MINISTÉRIO DA EDUCAÇÃO

SECRETARIA DE EDUCAÇÃO PROFISSIONAL E TECNOLÓGICA

INSTITUTO FEDERAL DE EDUCAÇÃO, CIÊNCIA E TECNOLOGIA
DO TOCANTINS
CAMPUS AVANÇADO PEDRO AFONSO
CURSO DE ENGENHARIA AGRONÔMICA

Disciplina: Microbiologia

Curso: Engenharia Agronômica

Professora: Julia Trugilio Lopes

Data: 06/09/2022

Acadêmicos: Manuela da S. Barros e Maria Neta R. Vanderlei

RELATÓRIO AULA PRÁTICA

(COLORAÇÃO DE GRAM)

Pedro Afonso – TO

Setembro de 2022
Introdução:

A coloração Gram ou Gram é uma técnica de diferente coloração de

microrganismos através de cores, que serão adquiridos por corantes externos, para
serem analisados em microscópio, sendo desenvolvido pelo médico dinamarquês
Hans Christian Joachim Gram (1853-1938), em 1884, o qual permite diferenciar
bactérias com diferentes estruturas de parede celular a partir das colorações que
estas adquirem após tratamento com agentes químicos específicos.

O método consiste em tratar sucessivamente um esfregaço bacteriano, fixado

pelo calor, com os reagentes cristal violeta, lugol, etanol-acetona e fucsina básica. E
essa técnica recebeu o nome devido os seus descobrimentos, hans gram, que foi
verificado que as bactérias após serem tratadas com diferentes corantes, recebia
diferentes colorações e classificou-as como positivas que são quando acontece a
coloração azul violeta, e já as negativas são quando ficavam Vermelhas. E essa
diversificação ocorre por causa da espessura de camada de peptidoglicano das
bactérias.

Objetivo:

O objetivo desta prática foi mostrar a principal diferença das bactérias de

acordo com as características da parede celular e morfologia geral, além de
identificar se o crescimento bacteriano será gram-positivo ou negativo.

Material e método:

O método da coloração de Gram é baseado na capacidade das paredes

celulares de bactérias Gram-positivas de reterem o corante cristal violeta no
citoplasma durante um tratamento com etanol-acetona enquanto que as paredes
celulares de bactérias Gram-negativas não o fazem.

A coloração de Gram é um dos mais importantes métodos de coloração

utilizados em laboratórios de microbiologia e de análises clínicas, sendo quase
sempre o primeiro passo para a caracterização de amostras de bactérias.

Os materiais que são necessários para que seja feita a realização e

identificação da coloração de gram são: Lamina histológica; conta gota; placa de
petri; água destilada; bateria de corantes para gram (Violeta Genciana para gram,
lugol fraco seg. gram, álcool acetona seg. gram, fucsina fenicada de gram);
lamparina; Alça de platina; lâminas para preparação do esfregaço e placa de petri
com crescimento bacteriano.

Nesta aula identificamos a bactéria gram, utilizamos uma placa de petri onde
residia a bactéria, durante o processo foi realizado o processo de coloração da gram
para que pudesse ser observada com o uso do microscópio e assim fizemos a
observação da estrutura.

Para a visualização da bactéria com coloração, será necessário que a lâmina

de vidro esteja limpa, com álcool e algodão, após aplicar uma gota de água
destilada sobre a lâmina, realizar o recolhimento do crescimento bacteriano, com o
auxílio de uma alça de inoculação, que antes estivesse esterilizada, após suspender
o crescimento na gota de água destilada, espalhando até obter uma esfregação fina.

A fim de obter a coloração, será necessário cobrir o esfregaço bacteriano

com cristal violeta, por um minuto e após lavar levemente com água para remover o
excesso da solução genciana, em seguida cobrir o esfregaço com solução lugol por
volta de um minuto, a lavando como no processo anterior, logo após irá decorar o
esfregaço utilizando uma solução de álcool acetona, por um período de dez a
quinze segundos, lavado após o álcool, cobrir o esfregaço com fucsina, e deixar por
trinta segundos, lavar com água corrente, e que seja seca com papel absorvente, e
por fim que seja colocado uma gota de óleo de imersão sobre o esfregaço corado,
assim possibilitando a visualização no microscópio, com o auxílio do objetiva 100x.

Materiais Utilizados: Corantes

Resultado e discussão:

Após a realização dos procedimentos necessários, e a visualização do

esfregaço bacteriano no microscópio, foi possível averiguar que a coloração
presente no esfregaço apresentava um tom mais rosado de cor, assim foi possível
identificar a sua coloração como sendo gram-negativo, pois apresenta coloração
mais rosada em vez de azul violeta.

Com a observação do esfregaço foi possível identificar que o esfregaço que

acabou por apresentar uma coloração mais avermelhada, na bactéria em questão
foi possível observar que a bactéria apresenta uma grande quantidade de esporos e
muitas hifas sendo a grande maioria dessas hifas presentes de características
septadas, além de que a coloração, que adquiriu na visualização, foi um vermelho
mais marcante em comparação com os critérios para ser considerada gram-
negativa.

Coloração Completa
Conclusão:

Com base nesses objetivos concluímos que a identificação da gram foi

realizada com sucesso, além da identificação de após a realização dos métodos
com o auxílio dos materiais, foi visualizado com o auxílio do microscópio que as
bactérias apresentaram coloração bastante semelhante a cor vermelha, muito
diferente da azul violeta, assim sendo o esfregaço bacteriano foi de gram-negativas.

Referências bibliográficas

Técnica de Gram. Santa Catarina:Provida provendo soluçoes preservando vidas,

Disponivel em:<http://www.provida.ind.br/site/index.php/bacterias/bacterias/122-
tecnica-de-gram.html#:~:text=Resumindo%2C%20as%20bact%C3%A9rias
%20Gram%20positivas,ou%20menos%20rica%20em%20peptidoglicanos.>. Acesso
em 06 de Set. 2022