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system HBsAg Confirmatory V.1

9C94
G48903R16
B9C945

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Revisto em julho de 2019

HBsAg Confirmatory V.1

Serviço ao cliente: por favor contactar o representante Abbott da sua zona ou consultar a
informação de contacto para o seu país em www.abbottdiagnostics.com.
As instruções de utilização têm de ser rigorosamente cumpridas. A fiabilidade dos resultados do ensaio não pode ser
garantida se estas instruções de utilização não forem cumpridas.

Legenda dos símbolos utilizados

Número de lista Cuvetes de reação
Dispositivo médico para
diagnóstico in vitro Copos de amostra
Número de lote
Tampas septum
Prazo de validade
Tampas de
armazenamento
Número de série
Número de controlo
Conservar a 2-8°C
Lote de reagente

Atenção Atenção: pode provocar

uma reação alérgica

Consultar as instruções de Número mundial de

utilização identificação de item
comercial
Fabricante
Produto da Irlanda

Consultar a secção REAGENTES para uma explicação detalhada dos símbolos utilizados na
designação dos componentes.

1
NOME
ARCHITECT HBsAg Confirmatory V.1
FINALIDADE DE USO
O ensaio ARCHITECT HBsAg Confirmatory V.1 é um Imunoensaio de
Micropartículas por Quimioluminescência (CMIA) para a confirmação da
presença do antigénio de superfície da hepatite B (HBsAg) em soro e
plasma humanos, através da neutralização de anticorpos específicos.
RESUMO E EXPLICAÇÃO DO TESTE
Os ensaios imunoenzimáticos para a deteção de HBsAg foram descritos
pela primeira vez por Engvall e Perlmann1-3 e por Van Weemen e Schuurs4
em 1971. Em 1976 e 1977, foram desenvolvidos imunoensaios enzimáticos
de fase sólida tipo “sanduíche” em que o HBsAg era capturado numa
fase sólida revestida com anticorpos policlonais contra HBsAg (anti‑HBs)
e, depois, detetado com anticorpos anti-HBs conjugados com uma
enzima.5-7 No início dos anos 80, desenvolveram-se ensaios baseados
em anticorpos monoclonais anti-HBs para a deteção de HBsAg.8‑13 Os
ensaios para a deteção do HBsAg são utilizados por rotina como meio
auxiliar no diagnóstico de suspeita de infeção por hepatite B viral (HBV)
e na monitorização do estado dos indivíduos infetados, ou seja, se a
infeção do doente foi tratada ou se o doente se tornou um portador
crónico do vírus.14 Para fins de diagnóstico da hepatite crónica ou
aguda, a reatividade ao HBsAg deve ser correlacionada com a história
clínica do doente e a presença de outros marcadores serológicos para
a hepatite B. Uma amostra considerada repetidamente reativa deve
ser confirmada através do ensaio ARCHITECT HBsAg Confirmatory V.1
(9C94), um procedimento de neutralização que utiliza anticorpos
anti‑HBs humanos. Se a amostra é neutralizada num ensaio ARCHITECT
HBsAg Confirmatory V.1, é considerada positiva para o HBsAg. O vírus
da hepatite B, ao contrário de outros vírus de ADN, replica‑se através
da transcrição reversa. Ao processo de transcrição reversa falta‑lhe
capacidade de verificação, por isso, o HBV é sujeito a uma taxa de
mutação 10 vezes superior à de outros vírus de ADN.15 Algumas destas
mutações podem causar alterações na estrutura antigénica do HBsAg,
resultando em epítopos que já não são reconhecidos pelos anticorpos
anti-HBs. Foram reportados mutantes de HBsAg numa vasta variedade
de populações de doentes, incluindo dadores de sangue, recetores
de vacinas, doentes sujeitos a diálise renal, recetores de transplantes
hepáticos ortotópicos, crianças nascidas de mães positivas para HBsAg
e doentes submetidos a tratamento com um nucleosídeo análogo
anti-HBV.15-22 As mutações do HBsAg podem originar um resultado menos
favorável em alguns doentes15,16,18 e resultados falsos negativos em
alguns ensaios HBsAg.15-17 Recomenda-se que os testes confirmatórios
sejam efetuados antes de revelar ao doente o diagnóstico de HBV.
O ensaio ARCHITECT HBsAg Confirmatory V.1 utiliza o princípio da
neutralização de anticorpos específicos para confirmar a presença do
HBsAg em amostras consideradas repetidamente reativas. O anticorpo
contra o antigénio de superfície da hepatite B (anti-HBs) (humano) é
incubado com uma amostra. Caso se verifique a presença de HBsAg na
amostra, este será neutralizado pelo anticorpo. O HBsAg neutralizado é
subsequentemente impedido de se ligar às micropartículas revestidas
de anticorpos anti-HBs. Isto conduzirá a uma redução do sinal em
comparação com o sinal de uma amostra emparelhada que não foi
tratada com o reagente de anticorpo. Uma amostra é considerada positiva
se o sinal para o resultado da amostra não neutralizada (incubada
com pré-tratamento 2 [reagente 2]) for superior ou igual ao cutoff
(S/CO ≥ 1,00) e a redução de RLU da amostra neutralizada for de, pelo
menos, 50% em comparação com a amostra não neutralizada.
PRINCÍPIOS BIOLÓGICOS DO PROCEDIMENTO
O ensaio ARCHITECT HBsAg Confirmatory V.1 é um imunoensaio de
pré‑tratamento de dois passos para a confirmação da presença de HBsAg
em soro e plasma humanos, baseado na tecnologia do Imunoensaio de
Micropartículas por Quimioluminescência (CMIA).
