AULA PRÁTICA 01

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Tema da aula: Realizar a técnica Aglutinação Direta (tipagem sanguínea)

Introdução: A importante descoberta de que as hemácias pertenciam a diferentes grupos sanguíneos

foi realizada por Landsteiner em 1900, que identificou o sistema ABO, o mais importante e conhecido
sistema de grupos sanguíneos. Sua classificação baseia-se na existência de dois antígenos, A e B,
presentes nos glóbulos vermelhos, os quais se denominam aglutinogênios e são herdados
geneticamente dos pais; e dos anticorpos correspondentes, as isoaglutininas anti-A e anti-B, que
existem naturalmente no soro sanguíneo. Dessa forma, o sistema foi dividido em quatro grupos – A,
B, AB e O –, onde os indivíduos são classificados como: • “A”: possuem antígenos A nas hemácias e
anticorpos contra antígenos B no plasma;

• “B”: possuem antígenos B nas hemácias e anticorpos contra antígenos A no plasma; • “AB”:
possuem antígenos A e B nas hemácias, e não possuem anticorpos contra nenhum dos dois fatores no
plasma;

• “O”: não possuem antígenos nas hemácias, e possuem anticorpos contra ambos os antígenos A e B
no plasma.

Para a determinação do tipo sanguíneo, utilizamos a pesquisa de antígenos ABO nas hemácias, método
chamando de tipagem Direta; e para a confirmação destes mesmos grupos sanguíneos, pode-se realizar
ainda a tipagem Reversa, onde são detectados seus respectivos anticorpos.

O fator Rh foi descoberto em 1940 por Landsteiner e Wiener. A partir daí foram descobertos
aproximadamente 40 ou mais antígenos diferentes no sistema Rh, porém, na prática, procura-
se determinar a presença ou ausência de um deles, especificamente o antígeno D. Sua presença
irá caracterizar o indivíduo como RhPositivo, e sua ausência como Rh-Negativo. A
classificação de antígeno Rh (D) é feita testando-se o sangue com soro antiRh (D), ou seja,
pesquisando-se a presença do antígeno D nas hemácias do indivíduo em questão.
INDICAÇÃO DO EXAME:
Os antígenos eritrocitários são geneticamente determinados e podem ser classificados em diversos
sistemas. Os de maior expressão são os sistemas ABO e Rh. Os anticorpos do sistema ABO são
naturais, enquanto os anticorpos do sistema Rh são produzidos após sensibilização.

PRINCÍPIO
Para ABO: os reagentes causam aglutinação direta macroscópica das hemácias que carregam
os antígenos correspondentes. As hemácias possuidoras do antígeno A se aglutinam quando
misturadas ao reagente anti-A; igualmente, hemácias possuidoras do antígeno B aglutinam na
presença do reagente anti-B. O teste adicional empregando-se o reagente anti-A e anti-B
facilita o reconhecimento de sub-grupos raros de baixa reatividade aglutinando as hemácias
dos grupos A, B e AB, mas não do grupo O.

Para Rh: as expressões Rh positivo ou Rh negativo são baseadas na presença ou ausência do

antígeno D. Quando Rh negativo, pesquisar as formas fracas do antígeno D. O antígeno D-
fraco é uma variante do antígeno D e tão antigênico quanto ele.

TESTE EM LÂMINA – PUNÇÃO DIGITAL

1. Realizar a antissepsia da área de punção com a mão dominante, utilizando parte do

algodão embebido em álcool 70%. Aguardar o álcool evaporar espontaneamente.
2. Segurar a região a ser puncionada com os dedos polegar e indicador (1° e 2°
quirodáctilo) com a mão não dominante, fazendo leve pressão, mas sem tocar no local
que foi realizada a antissepsia.
3. Retirar a lanceta do invólucro, mantendo-a na mão dominante.
4. Acionar o botão de disparo da lanceta na área selecionada em ângulo perpendicular à
pele e aguardar a saída da amostra de sangue capilar (Imagens 1). Caso a quantidade
de sangue seja insuficiente, comprimir levemente o local proximal à punção ou repetir
o procedimento em outra região ou área.
5. Colocar três gotas de sangue na lâmina conforme esquematizado na Imagem 02.
6. Adicionar uma gota dos reagentes anti-A, anti-B e anti-D na lâmina conforme
esquematizado na figura 02.
7. Misturar o reagente com a gota de sangue
8. Movimentar gentilmente a lâmina em movimentos giratórios com cuidado para não
misturar as gotas e observar a presença ou não de aglutinação macroscópica em até 2
minutos. Anti-A Anti-B Anti-D

01 : Imagem 02: Esquema para tipagem em lâmina. Atenção

1 para não misturar as goras de sangue.
RESULTADOS:
a) Princípio
Positivo: a aglutinação dos eritrócitos pelo reagente indica a presença de antígeno
correspondente.
Negativo: a ausência de aglutinação dos eritrócitos pelo reagente indica a ausência de
antígeno correspondente.
b) Reações para grupos ABO
Anti- A Anti- B Anti- AB Anti- D Grupo
Sanguíneo
Fator Rh

+ negativo + + A+

+ negativo + negativo A-

negativo + + + B+

negativo + + negativo B-

+ + + + AB +

+ + + negativo AB -

negativo negativo negativo + O+

negativo negativo negativo negativo O-

Reações fracas podem indicar a presença de subgrupos de A (ABO1) ou B (ABO2), o que

requer procedimentos adicionais. Para uma interpretação correta, deve-se fazer uma
fenotipagem completa (prova direta com anti-A, anti-B, anti-AB e prova reversa com
hemácias A1, A2, B e O).

Resultados dos testes realizados:

Anti-A Anti-B RH (Anti-D) Grupo sanguíneo/Rh
Amostra 01
Amostra 02
Amostra 03
Amostra 04
Atividade Pós-laboratório
1. Resolva:
Anti-A Anti-B RH (Anti-D) Grupo sanguíneo
+ - -
- - +
+ + -
- + -
- - -

2. Diferencie aglutinogênio de aglutinina.

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