16/06/2019 6.

TÉCNICAS DE SEMEADURA

Detalhes Microbiológicos
Bem-vindos ao site da Professora Zilka Nanes. A necessidade da criação deste endereço eletrônico
para fins didá cos surgiu como forma de adaptação aos alunos do século XXI, que dominam as
novas tecnologias de informação e comunicação (TIC,s). Sendo assim o obje vo é tornar a vida
acadêmica mais fácil no que tange as disciplinas e estágios ministrados (Microbiologia Básica,
Imunologia Básica e Estagio em Microbiologia e Imunologia Clínica).

6. TÉCNICAS DE SEMEADURA
Por Zilka Nanes - 8/03/2016

Fonte: h p://www.prolab.com.br/

Técnicas de semeadura por esgotamento e da alça

calibrada. Análise da morfologia de colônias isoladas
de micro-organismos em meios sólidos.
a
(Microbiologia Básica / Prof . ZilkaNanes Lima
)
Copyright ZILKA NANES LIMA © 2016 - Todos os direitos reservados

1. Técnica de semeadura por esgotamento

a) Primeiro marcar o fundo da placa que vai ser processada com o protocolo ou
nome do paciente, origem da amostra e data.

b) Posteriormente fazer o inóculo em um dos cantos da superfície do meio de

cultura; ou com swab com a amostra biológica recém coletada (quando a secreção
estiver nele) ou transferir uma alíquota com alça bacteriológica (em caso de

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amostras biológicas que não são coletadas com swab, como as fezes; ou ainda
quando se faz repique de culturas guardadas em geladeira em meios sólidos ou
caldos); rolar o swab no mesmo lugar do meio algumas vezes. Descartar o swab em
solução de hipoclorito de sódio à 0,5% ou em lixo hospitalar. As secreções podem
ser colocadas em ágar Stuart, que é um meio de transporte, para preservar as
características por mais tempo até o processamento. Quando utilizar Stuart,
retornar o swab para o tubo e deixar à temperatura ambiente, assim a amostra
ficará estável por 24 horas.

c) Flambar a alça bacteriológica, deixar esfriar. Tocar encima do inóculo feito com o
swab espalhando o mesmo com a alça fazendo estrias bem juntas em cerca de um
terço da superfície da placa, de modo gradativo vai se fazendo outras estrias mais
afastadas uma das outras em novas direções até esgotar o material contido no
inóculo. Preferencialmente usa-se um esquema de divisão da placa em 4
quadrantes sendo que a estria de cada quadrante toca no final da estria do
quadrante anterior arrastando bactérias deste último. Nesse caso, deve-se flambar
a alça após a inoculação de cada quadrante. Pode-se também optar por não tocar
no final da estria do quadrante anterior, não sendo assim necessário flambar a alça
após cada quadrante. A estria do último quadrante ocupa a maior parte da placa.
Alternativamente pode-se fazer 3 estrias, a primeira ocupando metade da placa e as
outras duas um quarto da placa cada. Neste modo as estrias não se tocam. Caso o
meio do processamento seja o ágar Sangue, após fazer as estrias, furar o meio de
cultura encima das estrias até o fundo da placa com a alça bacteriológica na
posição vertical.
‡ d) Incubar a placa invertida em estufa bacteriológica à 36 ± 2 oC por 24
horas. Após cerca de 24 horas avaliar as características morfológicas das colônias
isoladas. O ágar Sangue deve ser incubado em microaerofilia na mesma
temperatura, colocar as placas dentro de um jarra de vidro ou lata, acender uma
vela, deixar acessa dentro da jarra e fechá-la; a vela irá consumir boa parte do
oxigênio e gerar o aumento de dióxido de carbono.

Figura 1 - Esquema para semeadura de meios de cultura pela técnica do esgotamento.

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Fonte: Autora (arquivo pessoal)

 Objetivos da técnica de esgotamento:
A técnica de semeadura por esgotamento é utilizada para obtenção de colônias
isoladas em meio sólido. O material a ser processado pode ser o micro-organismo em caldo ou
em ágar ou amostras clínicas tais como secreções. A técnica visa obter colônias isoladas de
bactérias ou leveduras presentes em materiais biológicos, permitindo a diferenciação de
diferentes tipos morfológicos.
A técnica do esgotamento em placa consiste em depor sobre um ponto da superfície do
meio uma alíquota do material e depois espalhá-lo em três ou quatro setores, por meio de alça
de platina, sem recarregá-la, de maneira a obter quantidades progressivamente menores do
material. Temos que obter rarefação suficiente do material, de modo a formar colônias
perfeitamente isoladas.
O sucesso da semeadura está em:
a) grande número de estrias;
b) não perfurar o meio;
c) não voltar a alça sobre a estria
d) pegar pequena quantidade de material para semear.
e) SEMPRE TRABALHAR COM TODO MATERIAL PRÓXIMO À CHAMA DO BICO
DE BUNSEN PARA EVITAR CONTAMINAÇÃO EXTERNA NO SEU EXPERIMENTO.
f) SEMPRE FLAMBAR A ALÇA BACTERIOLÓGICA QUANDO NECESSÁRIO.
g)DESCARTAR SWABS CONTAMINADOS EM SOLUÇÃO DE HIPOCLORITO DE
SÓDIO À 0,5 %.