A amostra e o pré-tratamento 1 (reagente 1) são combinados numa
cuvete de reação (CR) e incubados. Caso se verifique a presença
de HBsAg na amostra, este será neutralizado pelo anticorpo no
pré‑tratamento 1 (reagente 1). Uma alíquota da amostra pré-tratada e
as micropartículas paramagnéticas revestidas de anticorpos anti-HBs
são combinadas noutra CR. O HBsAg não neutralizado presente na
amostra liga-se às micropartículas revestidas de anticorpos anti-HBs. O
HBsAg neutralizado é impedido de se ligar às micropartículas revestidas
de anticorpos anti‑HBs. Depois da lavagem, o conjugado de anticorpos
anti-HBs marcado com acridina é adicionado num segundo passo. Após
outro ciclo de lavagem, a solução pré-ativadora e a solução ativadora são
adicionadas à mistura de reação. A reação quimioluminescente resultante
é medida em unidades relativas de luz (RLU). Existe uma relação direta
entre a quantidade de HBsAg na amostra e as RLU detetadas pelo
sistema ótico do ARCHITECT i*.
2
Numa CR separada, a amostra e o pré-tratamento 2 (reagente 2) são
combinados e incubados. Uma alíquota da amostra pré-tratada e as
micropartículas paramagnéticas revestidas de anticorpos anti‑HBs
são combinadas noutra CR. O HBsAg presente na amostra liga-se às
micropartículas revestidas de anticorpos anti-HBs. Depois da lavagem,
o conjugado de anticorpos anti-HBs marcado com acridina é adicionado
num segundo passo. Após outro ciclo de lavagem, a solução pré‑ativadora
e a solução ativadora são adicionadas à mistura de reação. A reação
quimioluminescente resultante é medida em RLU. Existe uma relação
direta entre a quantidade de HBsAg presente na amostra e as RLU
detetadas pelo sistema ótico do ARCHITECT i.
Uma amostra é considerada positiva para HBsAg se o sinal para o
resultado da amostra não neutralizada (incubada com pré-tratamento 2
[reagente 2]) for superior ou igual ao cutoff (S/CO ≥ 1,00) e a redução
das RLU da amostra neutralizada (incubada com pré-tratamento 1
[reagente 1]) for de, pelo menos, 50% em comparação com a amostra
não neutralizada.
Para mais informações sobre a tecnologia do sistema e do ensaio,
consultar a secção 3 do Manual de Operação do ARCHITECT System.
* i = imunoensaio
REAGENTES
Kit de reagentes, 50 testes
ARCHITECT HBsAg Confirmatory V.1 Reagent Kit (9C94-25)
• 1 frasco (6,6 ml) de micropartículas revestidas
de anticorpos anti-HBs (rato, monoclonal, IgM, IgG) em tampão MES
com estabilizadores de proteínas. Concentração mínima: 0,0675% de
agentes sólidos. Conservante: ProClin 300.
• 1 frasco (5,9 ml) de conjugado de anticorpos
anti-HBs (cabra, IgG) marcado com acridina em tampão MES
com estabilizadores de proteínas (plasma bovino e humano).
Concentração mínima: 0,25 μg/ml. Conservante: ProClin 300.
• 1 frasco (2,4 ml) de pré-tratamento 1 contendo
plasma humano recalcificado; reativo para anticorpos anti-HBs.
Conservante: ProClin 300.
• 1 frasco (2,4 ml) de pré-tratamento 2 contendo
plasma humano recalcificado. Conservantes: agente antimicrobiano
e ProClin 300.
Diluente de ensaio
ARCHITECT HBsAg Manual Diluent (6C36-40)
• 1 frasco (100 ml) de diluente manual ARCHITECT
HBsAg contendo plasma humano recalcificado. Conservantes:
agente antimicrobiano e ProClin 300.
Outros reagentes
ARCHITECT i Pre-Trigger Solution
• Solução pré-ativadora contendo 1,32%
(p/v) de peróxido de hidrogénio.
ARCHITECT i Trigger Solution
• Solução ativadora contendo 0,35 mol/l de
hidróxido de sódio.
ARCHITECT i Wash Buffer
• Tampão de lavagem contendo solução salina
tamponada em fosfato. Conservantes: agentes antimicrobianos.
AVISOS E PRECAUÇÕES
•
• Para utilização em diagnóstico in vitro
• As instruções de utilização têm de ser rigorosamente cumpridas. A
fiabilidade dos resultados do ensaio não pode ser garantida se estas
instruções de utilização não forem cumpridas.
Precauções de segurança
• ATENÇÃO: este produto contém componentes de origem
humana e/ou componentes potencialmente infeciosos. Consultar
a secção REAGENTES destas instruções de utilização. Nenhum
método de ensaio pode garantir de forma absoluta que produtos
de origem humana ou microrganismos inativados não transmitam
infeção. Assim sendo, todos os produtos de origem humana devem
ser considerados potencialmente infeciosos. Recomenda-se que este
reagentes e amostras humanas sejam manuseado de acordo com as
indicações da norma OSHA (Standard on Bloodborne Pathogens).23
Devem ser utilizadas medidas de biossegurança de nível 224 ou
outras práticas de biossegurança apropriadas25,26 para materiais que
contenham ou sejam suspeitos de conter agentes infeciosos.
• O conjugado contém plasma humano não reativo para HBsAg,
HIV‑1 Ag ou ARN do HIV-1, anticorpos anti-HIV-1/HIV-2 e anti-HCV.
