01/12/2022

CURSO DE APERFEIÇOAMENTO
MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS E PROCESSOS
Data Assuntos
FACULDADE DE ENGENHARIA DE ALIMENTOS
17/11 Introdução a Biologia Molecular

PROGRAMA 21/11 Técnicas DNA/RNA e PCR

FEA-0411 24/11 PFGE, RFLP, AFLP

INTRODUÇÃO A MICROBIOLOGIA
29/11 qPCR

01/12 Sequenciamento Sanger

BIOLOGIA MOLECULAR MOLECULAR DE

ALIMENTOS
06/12 Filogenia/Evolução

13/12 Sequenciamento NGS

15/12 Ecologia

Lorena Carnielli, PhD

lcarnielliqueiroz@gmail.com

ROTEIRO
1. A descoberta da
estrutura do DNA
2. O Dogma Central
1. DNA
2. RNA
3. Proteína

3. Técnicas de análise de
DNA/RNA

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A DESCOBERTA DO DNA O DOGMA CENTRAL

• 1953 - J. WATSON, F.
CRICK e M. WILKINS
(®1962)
• ROSALIND FRANKLIN

Fotografia 51

Nature education 2013

http://images.rapgenius.com/82b71adf0d8d1d8997ee95debc1fb8b5.1000x437x1.png

A partir de então, a biologia molecular tornou-se, de fato, uma ciência que

hoje, após anos de avanços, traz à cena a transgênese, a genômica e a
possibilidade da clonagem reprodutiva.

http://notes.komputerwiz.net:8000/wiki/BIOL_111_Chapter_17

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PROJETO GENOMA HUMANO (2004)

Informações Funcionais
Identificação

MÉTODOS
DETECÇÃO,
Técnicas microbiológicas
ISOLAMENTO E dependente de crescimento
IDENTIFICAÇÃO
Enriquecimento;
DE MICRO- Alimento Meios seletivos
Cultura
pura
ORGANISMOS

identificação

Métodos Testes Bioquímicos

imunológicos, Métodos genéticos
biossensores Métodos imunológicos
Métodos genéticos

Subtipagem

Fu; Li, 2014

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MÉTODOS DE GENOTIPAGEM
Biologia
 Eletroforese em gel de campo pulsante (pulsed-
field gel eletrophoresis - PFGE) Aplicações
Molecular é o
 DNA polimórfico amplificado aleatoriamente  Detecção de micro-organismos em alimentos; estudo da
(randomly amplified polymorphic DNA - RAPD)  Identificação de gênero e espécie; composição,
 Polimorfismo do comprimento do fragmento de
 Caracterização do potencial de virulência de patógenos;
estrutura e
restrição/Amplificado (restriction fragment length  Estudos evolutivos;

polymorphism – RFLP/AFLP)  Verificação da proximidade genética dos isolados;

interações de
 PCR - Reação em cadeia da polimerase  Diagnóstico de surtos;
moléculas
 Sequenciamento de DNA
 Determinação da fonte de contaminação de alimentos; celulares.
 Rastreamento de micro-organismos nas indústria de
alimentos.

DEFINIÇÕES CÉLULA BACTERIANA

 Isolado: cultura pura de bactéria, derivado de um único organismo  Cromossomo – molécula de DNA de fita dupla extremamente longa, geralmente circular; contem
os elementos genéticos.
 Cepa, subtipo: isolado ou grupo de isolados que pode ser diferenciado de outro isolado de
mesma espécie por características fenotípicas e/ou genotípicas  Plasmídeo – molécula de DNA de fita dupla relativamente pequena e em geral circular.
 Grupo clonal (clones): isolados geneticamente relacionados; isolados que são indistinguíveis por
testes genéticos ou que são muito similares
 Gene: é a unidade de transmissão hereditária formada por um fragmento de DNA de um
cromossomo, responsável pela codificação de uma proteína, que irá condicionar um caráter
 Genótipo: conjunto de genes do indivíduo, que ele recebe de seus pais, podendo ser transmitidos
para seus descendentes
 Fenótipo: características específicas do caráter analisado, que é determinado pelo genótipo
(genes) e fatores que influenciam na expressão dos genes
 Fenótipo = genótipo + o meio ambiente

Wiedmann, 2002. Subtyping of bacterial foodborne pathogens. Nutrition Reviews, v.60, n.7, p.201-208.

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EUCARIOTOS VÍRUS

GENOMA  ÁCIDOS NUCLEICOS

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ÁCIDO
DESOXIRRIBONUCLEICO
Ligações químicas na cadeia de DNA
Observe as extremidades 5'-
fosfato e 3'-OH, que conferem
direcionalidade à cadeia; as
ligações fosfodiéster entre os
nucleotídeos e as ligações
glicosídicas entre os açúcares e
as bases nitrogenadas.

