Coloração de Gram

AGRESSÃO E DEFESA
AGRESSÃO E DEFESA

Objetivos
• Entender como funciona e a importância o método de
coloração bacteriológico
• Conhecer as diferenças das estruturas entre as bactérias
• Analisar algumas das principais bactérias de importância
clínica
Por que usar o
método de Gram?
Método originalmente criado pelo médico
dinamarquê em 1884, Hans Christian Joachim
Gram, e ainda hoje é usado como uma das
etapas iniciais para análise de espécies
clínicas. Esse método permite classificar as
bactérias em dois grupos, Gram positivas e
Gram negativas, baseando-se na coloração que
adquirem após todo o processo.
Ademais saber se um paciente está
colonizado por uma bactéria Gram positiva
ou negativa é importante pois, orienta a
escolha de antimicrobianos para o seu
tratamento, já que esses dois grupos
bacterianos apresentam perfis de
sensibilidade e mecanismos de resistência
bem diferentes.
 COLORAÇÃO DE GRAM
Como é feita
a técnica?
1) Cobrir toda a lâmina com solução cristal violeta (corante roxo),
aguardar um minuto;

2) Lavar rapidamente em água destilada ou escorrer o corante;

3) Cobrir a lâmina com solução de Iugol (mordente) por um minuto;

4) Lavar em água destilada ou escorrer o lugol;

5) Inclinar a lâmina e gotejar álcool-acetona ou álcool absoluto (cerca de

30 segundos).

Lavar a lâmina rapidamente em água corrente ou escorrer o álcool;

6) Cobrir com fucsina de gram e aguardar 30 segundos;

7) Lavar a lâmina em água destilada e secar (sem esfregar);

8) Colocar uma gota de óleo de imersão sobre a lâmina e observar em

objetiva de

Foto retirada do Google imersão (100X).

Por que ocorre a
coloração?

A coloração no método de Gram depende Essa camada de peptideoglicano consiste

da ligação dos corantes às camadas de numa cadeia de dissacarídeos
Peptideoglicano presentes na parede entrelaçada por pontes peptídicas,
celular das bactérias. formando uma cobertura rígida para a
bactéria
 Gram Positiva
• Possuem espessa camada de peptideoglicano e
ácido teicóico.
• Durante a fase de diferenciação, após o uso do
álcool- cetona, a parede da Gram positivas é
desidratada e poros da espessa camada de
peptideoglicano são estreitados.
• Dessa forma o corante roxo (CVI) é aprisionado
no interior dessas bactérias.

Foto retirada do Google

 Gram Negativa
• Possuem uma fina camada de peptideoglicano
( composta por lipoproteínas, fosfolipídeos,
proteínas e lipopolissacarídeos) e uma externa
membrana fosfolipídica.
• Dessa forma, ao aplicar o diferenciador, sua
membrana externa é dissolvida e a fina camada
de peptideoglicano fica porosa
• Por fim a bactéria não consegue reter o
complexo, levando a sua descoloração.

Foto retirada do Google

Exemplo gram positiva:
Bacillus, Nocardia, Clostridium,
Propionibacterium, Actinomyces,
Enterococcus, Cornyebacterium,
Listria, Lactobacillus,
Gardnerella, Mycoplasma,
Staphylococcus, Streptomyces,
Streptococcus.
Exemplo gram negativa: Exemplo não se coram:
Escherichia, Helicobcater, Existem algumas espécies que se
Hemophilus, Neisseria, coram muito mal pelo método de
Klebsiella, Enterobacter, Gram, como a Treponema pallidum, a
Chlamydia, Pseudomonas, espiroqueta causadora da sífilis. Pois
Salmonella, Shigella. possui um corpo muito fino, o que
dificulta sua visualização e
caracterização ao microscópio óptico
Bibliografia
• Ribeiro, M. C.; Soares, M. M. S. R.; Microbiologia prática:
roteiro e manual; Atheneu; 1993; 5-8pp.
• Pelczar Jr, M. J.; Chan, E. C. S.; Krieg, N. R.; Microbiology:
concepts and applications; McGrawHill; 1993; 75-76 pp.
• SALVATIERRA, C.M. Microbiologia - Aspectos morfológicos,
bioquímicos e metodológicos. São Paulo: Érica, 2014. Cáp. 3,
p. 18 - 39.

Odontologia 2° período| Caroline Martins de Andrade