• O pré-tratamento 1 contém plasma humano reativo para anticorpos
anti-HBs e não reativo para HBsAg, HIV-1 Ag ou ARN do HIV-1,
anticorpos anti-HIV-1/HIV-2 e anti-HCV.
• O pré-tratamento 2 contém plasma humano não reativo para HBsAg,
HIV-1 Ag ou ARN do HIV-1, anticorpos anti-HIV-1/HIV-2, anti-HCV e
anti-HBs.
• Os seguintes avisos e precauções aplicam-se aos seguintes
componentes:
• Micropartículas
• Conjugado
• Pré-tratamento 1
• Pré-tratamento 2
ATENÇÃO: contém metil-isotiazolonas.
H317 Pode provocar uma reação alérgica
cutânea.
Prevenção
P261 Evitar respirar as névoas/vapores/
aerossóis.
P272 A roupa de trabalho contaminada não
pode sair do local de trabalho.
P280 Usar luvas de proteção/vestuário de
proteção/proteção ocular.
Resposta
P302+P352 SE ENTRAR EM CONTACTO COM A
PELE: lavar com água abundante.
P333+P313 Em caso de irritação ou erupção cutânea:
consulte um médico.
P362+P364 Retirar a roupa contaminada e lavá-la
antes de a voltar a usar.
Não se desfazer deste produto e do seu recipiente sem
tomar as precauções de segurança devidas.
• Poderá obter fichas de segurança em www.abbottdiagnostics.com ou
contactando o representante local.
• Para uma descrição detalhada das precauções de segurança a
tomar durante o funcionamento do sistema, consultar a secção 8 do
Manual de Operação do ARCHITECT System.
Precauções de manuseamento
• Não utilizar kits de reagente após o final do prazo de validade.
• Não misturar reagentes de diferentes kits de reagente.
• Antes de colocar o kit de reagentes do ensaio ARCHITECT HBsAg
Confirmatory V.1 no sistema pela primeira vez, o conteúdo do frasco
de micropartículas tem de ser homogeneizado para voltar a suspender
as micropartículas que se depositaram durante o transporte. Para
obter instruções sobre a homogeneização das micropartículas,
consultar a secção PROCEDIMENTO, Procedimento do ensaio
destas instruções de utilização.
• As tampas septum TÊM de ser utilizadas para evitar a evaporação e
a contaminação do reagente e, ainda, para assegurar a integridade
do mesmo. A fiabilidade dos resultados do ensaio não pode ser
assegurada se as tampas septum não forem utilizadas conforme
descrito nestas instruções de utilização.
• Para evitar a contaminação, utilizar luvas limpas ao colocar uma
tampa septum num frasco de reagente aberto.
• Uma vez colocada uma tampa septum num frasco de reagente
aberto, não inverter o frasco já que tal resultará no vazamento do
reagente, o que pode comprometer os resultados do ensaio.
• Com o tempo, poderão secar na superfície da tampa septum líquidos
residuais. Estes são normalmente sais secos que não interferem na
eficácia do ensaio.
• Para uma descrição detalhada das precauções de manuseamento
a ter durante o funcionamento do sistema, consultar a secção 7 do
Manual de Operação do ARCHITECT System.
Condições de conservação
• O kit de reagentes, os calibradores e controlos do ensaio
ARCHITECT HBsAg Confirmatory V.1 têm de ser conservados a 2-8°C
na posição vertical, e podem ser utilizados imediatamente após
serem retirados do local de conservação (2-8°C).
3
• Os reagentes mantêm-se estáveis até ao final do prazo de validade
quando conservados e manuseados de acordo com as indicações.
• O kit de reagentes ARCHITECT HBsAg Confirmatory V.1 pode ser
conservado no ARCHITECT i System durante um período máximo de
30 dias. Após os 30 dias, o kit de reagentes tem de ser eliminado.
Para mais informações sobre o controlo do período de conservação
dos reagentes no equipamento, consultar a secção 5 do Manual de
Operação do ARCHITECT System.
• Os reagentes podem ser conservados quer dentro quer fora
do ARCHITECT i System. Se os reagentes forem retirados do
sistema, conservá-los a 2-8°C (com tampas septum e tampas de
armazenamento) na posição vertical. Para reagentes conservados
fora do sistema, recomenda-se que os mesmos sejam conservados
nas suas placas e caixas originais para garantir que permanecem
na vertical. Caso o frasco de micropartículas não seja mantido
na posição vertical (com uma tampa septum colocada) durante
o período de conservação refrigerada fora do sistema, o kit de
reagentes tem de ser eliminado. Para mais informações sobre
a remoção dos reagentes, consultar a secção 5 do Manual de
Operação do ARCHITECT System.
Indicações de deterioração dos reagentes
Quando um valor de controlo se situa fora do intervalo especificado,
isso pode indiciar a deterioração dos reagentes ou erros na técnica.
Os resultados associados são inválidos e as amostras têm que ser
novamente analisadas. Poderá ser necessário voltar a calibrar o ensaio.
Para informações sobre a resolução de problemas, consultar a secção 10
do Manual de Operação do ARCHITECT System.
FUNCIONAMENTO DO EQUIPAMENTO
• O ficheiro de ensaio ARCHITECT HBsAg Confirmatory V.1 tem de ser
instalado no ARCHITECT i System a partir do ARCHITECT i System
Assay CD-ROM antes da execução do ensaio. Para informações
relativas à instalação do ficheiro de ensaio e à visualização e
alteração dos parâmetros de ensaio, consultar a secção 2 do Manual
de Operação do ARCHITECT System.