Figura 2 - Colônias de Staphylococcus spp. em ágar Müeller Hinton, coletadas com

swab umedecido em solução fisiológica da parte de trás do pavilhão auricular direito.

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Fonte: Autora (arquivo pessoal)

2. Técnica da alça calibrada

a) Homogeneizar a amostra de urina (Primeira micção - jato médio), ou qualquer outra

amostra líquida que se queira quantificar os micro-organismos. Não centrifugar.

b) Imergir a alça calibrada de 0,001 mL (1 µL) na urina de forma vertical, ou alça de 0,01mL
(10 µL) em outras amostras. Observar se preencheu todo o espaço do aro com urina. Observar
se não ficou bolhas no líquido que preenche o aro.

c) Semear primeiro em placa de ágar CLED (não seletivo), imergir novamente a alça na
urina e em seguida semear a placa de ágar MacConkey (seletivo) / Em caso de urina de
gestante adicionar uma placa de ágar Sangue e semear primeiro este meio, não esquecer de
fazer as picadas com alça para evidenciar hemólise.

d) Incubação: em estufa à 35 ±1 oC por 18 a 24 horas.

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As placas de ágar CLED ou ágar MacConkey deverão ser incubadas em estufa

bacteriológica ambiente por 24 horas (e ágar sangue em microaerofilia), devendo este período
ser prolongado quando NÃO HOUVER CRESCIMENTO NO PRIMEIRO DIA DE INCUBAÇÃO,
e as condições clínicas justificarem ou quando houver suspeita de infecção por Gram-positivos
(Enterococcus spp, Streptococcus agalactiae ou leveduras). O tempo de incubação também
deverá ser prolongado para 48 - 72 horas se na análise da sedimentoscopia da urina foi
observada a presença de freqüentes micro-organismos ou número elevado de leucócitos e se o
resultado da bacterioscopia sugere infecção urinária. Em urinas de pacientes hospitalizados
havendo suspeita de ITU deixar as placas incubadas por até 5 dias, principalmente o ágar
MacConkey, pois a Stenotrophomonas maltophilia pode crescer somente após este tempo.

Figura 3 - Esquema para semeadura de meios de cultura pela técnica da

alça calibrada (técnica quantitativa)

Fonte: Autora (arquivo pessoal)

Figura 4 - Técnica da alça calibrada (quantitativa)

54.000 colônias por mL de Candida parapsilosis em ágar CLED.

(CLED = cystine lactose eletrolyte deficient)

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Fonte: Autora (arquivo pessoal)

Interpretação: Alça de 1 microlitro - 1 colônia = 1.000 ou 103 UFC/mL

alça de 10 microlitros - 1 colônia = 100 ou 102 UFC/mL

Explicação da técnica: Em sua execução a alça bacteriológica é introduzida em uma amostra

de urina bem homogeneizada, fazendo-se movimentos para baixo e para cima no sentido
vertical. A alça carregada é então utilizada para inocular cada meio de cultura, fazendo-se,
inicialmente, uma linha reta no centro da placa e completando-se o espalhamento com uma
série de passagens em um ângulo de 90º, através da linha original. Importante item de controle
de qualidade é utilizar alças calibradas periodicamente aferidas ou, quando possível, alças
descartáveis.

Objetivos da técnica da alça calibrada: Quantificar micro-organismos em amostras líquidas.

Isolar colônias de micro-organismos permitindo assim a descrição da sua morfologia.
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3.Análise morfológica da colônia (Utilizar os espaços que seguem para anotar a interpretação
destas características e ao final sugerir o possível gênero e/ou espécie do micro-organismo).
Meio de cultura: _______________________ Densidade: _________________________
Tamanho/Odor: _______________________ Cor: _______________________________
Borda ou forma:_______________________ Consistência/Aparência: _______________
Elevação:____________________________ Hemólise em ágar Sangue: _____________

Sugerir qual é o micro-organismo: ___________________________________________

Tabela 1. Características do crescimento de alguns micro-organismos.

