Microbiologia Básica

Esmaile Sales
 MICROBIOLOGIA
• Classificação:

 Vírus, viróides e príons

 Procariotos – bactérias e arqueobactérias

 Eucariotos – fungos, protozoários

 PROCARIOTOS X
EUCARIOTOS
Características Procariótica Eucariótica

DNA circundado por uma membrana

Não Sim
nuclear
Divisão mitótica Não Sim
Organelas membranosas Não Sim
Tamanho do ribossomo 70 S 80 S

Parede celular contendo peptidoglicano Sim Não

 VÍRUS
 Partícula contendo molécula de ácido nucléico (DNA
ou RNA) envolta por uma camada de proteína ou
capsídeo (desnudo ou com envoltório)
 Muito pequenos (nm) – visíveis somente ao
microscópio eletrônico
 Parasitas intracelulares obrigatórios

Dependem de um hospedeiro
para a replicação
 VÍRUS

 Proteínas do capsídeo (glicoproteínas) – definem a

interação entre o vírus e sua célula hospedeira
 Capsídeo – protege o ácido nucléico e facilita a ligação e
penetração do vírus na célula
 Vírion – partícula viral completa
- ácido nucléico: fita simples ou fita dupla
- capsídeo: proteínas com característica
simétrica (icosaédrica ou helicoidal)
 VÍRUS
 Maturação – organização do ácido nucléico e das
subunidades protéicas recém-sintetizadas em
partículas virais maduras são liberadas.
 Podem infectar uma variedade de hospedeiros:
- procariotos
- fungos
- plantas
- animais
 PRÍONS
 São mais simples que os vírus e os viróides
 Agente infeccioso de natureza protéica
 Sua proteína (PrP) é codificada pelo DNA
cromossômico do hospedeiro
 Doenças em humanos – Kuru, insônia familiar fatal
 Encefalopatia espongiforme bovina
 BACTÉRIAS
Organismos unicelulares, procariotos, encontrados
na forma isolada ou em colônias
Dimensão: 0,2µm a 5,0µm – podem ser observadas
em microscopia óptica
Apresentam DNA e RNA, não envoltos por
membrana nuclear (procariotos)
Apresentam parede celular composta de um
carboidrato complexo: peptideoglicano
Elas sobrevivem, crescem e se dividem em
temperaturas entre 0ºC e 50ºC
fatores deVirulentia

o
o

o
 PRINCIPAIS CARACTERÍSTICAS
DIFERENCIAIS

Procariontes
• DNA disperso no citoplasma
• Cromossomo circular e
geralmente 1 por célula
• Ausência de organelas
• Parede celular complexa
composta de peptideoglicano
• Formação de endósporos por
algumas espécies
• Divisão por fissão binária
• Ribossomo 70S
Eucariontes
• DNA no núcleo verdadeiro -
membrana e nucléolos
• Cromossomo linear e
geralmente mais de 1 por
célula
• Presença de organelas
• Parede celular simples de
composição variada
• Ausência de endósporos
• Divisão por mitose
• Ribossomo 80S
 A CÉLULA PROCARIÓTICA

Regiões

Apêndices Envelope Celular Citoplasma

Cápsula Cromossomos
Flagelos
Parede celular Plasmídeos
Fímbrias
Membrana Ribossomos
Pili ouPilos
sexual Plasmática Inclusões
 TAMANHO/FORMA/ARRANJO

TAMANHO
•0,1 a 3,0 µm de
diâmetro

•2 a 8 µm de
comprimento
 BACTÉRIAS
 Apresentam vários formatos
 Substâncias Poliméricas
Extracelulares

• Quem produz?

• Gram-Positivos
• Streptococcus pneumoniae

• Bacillus sp.

• Gram-Negativos
• Klebsiella pneumoniae

• Haemophilus influenza
 Cápsula
• Mais estudada das SPE

• Composta (basicamente) por polissacarídeos

• Raramente contém aminoaçúcares ou peptídeos

• Presente na maioria das células procarióticas

• Bactérias Capsuladas e Acapsuladas

• Relacionada à virulência
• Aumento da capacidade invasiva –
S. pneumoniae, S. mutans
 Cápsula - Funções

• Aderência a superfícies ou tecidos

• Proteção
• Desidratação, anticorpos, bacteriocinas e fagocitose
• Proteção contra alguns antimicrobianos

• Pode servir como reserva de carbono e energia

 Cápsula

Colônias de B. anthracis

Tinta da China
Coloração específica para visualização da cápsula
 Cápsula

Colônia de S. pneumoniae

Coloração específica para visualização da cápsula

 Flagelos

• Principais estruturas responsáveis pela locomoção

• Longos apêndices filamentosos ligados à superfície
celular
• 20 nm de espessura e 15-20μm de comprimento

• Formados por três partes

• Filamento externo espiral - flagelina
• Gancho - junção flexível
• Corpo basal
 Flagelos - Arranjos

Monotríquio Peritríquio

Lofotríquio Anfitríquio
 Flagelos - Movimentos

• Nado ou Corrida

• Motilidade
• Quimiotaxia e Fototaxia

• Movimentos ondulatório

• Movimentos rotatórios
 Flagelos

• ± 50% dos bacilos e todas as bactérias espirais são

móveis

• Pouquíssimos cocos são móveis

• Adaptação a ambientes secos

 Fímbrias e Pili

• Geralmente mais curtas e delicadas do que os flagelos

• Mais comum em bactéria Gram Negativas

• Constituída da proteína pilina

• Em geral, não estão relacionadas à motilidade

 Fímbrias e Pili - Funções

• Aderência bacteriana: Neisseria gonorrhoeae;