• Para informações sobre a impressão de parâmetros de ensaio,
consultar a secção 5 do Manual de Operação do ARCHITECT
System.
• Para uma descrição detalhada dos procedimentos do sistema,
consultar o Manual de Operação do ARCHITECT System.
COLHEITA E PREPARAÇÃO DAS AMOSTRAS PARA ANÁLISE
• Com o ensaio ARCHITECT HBsAg Confirmatory V.1 podem ser
utilizadas amostras de soro humano (incluindo soro colhido para tubos
separadores) ou amostras de plasma humano colhido com EDTA de
potássio, heparina de lítio, heparina de sódio, citrato de sódio, ACD,
CPDA-1, CP2D, CPD ou oxalato de potássio. Não foram validados
outros anticoagulantes para utilização com o ensaio ARCHITECT
HBsAg Confirmatory V.1. Seguir as instruções de processamento do
fabricante para os tubos de colheita de soro ou plasma.
• O ARCHITECT i System não dispõe da opção de verificação do
tipo de amostra. É da responsabilidade do operador verificar se são
utilizados os tipos corretos de amostra com o ensaio ARCHITECT
HBsAg Confirmatory V.1.
• Não foi estabelecido o desempenho do ensaio com amostras de
cadáver ou outros fluidos orgânicos para além do soro ou plasma
humanos.
• Manusear as amostras de doentes com cuidado para evitar
contaminação cruzada. Recomenda-se a utilização de pipetas ou de
pontas de pipeta descartáveis.
• Este ensaio foi concebido e validado para utilização com amostras
individuais de soro ou plasma humano de doentes e dadores. Não
se podem utilizar misturas de amostras uma vez que a exatidão dos
resultados dos seus testes não foi validada.
• Não utilizar amostras inativadas termicamente.
• Não utilizar amostras demasiado hemolisadas.
• Para otimização dos resultados, inspecionar todas as amostras para
detetar a presença de bolhas. Antes da análise, eliminar as bolhas
com uma vareta. Utilizar uma vareta nova para cada amostra de
forma a evitar a contaminação-cruzada.
• Para uma otimização dos resultados, as amostras de soro e
plasma devem estar isentas de fibrina, glóbulos vermelhos ou
outras partículas em suspensão. Tais amostras podem apresentar
resultados inconsistentes e têm que ser transferidas para um tubo
de centrífuga e centrifugadas a pelo menos 10.000 RCF (Relative
Centrifugal Force - Força Centrífuga Relativa) durante 10 minutos.
• Antes da centrifugação, assegurar que se formou completamente o
coágulo nas amostras de soro. Algumas amostras, especialmente as
de doentes a receberem terapêutica anticoagulante ou trombolítica,
podem apresentar maior demora na coagulação. Caso a amostra seja
centrifugada antes da formação completa do coágulo, a presença de
fibrina poderá dar origem a resultados erróneos.
• As amostras provenientes de doentes a receberem heparina podem
não se apresentar completamente coaguladas, podendo ocorrer
resultados erróneos devido à presença de fibrina. Para evitar que
isto aconteça, colher a amostra antes da terapêutica com heparina.
• A separação gravimétrica não é suficiente para a preparação
das amostras. As amostras têm de ser separadas dos coágulos
ou glóbulos vermelhos através de centrifugação, conforme as
indicações do fabricante dos tubos.
• As amostras podem ser conservadas com o coágulo ou glóbulos
vermelhos, ou separadas destes, por um período máximo de 14 dias
a 2-8°C.
• Se os testes forem adiados por um período superior a 14 dias,
separar o soro ou plasma do coágulo, separador de soro ou glóbulos
vermelhos e conservá-los congelados (-20°C ou temperatura inferior).
• As amostras têm de ser COMPLETAMENTE homogeneizadas após
a descongelação, através de vórtex de BAIXA velocidade.
• As amostras centrifugadas que contenham uma camada lipídica
na superfície do líquido têm de ser transferidas para um copo de
amostra ou tubo secundário. Deve ter-se o cuidado de transferir
apenas as amostras centrifugadas e não o material lipémico.
• Não foram observadas diferenças qualitativas entre controlos
experimentais e as 24 amostras reativas suplementadas sujeitas a
6 ciclos de congelação/descongelação. No entanto, devem evitar-se
vários ciclos de congelação/descongelação.
• Quando transportadas, as amostras têm de ser embaladas e rotuladas
de acordo com os regulamentos nacionais e internacionais aplicáveis
ao transporte de amostras e substâncias infeciosas. As amostras
podem ser transportadas à temperatura ambiente, a 2-8°C (gelo),
ou a - 20°C ou temperatura inferior (gelo seco). Não ultrapassar os
limites de tempo de conservação referidos atrás. Recomenda-se
que, antes do transporte, as amostras sejam separadas do coágulo,
do separador de soro ou dos glóbulos vermelhos.
• Não foram observadas diferenças no desempenho do ensaio ao
serem analisados controlos experimentais e 21 amostras reativas
suplementadas, analisadas com níveis elevados de triglicéridos
(≤ 3.000 mg/dl).
• Não foram observadas diferenças qualitativas no desempenho do
ensaio ao serem analisados controlos experimentais e 28 amostras
reativas suplementadas, analisadas com ≤ 0,4% v/v de glóbulos
vermelhos.
• Não foram observadas diferenças qualitativas no desempenho do
ensaio ao serem analisados controlos experimentais e 21 amostras
reativas suplementadas, analisadas com níveis elevados de proteínas
(≤ 12 g/dl).