Curvas de absorbância a 260 nm de soluções de DNA

submetidas à elevação da temperatura. A Tm varia de ÁCIDO RIBONUCLEICO
acordo com a composição GC% ou AT% do DNA
(Tm3>Tm2>Tm1).
 Formação da cadeia do RNA

 Região que codifica a proteína com os

códons de início e término da tradução
 UTR: região não traduzida

 m7G: metil-7-guanosina (5' CAP)

 A(~200): cauda de poli(A).

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Os principais tipos
de RNA
1. mRNA: transfere a informação
genética do DNA aos
ribossomos (síntese das
proteínas) - 1 a 5% do RNA
total.
2. rRNA: componente majoritário
dos ribossomos - 75% do RNA
total.
3. tRNA: transporta os resíduos de
aminoácidos até os ribossomos
para a síntese das proteínas - 10
a 15% do RNA total.

GENES GENES
PROCARIOTOS
 Sequência de DNA que inclui todas as sequências de
nucleotídeos que levam à síntese de um produto (mRNA
para a síntese de proteína ou outros). Inclui as regiões
codificantes e as reguladoras.
 Genes estão orientados de 5’- 3’, cuja sequência estará
representada no mRNA. A outra fita de DNA,
complementar à codificadora é a fita molde para a síntese
do RNA.
 O RNA portanto tem a mesma orientação e sequência da fita de Esquema representativo da
DNA codificadora. estrutura e da expressão de um
gene procariótico que codifica uma
proteína

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GENES
EUCARIOTOS

Esquema representativo da estrutura e

da expressão de um gene eucariótico
que codifica uma proteína.

REPLICAÇÃO: A SÍNTESE DE DNA

 A replicação está baseada no pareamento das bases da dupla hélice do DNA.

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RNAP
TRANSCRIÇÃO: A SÍNTESE DE RNA 1. reconhecem e se ligam à sequências
específicas de DNA;
 A transcrição é o processo pelo qual são sintetizados todos os RNAs 2. separam a hélice dupla do DNA,
expondo a sequência de
celulares. nucleotídeos a ser copiada;
 Esse processo conecta a informação presente na sequência de bases no 3. mantêm as fitas de DNA separadas
genoma (genótipo) com as características funcionais da célula (fenótipo). na região de síntese do RNA;
4. mantêm estável o híbrido DNA-RNA
 A transcrição é um dos principais processos em que ocorre a regulação da na região de síntese;
expressão gênica, definindo quais genes ou sequências serão transcritas, 5. renaturam o DNA na região posterior
quando esta expressão ocorre e quais as quantidades de produtos serão à da síntese;
produzidas. 6. sozinhas ou com o auxílio de
 A falha na transcrição de um determinado mRNA provoca a ausência da proteína por proteínas específicas, terminam a
ele codificada e poderá causar alterações na célula. síntese do RNA.

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TRANSCRIÇÃO: A SÍNTESE DE RNA

• As sequências específicas na molécula de DNA, que determinam o local de
formação dos complexos e iniciam a transcrição, são denominadas
promotores.
• Existem diferenças básicas e fundamentais na definição de promotor em
procariotos e eucariotos. Nos procariotos o promotor é o conjunto de
sequências do DNA onde o complexo RNAP se liga para iniciar a
transcrição, ao passo que em eucariotos o promotor é o conjunto de
sequências do DNA onde os fatores de transcrição gerais (TF) se ligam para
posicionar a RNAP para o início da transcrição. Em eucariotos a RNAP não
se liga diretamente as sequências de DNA do promotor, isso só ocorre após
a ligação de alguns TFs ao promotor.

TERMINAÇÃO DA TRANSCRIÇÃO
DEPENDENTE DA PROTEÍNA RHO

Rho (46kDa, ativa como hexâmero) move-se ao longo do

RNA acompanhando a RNA polimerase

Com a pausa da RNA polimerase na sequência de terminação,

Rho alcança a enzima

Rho desenrola o híbrido RNA-DNA

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TRANSCRIÇÃO: EUCARIOTOS PROCESSAMENTO DO mRNA

 Inserção do “5’ Cap
(1) evitar que o RNAm seja
degradado antes que seja
traduzido
(2) auxiliar em sua tradução
 Cauda poli(A) 3’
 Remoção de introns
 Splicing
 mRNA maduro

TRADUÇÃO: A SÍNTESE DE PROTEÍNAS

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TRADUÇÃO

ESQUEMA SIMPLIFICADO DO DOGMA CENTRAL

EUCARIOTO PROCARIOTO

https://pediaa.com/what-is-the-difference-between-prokaryotic-and-eukaryotic-mrna/

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qPCR
Sequenciamento

PCR
PFGE, RFLP, AFLP

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