Micro- Tamanho / Borda ou Elevação Densidade Cor Consistência Hemólise

organismo Odor forma / Aparência em AS
Staphylococcus Grande Circular Convexa Opaca Amarela ou Cremosa Em geral
aureus /Queijo branca beta
Staphylococcus Médio Circular Elevada Opaca Branco- Cremosa Em geral
coagulase- /Queijo acizentada sem
nega va
Streptococcus do Pequeno Irregular, Achatada Opaca Branco- Embaçada Alfa
grupo viridans /Caramelo pun forme acizentada
Streptococcus Pequeno Circular Umbilicada Transparent Cinza Brilhante Alfa
pneumoniae Achatada e Mucóide
Streptococcus Pequeno Pun forme Convexa Translúcida Cinza Brilhante Beta
pyogenes
Streptococcus Médio Circular Convexa Translúcida Cinza Cremosa Beta
agalac ae
Enterococcus Médio Circular Elevada Opaca Cinza Brilhante Em geral
faecalis /Caramelo sem
Escherichia coli Médio Circular Achatada Opaca Cinza (AS) Seca Em geral
/Vinagre Rosa(MC) beta
Klebsiella spp. Grande Circular Convexa Opaca Cinza(AS) Mucóide Sem
/Fermento Rosa(MC) hemólise
de pão
Salmonella spp. Pequeno Circular Convexa Translúcida Centro Brilhante Sem
/Fé do preto(SS) hemólise
Incolor(MC)
Proteus spp. Médio Ondulada Achatada Translúcida Incolor (MC) Brilhante Sem
/Fé do hemólise
Pseudomonas Médio Irregular Achatada Transparent Incolor Brilhante Com ou
aeruginosa /Uva e (MC). sem.
Pigmento

esverdeado.

Candida spp. Médio Circular, Elevada Opaca Branca Cremosa Sem

/Pão filamentos

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a
AS= Agar sangue; MC=Agar MacConkey; SS= Agar Salmonella-Shigella;
Tamanho das colônias (mm) : Grande = maior que 1 mm de diâmetro (Ex: Klebsiella pneumoniae)
Média = 1 mm de diâmetro (Ex: Enterococcus faecalis)
Pequena = menor que 1 mm de diâmentro (Ex: Streptococcus pyogenes)

Referências bibliográficas:
- Oplus l, C.P.; Zoccoli, C.M.; Tobou , N.R.; Sinto, S.I. Procedimentos Básicos em Microbiologia Clínica, 3ª
Ed. Sarvier, São Paulo, SP, 2010.
- h p://coral.ufsm.br/microgeral/Pra cas/Roteito%20pra ca%20semeaduras.pdf Acessado em 03 de
Julho de 2013.
- Conhecimento adquirido
Professora Zilka Nanes Lima   (Professora de Microbiologia e Imunologia Clínica)

Copyright ZILKA NANES LIMA © 2016

Direito exclusivo da autora de imprimir, reproduzir ou vender obra literária, artística ou científica.

Aula Prá ca Microbiologia Microbiologia Básica Microbiologia Clínica

Lívia Emmily 12/13/2017

Amei a página... me ajudou/tem ajudado muito na disciplina <3 Obrigada!!!

Zilka Nanes Lima 7/16/2018

Bom saber. Você foi a primeira aluna que comentou aqui no blog. Este
reconhecimento incen va na melhoria do conteúdo. Ainda servirá para as
revisões da parte básica para Microbiologia Clínica e Imunologia Clínica. Nossa
pretensão é também adicionar posteriormente as Clínicas.

RESPONDER

Reginaldo Cunha 8/12/2018

muito booomm

Zilka Nanes 5/01/2019

Obrigada. Pode deixar sugestões para o nosso melhoramento heim. :)

RESPONDER

Unknown 1/24/2019

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Excelente conteúdo, parabéns!

Zilka Nanes 5/01/2019

Agradecemos. :)

RESPONDER

dai 5/06/2019
Amei, muito bom

Zilka Nanes 5/06/2019

Que bom. Ficamos felizes em saber. Uma das nossas "edublogueiras", Rita de
Cássia, defenderá o TCC intulado "CONTRIBUIÇÃO DO EDUBLOG DETALHES
MICROBIOLÓGICOS COMO RECURSO PEDAGÓGICO EM MICROBIOLOGIA E
IMUNOLOGIA". Estou tão orgulhosa.

RESPONDER

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