COLORAÇÃO DE GRAM

Gisele Milka Aureliano | Microbiologia

coloração de Gram é um passo muito importante na
caracterização e classificação inicial das bactérias

pois permite que as bactérias sejam visualizadas no

microscópio óptico, uma vez que sem a coloração é
impossível observá-las ou identificar sua estrutura.
 O método de coloração de Gram recebeu esse nome em
homenagem ao patologista dinamarquês Hans Christian
Joachim Gram que realizou a descoberta em 1884 e até hoje
continua sendo a mais utilizada nos laboratórios de análises
clínicas e microbiologia. Através da coloração é possível
identificar e diferenciar os dois principais grupos de bactérias,
sejam Gram-positivas ou Gram-negativas.

 princípio da coloração gram

O procedimento de coloração de Gram permite que as bactérias

retenham a cor com base nas diferenças nas propriedades químicas
e físicas da parede celular.

O uso dos corantes permite aumentar o contraste e evidenciar a

estrutura bacteriana.
 Diferença entre gram positivas e gram negativas

As bactérias Gram-positivas retém o cristal violeta devido à presença de uma

espessa camada de peptidoglicano (polímero constituído por açúcares e
aminoácidos que originam uma espécie de malha na região exterior à
membrana celular das bactérias) em suas paredes celulares, apresentando-se
na cor roxa.
Já as bactérias Gram-negativas possuem uma parede de peptidoglicano mais
fina que não retém o cristal violeta durante o processo de descoloração e
recebem a cor vermelha no processo de coloração final.

 GRAM POSITIVAS

Bacillus, Nocardia, Clostridium, Propionibacterium, Actinomyces,

Enterococcus, Cornyebacterium, Listria, Lactobacillus, Gardnerella,
Mycoplasma, Staphylococcus, Streptomyces, Streptococcus.
 GRAM NEGATIVAS

Escherichia, Helicobcater, Hemophilus, Neisseria, Klebsiella,

Enterobacter, Chlamydia, Pseudomonas, Salmonella, Shigella
 técnica

1. Cubra o esfregaço com violeta-de-metila e logo após deixe por aproximadamente 15 segundos;
2. Adicione igual quantidade de água sobre a lâmina coberta com violeta-de-metila e então deixe
agir por mais 45 segundos;
3. Escorra o corante e lave em um filete de água corrente; Cubra a lâmina com lugol diluído (1/20) e
deixe agir por aproximadamente 1 minuto;
4. Escorra o lugol e lave em um filete de água corrente;
5. Adicione álcool etílico (99,5º GL) sobre a lâmina; descorando-a, até que não desprenda mais
corante;
6. Lave em um filete de água corrente;
7. Cubra a lâmina com safranina e deixe agir por aproximadamente 30 segundos;
8. Lave em um filete de água corrente;
9. Deixe secar ao ar livre, ou seque suavemente com o auxílio de um papel de filtro limpo;
10. Visualize no microscópio. Logo após leia em objetiva de imersão (100 X).

técnica
 importância

Por meio da coloração de Gram é possível determinar o tipo

de tratamento que será seguido .
 antibacterianos
são fármacos aptos a inibir o crescimento bacteriano
(bacteriostáticos) ou até mesmo extermina-las (bactericidas).

Possuem como alvo, as células bacterianas, mas quando no

organismo
3 também podem interagir com as células do
paciente, podendo gerar efeitos colaterais.
 antibacterianos

As bactérias gram negativas são as mais resistentes ao

tratamento, exigindo antibacterianos de amplo aspecto,
por possuírem uma parede celular delgada, formada por
poucos peptidoglicanos. Contam com uma pressão
3
osmótica interna de 5 a 10 atm e ao microscópio têm
coloração avermelhada.
 antibacterianos

As gram positivas apresentam parede celular espessa, e

maior prevalência de peptidoglicanos. Contam com uma
pressão osmótica de 20 a 30 atm, a qual quando o fármaco
promove uma abertura na membrana plasmática, facilita
3
a destruição mais acelerada e ao microscópio têm
coloração roxa. Os antibacterianos atuam nos
peptidoglicanos, logo estes são mais eficazes nas
bactérias gram positivas.
 antibacterianos

3
 classificação
antibac terianos
Quanto a natureza:
• Antibióticos, sendo as substâncias naturais produzidos a partir do
metabolismo secundário de organismo vivos. Sintetizados por fungos
filamentosos (penicilina) e bactérias (bacitracina).
3
• Semissintéticos são derivados da manipulação molecular de
antibióticos naturais objetivando aumentar a capacidade de inibição e/ou
redução da toxicidade. Exemplos: cefalosporinas de 1°, 2°, 3° e 4° geração.
• Sintéticos são produzidos exclusivamente através de síntese química.
Exemplo: quinolonas.
 classificação
antibac terianos
Quanto ao espectro de ação
• Amplo espectro: inibem o crescimento populacional de bactérias
indistintamente, sendo muito potente. Exemplo: clorafenicol, tetraciclina,
gentamicina, macrolideos e ampicilina.
3
• Ação sobre Gram positivas: detém maior seletividade por este grupo.
Exemplos: Penicilinas, cefalosporinas, eritromicina e vancomicina.
• Ação sobre Gram negativa: possuem atividade predominante sobre
esses. Exemplos: Colinistina e polimixina.
 classificação
antibac terianos
Quanto ao efeito biocida/biostático
Bactericida: apto a promover alterações irreversíveis nas bactérias, ou
seja, destroem a estrutura das mesmas. Utilizados em pacientes
hospitalizados, imunocomprometidos, infecções graves, entre outros
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fatores em que o estado geral imunológico não está bem.
 classificação
antibac terianos
Quanto ao efeito biocida/biostático
Bacteriostáticos: modulam a atividade da síntese de proteínas ou DNA,
mantendo a bactéria retida numa fase do ciclo. Utilizado quando o
paciente se encontra imunocompetente, tais como em casos de
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conjuntivite.
 antibiograma
É uma ferramenta muito útil na otimização do uso de
antimicrobianos.

Através do exame, é possível identificar o perfil de sensibilidade

de bactérias
3 a determinados antibióticos.
Essa é uma vantagem grande, considerando a resistência a
antibióticos que vem crescido constantemente nos últimos
anos.
 antibiograma
a escolha do antimicrobiano se torna muito mais eficaz no
combate à doença, pois terá como resultado esperado, o
antibiótico que irá inibir o crescimento microbiano e que será o
indicado no tratamento da infecção.
3
Ao ser identificada a bactéria ou fungo ao que o paciente se
encontra exposto, o Teste de Sensibilidade a Antimicrobianos
(TSA) ganha a sua importância clínica.
 antibiograma
Através dele é possível conhecer o perfil microbiano, ou seja, a
qual medicação ele é resistente ou sensível.

Com essas informações, a equipe médica é capaz de realizar um

plano terapêutico muito mais eficiente no combate bacteriano.

Além de interromper a colonização bacteriana e suprimir a

progressão da doença, também deve-se evitar uma resistência
antibacteriana importante.
 antibiograma
É fundamental orientar o seu paciente sobre não fazer uso de
antibióticos sem a prescrição profissional.
OBRIGADA!