• Não foram observadas diferenças no desempenho do ensaio ao
serem analisados controlos experimentais e 19 amostras reativas
suplementadas, analisadas com níveis elevados de bilirrubina
(≤ 20 mg/dl).
• Não foram observadas diferenças no desempenho do ensaio ao
serem analisados controlos experimentais e 22 amostras reativas
suplementadas, analisadas com níveis elevados de hemoglobina
(≤ 500 mg/dl).
• Os calibradores e controlos ARCHITECT HBsAg Confirmatory V.1
têm de ser homogeneizados por inversão cuidadosa antes de serem
utilizados.
PROCEDIMENTO
Material incluído:
• 9C94-25 ARCHITECT HBsAg Confirmatory V.1 Reagent Kit
Material necessário mas não incluído:
• ARCHITECT i System
• Ficheiro do ensaio ARCHITECT HBsAg Confirmatory incluído no:
• ARCHITECT i System e-Assay CD‑ROM disponível em
www.abbottdiagnostics.com
• ARCHITECT i System Assay CD-ROM
• 9C94-01 ARCHITECT HBsAg Confirmatory V.1 Calibrators
• 9C94-10 ARCHITECT HBsAg Confirmatory V.1 Controls
• 6C36-40 ARCHITECT HBsAg
• ARCHITECT i
4
• ARCHITECT i
• ARCHITECT i
• ARCHITECT i
• ARCHITECT i
• ARCHITECT i
• ARCHITECT i
• Para informação sobre os materiais necessários para a realização
dos procedimentos de manutenção, consultar a secção 9 do Manual
de Operação do ARCHITECT System.
• Pipetas ou pontas de pipeta (opcional) para dispensar os volumes
especificados nos ecrãs de programação das amostras dos doentes
ou do controlo.
Procedimento do ensaio
• Antes de colocar o kit de reagentes do ensaio ARCHITECT HBsAg
Confirmatory V.1 pela primeira vez no sistema, o conteúdo do frasco
de micropartículas tem de ser homogeneizado para voltar a suspender
as micropartículas que se depositaram durante o transporte:
• Inverter o frasco de micropartículas 30 vezes.
• Inspecionar visualmente o frasco para assegurar que as
micropartículas entraram novamente em suspensão. Caso
isso não se verifique, continuar a inverter o frasco até que as
micropartículas estejam completamente em suspensão.
• Quando as micropartículas estiverem de novo em suspensão,
retirar e eliminar a tampa. Utilizando luvas limpas, retirar uma
tampa septum da bolsa. Colocar cuidadosamente a tampa
septum no frasco.
• Se as micropartículas não entrarem em suspensão, NÃO
UTILIZAR. Contactar o seu representante Abbott.
• Colocar o kit de reagentes do ensaio ARCHITECT HBsAg Confirmatory
V.1 no ARCHITECT i System. Verificar se todos os reagentes
necessários estão presentes. Assegurar que todos os frascos de
reagente têm tampas septum.
• Para obter informações sobre a programação de testes das
amostras, calibradores e controlos e sobre os procedimentos
gerais de funcionamento, consultar a secção 5 do Manual de
Operação do ARCHITECT System.
Calibração
• Programar uma calibração, se necessário (consultar o Manual de
Operação do ARCHITECT System).
• Para efetuar uma calibração ARCHITECT HBsAg Confirmatory V.1,
analisar os calibradores 1 e 2 em triplicado. O volume mínimo de
copo de amostra necessário para a programação de 3 réplicas de
cada um dos calibradores é 338 µl para cada calibrador. Este volume
também é visualizado no ecrã Calibrações e no relatório da lista
de programação. Para avaliar a calibração do ensaio, analisar uma
única amostra de ambos os níveis de controlos do ensaio HBsAg
Confirmatory V.1. Assegurar que os valores de controlo do ensaio
se situam dentro dos intervalos de concentração especificados nas
instruções de utilização. Os calibradores devem ser colocados como
amostras prioritárias.
• Os calibradores ARCHITECT HBsAg Confirmatory V.1 têm de ser
homogeneizados por inversão cuidadosa antes da utilização.
Para obter os requisitos de volume recomendados para os
calibradores ARCHITECT HBsAg Confirmatory V.1, segurar os
frascos na vertical e dispensar 15 gotas de cada calibrador
(para três réplicas) nos respetivos copos de amostra.
• Uma vez aceite e armazenada uma calibração ARCHITECT HBsAg
Confirmatory V.1, todas as amostras subsequentes podem ser
analisadas sem necessidade de outra calibração, exceto quando:
• For utilizado um kit de reagentes com um novo número de lote
• Os controlos se situem fora do intervalo
• Para uma descrição detalhada da calibração do ensaio, consultar a
secção 6 do Manual de Operação do ARCHITECT System.
Controlos e amostras
• Programar testes (consultar o Manual de Operação do ARCHITECT
System).
• NOTA: para cada resultado confirmatório, são efetuados dois testes;
um para o pré-tratamento 1 (reagente 1) e um para o pré-tratamento 2
(reagente 2). Assim sendo, ao programar uma amostra de doente,
após selecionar o ensaio HBsAg Confirmatory V.1, selecionar
F5 - Opções do ensaio, em seguida selecionar o módulo,
escolhendo a opção Auto (modo predefinido no sistema i2000), ou
selecionar manualmente o módulo pretendido (se estiver a trabalhar
com o sistema i4000 ou i8000) e introduzir, em seguida, o número
de réplicas para o reagente 1 e para o reagente 2 (o mesmo que
pré‑tratamento 1 e pré-tratamento 2). Ter em atenção que no
método predefinido não se encontra especificado o número de
réplicas para o reagente 2. Para obter um resultado válido com
este teste, terá de se definir o número manualmente.
