kirby-Bauer
Observações
❑ Os procedimentos são padronizados para assegurar resultados

seguros e confiáveis: meio padronizado (ágar Mueller-Hinton-

capacidade de difusão determinada); espessura do ágar na placa
(4 mm); tamanho e espessura dos discos e inoculação através do
swab.
 LIMITAÇÕES
❑ Não são aplicáveis a microrganismos que crescem
lentamente.

❑ Não permite determinar se a droga é bactericida ou

bacteriostática.

❑ Não são aplicáveis a antibióticos que se difundem lentamente.

 Leitura das Placas e Interpretação
❑ Após o período de incubação, examina-se cada placa.

❑ Se a placa foi satisfatoriamente semeada, e o inóculo era

correto, os halos de inibição resultantes serão uniformemente
circulares e haverá um tapete confluente de crescimento.

❑ Se colônias individuais forem aparentes, o inóculo era

demasiado leve e o teste deverá ser repetido.
 Leitura das Placas e Interpretação dos
Resultados
❑ O diâmetro da zona de inibição é comparado com uma tabela padrão para as

drogas (aprovada pela Sociedade Brasileira de Microbiologia para a droga e a

concentração).
❖ Resistência intrínseca a antibióticos de estirpes de rizóbio
As estirpes foram testadas utilizando o kit POLISENSIDISC da DME (Diagnósticos
Microbiológicos Especializados) com 14 antibióticos para bactérias Gram-negativas, sendo os
seguintes antibióticos: Amicacina (AMI 30), Amoxicilina (AMC 30), Ampicilina (AMP10), Aztreonam
(ATM 30), Cefalotina (CFL 30), Cefepime (CPM 30), Cefoxitina (CFO 30), Ceftadizima (CAZ 30),
Ceftriaxona (CRO 30), Ciprofloxacina (CIP 05), Cloranfenicol (CLO 30), Gentamicina (GEN 10),
Piperacilina (PIT 110), Tetraciclina (TET 30).

Fonte: Silva et al. Diversidade de rizóbios da unidade de conservação Parque Nacional de Ubajara no
Estado do Ceará. Enciclopédia Biosfera, 2014.
Fonte: Dutra et al. Atividade antimicrobiana de extratos vegetais frente à bactérias de importância
médica. Persp. Online: biol & saúde, 20 (6), 1-13,2016.