• O volume mínimo no copo de amostra necessário para efetuar o ensaio
HBsAg Confirmatory V.1 no ARCHITECT i System é de 242 µl (volume
de amostra para o pré-tratamento 1 [reagente 1] e pré‑tratamento 2
[reagente 2]) para o primeiro teste de confirmação HBsAg mais
200 µl para cada teste de confirmação adicional HBsAg efetuado
a partir do mesmo copo de amostra. Não se podem obter mais de
5 réplicas a partir do mesmo copo de amostra. Verificar se o copo
de amostra contém o volume mínimo de amostra antes de efetuar o
teste. O volume mínimo do copo de amostra é calculado pelo sistema
e impresso no relatório da lista de programação.
• Os controlos ARCHITECT HBsAg Confirmatory V.1 têm de ser
homogeneizados por inversão cuidadosa antes da utilização.
Para obter os requisitos de volume recomendados para os
controlos ARCHITECT HBsAg Confirmatory V.1, segurar os
frascos na vertical e dispensar 6 gotas de cada controlo (para
uma réplica) nos respetivos copos de amostra.
• Para minimizar os efeitos da evaporação, todas as amostras
(amostras de doentes, calibradores e controlos) têm de ser
analisadas no prazo de 3 horas após terem sido colocadas no
ARCHITECT i System. Se a amostra estiver no sistema há mais
de 3 horas, é necessário adicionar mais amostra. Para mais
informações relativamente à evaporação e volume de amostras,
consultar a secção 5 do Manual de Operação do ARCHITECT
System.
• Em caso de utilização de tubos primários ou de alíquota, utilizar
o medidor de nível de amostra para assegurar que existe amostra
suficiente.
• Colocar as amostras.
• Para informação sobre a colocação das amostras, consultar a
secção 5 do Manual de Operação do ARCHITECT System.
• Premir “Process.” O ARCHITECT i System efetua as seguintes funções:
• Desloca a amostra até ao ponto de aspiração.
• Coloca uma cuvete de reação (CR) na faixa de processamento.
• Aspira e transfere a amostra para a CR.
• Faz a CR avançar uma posição e adiciona o pré-tratamento 1
(reagente 1) à amostra.
• Homogeneíza e incuba.
• Transfere uma alíquota da amostra pré-tratada para uma
segunda CR.
• Faz a CR avançar uma posição e transfere as micropartículas
para a CR.
• Homogeneíza, incuba e lava a mistura de reação.
• Adiciona conjugado à CR.
• Homogeneíza, incuba e lava a mistura de reação.
• Adiciona as soluções pré-ativadora e ativadora.
• Mede a emissão quimioluminescente para determinar a presença
de HBsAg na amostra.
• Transfere o conteúdo da CR para os resíduos líquidos e a CR
para os resíduos sólidos.
• Calcula o resultado S/CO.
• Repete a sequência para a amostra e para o pré-tratamento 2
(reagente 2).
• O operador tem de calcular a % de neutralização utilizando resultados
de ambos os testes de pré-tratamento 1 e 2 (reagente 1 e 2).
• Obter a média das RLU do calibrador 1 do ARCHITECT i System
da seguinte forma:
• Selecionar o ícone CQ-Cal e, em seguida, selecionar
Estado da calibração do menu pendente.
• Selecionar o número de lote de reagente correto para
ser utilizado no cálculo da neutralização da amostra
correspondente.
5
• Selecionar Detalhes F5 para visualizar os resultados ou
selecionar Imprimir F4.
• Se tiver sido selecionada a opção Imprimir F4, selecionar o
Relatório detalhes da curva de calibração para imprimir os
valores da média das RLU do calibrador.
• Obter as RLU e o S/CO da amostra de pré-tratamento
(1 e/ou 2), o mesmo que reagente (1 e/ou 2), do ARCHITECT i
System da seguinte forma:
• Selecionar o ícone Resultados e, em seguida, Rever
resultados do menu pendente. Se o seu sistema estiver
configurado para autovalidação dos resultados, pode
visualizá-los no ecrã Resultados armazenados.
• Selecionar a(s) amostra(s) pretendida(s).
• Selecionar Detalhes F5 para visualizar os resultados ou
selecionar Imprimir F4.
• Se tiver selecionado Imprimir F4, selecionar Relatório dos
detalhes dos resultados para imprimir os valores das RLU
e S/CO da amostra.
• Consultar a secção RESULTADOS para o cálculo da % de
neutralização.
• Para um desempenho otimizado, é importante seguir os procedimentos
de manutenção de rotina definidos na secção 9 do Manual de
Operação do ARCHITECT System. Caso o seu laboratório requeira
uma manutenção mais frequente, seguir esses procedimentos.
Procedimentos de diluição das amostras
• Pode ser efetuado um procedimento de diluição manual se o
resultado do ensaio ARCHITECT HBsAg Confirmatory V.1 for reativo
mas não for neutralizado (amostra pré-tratada com pré-tratamento 2
[reagente 2] S/CO ≥ 1,00 e % neutralização < 50%).
• Para obter mais informações, consultar a secção RESULTADOS.
• A diluição recomendada para o ensaio ARCHITECT HBsAg
Confirmatory V.1 é 1:500.
• Para uma diluição 1:20, adicionar 25 µl da amostra do doente
a 475 µl de diluente manual ARCHITECT HBsAg.
Para uma diluição 1:500, adicionar 20 µl da diluição 1:20 a
480 µl de diluente manual ARCHITECT HBsAg.
• Podem ser efetuadas diluições adicionais das amostras, se
o resultado da diluição de 1:500 ainda for reativo mas não
neutralizado.
• Para uma diluição 1:20000, adicionar 25 µl da diluição 1:500
a 975 µl do diluente manual ARCHITECT HBsAg.
• NOTA: não podem ser introduzidos fatores de diluição manual nos
ecrãs de programação das amostras dos doentes ou do controlo.
No entanto, para a manutenção de informações pormenorizadas
(registos) selecionar Programar amostras e, em seguida,
selecionar o ensaio apropriado. Selecionar Detalhes amostra F2.
Introduzir o fator de diluição na caixa Comentários.
• Para informações detalhadas relativamente à programação de
diluições, consultar a secção 5 do Manual de Operação do
ARCHITECT System.
PROCEDIMENTOS DE CONTROLO DE QUALIDADE
NOTA: para a verificação da calibração, recomenda-se que sejam
analisados o controlo positivo e o controlo negativo do ensaio ARCHITECT
HBsAg Confirmatory V.1.
O controlo de qualidade recomendado para um ensaio ARCHITECT
HBsAg Confirmatory V.1 é uma única amostra de cada controlo, analisada
uma vez a cada 24 horas, cada dia de utilização. Caso os procedimentos
de controlo de qualidade do laboratório requeiram uma utilização
mais frequente dos controlos para a verificação dos resultados, esses
procedimentos devem ser seguidos. Assegurar que os valores de controlo
do ensaio se situam dentro dos intervalos de concentração especificados
nas instruções de utilização do controlo.
Verificação das especificações do ensaio
Para conhecer os protocolos de verificação das especificações das
instruções de utilização, consultar o anexo B do Manual de Operação
do ARCHITECT System. O ensaio ARCHITECT HBsAg Confirmatory V.1
pertence ao grupo de método 4.
RESULTADOS
O ARCHITECT i System calcula a média das RLU do calibrador 1 e do
calibrador 2 a partir das três réplicas de cada calibrador e armazena o
resultado.
Cálculo LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO
O ensaio ARCHITECT HBsAg Confirmatory V.1 calcula os resultados • As amostras de doentes que receberam preparações de anticorpos
com base numa determinação do cutoff e da amostra/cutoff (S/CO), de monoclonais de rato para fins de diagnóstico ou terapêutica podem
acordo com os seguintes cálculos: conter anticorpos humanos antirrato (HAMA). Tais amostras poderão
• Cutoff = RLU média do calibrador 1 apresentar valores falsamente elevados ou baixos quando analisadas
+ (0,0075 x [média das RLU do calibrador 2 – média das RLU com ensaios que empreguem anticorpos monoclonais de rato.29,30
do calibrador 1]) Poderão ser necessárias informações clínicas ou de diagnóstico
• S/CO = RLU da amostra/RLU do cutoff adicionais para determinar o estado do doente.
A percentagem (%) de neutralização é calculada pelo operador conforme • Se os resultados do ensaio HBsAg Confirmatory V.1 forem
indicado a seguir. inconsistentes com as evidências clínicas, recomenda-se a
• Utilizar os valores de pré-tratamento 1 e 2 (reagente 1 e 2) obtidos realização de testes adicionais para confirmação desses resultados.
para a mesma amostra para calcular a % de neutralização. • Para fins de diagnóstico, os resultados deverão ser utilizados em
conjunto com a história clínica do doente e com outros marcadores
(RLU da amostra com de hepatite para o diagnóstico de infeção aguda ou crónica.
pré‑tratamento 2 [reagente 2] - • As amostras que contenham partículas em suspensão ou glóbulos
RLU da amostra com vermelhos têm que ser centrifugadas antes da execução do ensaio.
pré‑tratamento 1 [reagente 1])
• % neutralização* = x 100 • Não foi estabelecido o desempenho do ensaio com amostras de
(RLU da amostra com cadáver ou outros fluidos orgânicos para além do soro ou plasma
pré‑tratamento 2 [reagente 2] - humanos.
média das RLU do calibrador 1) • Não utilizar amostras inativadas termicamente.
* Arredondar para uma única casa decimal. • As amostras provenientes de doentes a receberem heparina podem
não se apresentar completamente coaguladas, podendo ocorrer
Interpretação dos resultados
resultados erróneos devido à presença de fibrina. Para evitar que
Positivo - se o resultado S/CO da amostra não neutralizada (incubada isto aconteça, colher a amostra antes da terapêutica com heparina.
com pré-tratamento 2 [reagente 2]) for ≥ 1,00 e a percentagem de
neutralização for ≥ 50%, a amostra é confirmada positiva para HBsAg. CARACTERÍSTICAS ESPECÍFICAS DE DESEMPENHO
Negativo - se o S/CO da amostra não neutralizada (incubada com Confirmação de amostras reativas para HBsAg
pré-tratamento 2 [reagente 2]) for < 1,00, a amostra é considerada Foram analisadas 6379 amostras das seguintes categorias com o ensaio
repetidamente reativa, não confirmada para HBsAg. ARCHITECT HBsAg: amostras de dadores de sangue total, amostras de
A tabela que se segue resume as várias interpretações finais dos doentes hospitalizados, amostras de indivíduos com estados clínicos
resultados com e sem diluição: não relacionados com a infeção pelo HBV e amostras contendo
substâncias potencialmente interferentes, amostras pré-selecionadas
S/CO positivas para HBsAg, amostras de doentes com infeção aguda e crónica
(Pré-tratamento % INTERPRETAÇÃO pelo HBV e com risco elevado de contrair infeção pelo HBV (tabela I).
DILUIÇÃO 2 [reagente 2]) NEUTRALIZAÇÃO FINAL Foram analisadas com o ensaio ARCHITECT HBsAg Confirmatory V.1
SEM < 1,00 N/A* Repetidamente reativa 426 amostras repetidamente reativas, para confirmação da presença de
DILUIÇÃO Não confirmada HBsAg. Em 418 das 426 amostras (98,12%) foi confirmada a presença
≥ 1,00 ≥ 50% Confirmada positiva de HBsAg.
≥ 1,00 < 50% Fazer uma diluição TABELA I
1:500 Confirmação de amostras reativas com o ARCHITECT HBsAg pelo
1:500 < 1,00 N/A Repetidamente reativa, ARCHITECT HBsAg Confirmatory V.1
Não confirmada ARCHITECT
≥ 1,00 ≥ 50% Confirmada positiva Ensaio HBsAg
≥ 1,00 < 50% Fazer uma diluição ARCHITECT Confirmatory V.1
1:20000 HBsAg Amostras
Nº de amostras positivasa
1:20000 < 1,00 N/A Repetidamente reativa, repetidamente (% de
Não confirmada Número reativas repetidamente
≥ 1,00 ≥ 50% Confirmada positiva Categoria analisado (% do total) reativas)
≥ 1,00 < 50% Repetidamente reativa, Dadores de sangue 5043 8 (0,16%) 1 (12,50%)
Não confirmada total
Doentes hospitalizados 500 3 (0,60%) 3 (100,00%)
* N/A = Não aplicável
NOTA: seguir os procedimentos de diluição e de interpretação indicados Estados clínicos não
na tabela acima, mesmo que seja obtida uma neutralização negativa ou relacionados com
uma neutralização > 100%. a infeção pelo
HBV e substâncias
A interpretação de não confirmada para HBsAg indica que a presença potencialmente
de HBsAg não pode ser confirmada através de neutralização. O resultado interferentesb 333 7 (2,10%) 6 (85,71%)
repetidamente reativo obtido com o ensaio ARCHITECT HBsAg pode
ser o resultado de uma reação não específica (falso reativo). Uma Amostras
vez que a presença de ligação não específica pode obscurecer níveis pré‑selecionadas
baixos de HBsAg na amostra devido a infeção precoce ou recuperação positivas para HBsAg 343 343c (100,00%) 343 (100,00%)
precoce, recomenda-se que o doente seja avaliado a outros marcadores Infeção aguda pelo 10 10 10 (100,00%)
serológicos de infeção por HBV (ou seja, anticorpos totais anti‑HBc ou HBV (100,00%)
anticorpos IgM anti‑HBc)27 e que o doente volte a ser testado a HBsAg Infeção crónica pelo 50 50 50 (100,00%)
após 4 a 6 semanas.28 HBV (100,00%)
• Apesar de existir uma associação entre a presença de HBsAg, Risco elevado
infeciosidade e um resultado reativo, reconhece-se que os métodos de infeção pelo HBVd 100 5 (5,00%) 5 (100,00%)
atualmente disponíveis para a confirmação de HBsAg podem não
TOTAL 6379 426 (6,68%) 418 (98,12%)
confirmar todos os casos possíveis de infeção pelo HBV.
a Uma amostra é considerada positiva se o sinal para o resultado da
Alertas
• Alguns resultados poderão conter informação no campo reservado amostra não neutralizada (incubada com pré-tratamento 2 [reagente 2])
a alertas. Para uma descrição dos alertas que poderão aparecer for superior ou igual ao cutoff (S/CO ≥ 1,00) e a redução das RLU da
neste campo, consultar a secção 5 do Manual de Operação do amostra neutralizada for de pelo menos 50% em comparação com a
ARCHITECT System. amostra não neutralizada.

6
b Esta categoria incluiu: amostras positivas para anticorpos 22. Bock CT, Tillmann HL, Torresi J, et al. Selection of hepatitis B virus
anti‑CMV (10), anti‑EBV (10), anti-HSV (10), anti-HAV (10), anti‑HCV polymerase mutants with enhanced replication by lamivudine treatment
(10), anti‑HIV-1 (10), amostras de indivíduos vacinados contra o after liver transplantation. Gastroenterology 2002;122:264‑73.
HBV (10), amostras positivas para anticorpos contra a rubéola (10), 23. US Department of Labor, Occupational Safety and Health
amostras positivas para anticorpos contra toxoplasma (10), infeções por Administration, 29 CFR Part 1910.1030, Bloodborne pathogens.
E. coli (10), infeções por levedura (10), amostras positivas para sífilis 24. US Department of Health and Human Services. Biosafety in
(10), amostras positivas para anticorpos antinucleares (10), fator Microbiological and Biomedical Laboratories. 5th ed. Washington, DC:
reumatoide (10), mieloma múltiplo (10), mulheres multíparas (10), US Government Printing Office; December 2009.
cirrose alcoólica (10) e grávidas (163).
c As amostras foram analisadas uma vez.
25. World Health Organization. Laboratory Biosafety Manual. 3rd ed.
Geneva: World Health Organization; 2004.
d Esta categoria incluiu: utilizadores de drogas intravenosas (25),
26. Clinical and Laboratory Standards Institute. Protection of Laboratory
doentes hemodialisados (25), hemofílicos (25), homens que tiveram Workers from Occupationally Acquired Infections: Approved
relações sexuais com outros homens (25). Guideline—Third Edition. CLSI Document M29-A3. Wayne, PA:
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