Escherichia coli enterotoxigênica e S. pyogenes
• Pili K88 e K99 (E. coli diarréia em suínos)

• Pili P e Tipo 1 (E. coli UPEC, E. coli DAEC)

• Pilus do Tipo IV (V. cholerea, P. aeruginosa, Salmonella
enterica, EPEC, EHEC, Neisseria gonorrhoeae, N. meningitidis)
Fímbrias e Pili - Funções
 PAREDE CELULAR

• Estrutura presente na imensa maioria das células

procarióticas e ausente em células eucarióticas

• Protege a célula do dano mecânico, ruptura osmótica e

faz a manutenção da forma. Atividades do sistema de
transporte. Alta concentração de solutos dissolvidos.
FORMA e RIGIDEZ
• É um dos principais locais de ação dos antimicrobianos
 PAREDE CELULAR

• Atua na aderência da célula bacteriana

• Faz distinção imunológica entre as cepas

• Composta por peptideoglicano→ Mureína

• Polímero de dissacarídeos ligados por ligações

cruzadas
• Gram Positivas x Gram Negativas –
diferenças na estrutura da parede
 PAREDE CELULAR -
peptideoglicano
• Camada rígida - polissacarídeo
• Mureína
Diferenças entre Bactérias Gram-
positivas e Gram-negativas
Esmaile Sales
Mais espessa , consistindo
quase que totalmente em
um único tipo de molécula

Muticamadas e bastante
complexa
 PAREDE CELULAR

90% corresponde a peptideoglicano

G+

Substâncias
ácidas
Bactérias sem parede celular
 Permeabilidade a pequenas moléculas

Polissacarídeo O G-
Lipídeo A

Parede Celular
Peptideoglicano (10%)
 Parede Celular - Gram
Negativas

Polissacarídeo O → Antígenos e são uteis na identificação de diferentes sorovares

Lipídeo A → Endotoxina tóxica na corrente sanguínea ou no trato gastrointestinal

Escherichia coli O157:H7

 Membrana Externa

• Porção Externa G-
• Lipopolissacarídeo (LPS) e Fosfolipídeos

• Endotoxina
• Ativa macrófagos a
produzir pirogênios

• Induz inflamação
• Ativa fatores de
coagulação
Salmonella, Shigella e
Escherichia
 Membrana Externa
• A membrana externa protege a célula da
fagocitose e da penicilina, lisozima e outras
substâncias químicas;
• O componente lipopolissacarídeo da
membrana externa consiste de açúcares
(polissacarídeos O) e de lipídeo A, que é uma
endotoxina
 Membrana Externa

• Porinas - proteínas que permitem às

moléculas pequenas passar através da
membrana externa;
• Proteínas específicas permitem que outras
moléculas não se movam através da
membrana externa
 Coloração de Gram

• 1884 - Hans Christian Joachim Gram

• Procedimento de coloração classificando as bactérias em
dois grandes grupos

• Baseado na diferença da parede celular

• Retenção ou não do corante cristal violeta na camada

de peptideoglicano

Quem retém é positivo Quem não retém é negativo, após

G+ G- tratamento com álcool
 Coloração de Gram -
Técnica
1. Confeccionar o esfregaço
2. Secar ao ar e fixar em chama
3. Cobrir a lâmina com cristal violeta por 30 segundos a 1 minuto
Coloração do peptideoglicano
4. Lavar em água corrente
5. Cobrir a lâmina com lugol por 2 minutos
Fixação do corante
6. Lavar a lâmina
7. Descorar rapidamente com álcool-acetona
8. Lavar a lâmina
9. Cobrir com safranina ou fucsina diluída de Gram por 30 segundos
Coloração de fundo (contra-corante)
10. Lavar a lâmina com água, secar e ler ao microscópio
 Coloração de Gram -
Técnica

1 - 2 min 30 s
30 s - 1 min Fixação do Coloração de Fundo
Coloração do corante Contra-Corante
peptideoglicano
 ESTRUTURAS INTERNAS À PAREDE
CELULAR
• Membrana Citoplasmática

• Citoplasma

• Ácido Nucleico

• Ribossomos

• Corpúsculos de inclusão

• Endósporos
 Citoplasma
• Porção fluida da célula
• Nele encontram-se todas as estruturas responsáveis
pelo crescimento e funcionamento

• Nucleotídeos e Água

• Proteínas e DNA

• Ribossomos

• Aminoácidos, açúcares, vitaminas, coenzimas

Ácido Nucleico - Genoma

± 4 milhões de
pares de base
DNA cromossomal

DNA plasmidial

Várias cópias com

milhares de pares
de base
Extração de
DNA genômico
 Ácido Nucleico - Genoma
• DNA Cromossomal
• Molécula circular de DNA de fita dupla que contém os genes
essenciais para o funcionamento da célula bacteriana

• Ligado a várias proteínas formando o nucleóide

 Ácido Nucleico - Genoma
• DNA Plasmidial
• Molécula circular de DNA extracromossômico, auto-replicável,
responsável pela codificação de características especiais não
essenciais para a célula
• Resistência bacteriana

Plasmídeo pCF10 de E. faecalis

Substância de Agregação Asc10
• Mediação da agregação celular,
• Adesão às células hospedeiras
• Resistência à morte pelos
macrófagos
 Ribossomos

• Complexos de proteínas e RNA ribossomal (rRNA)

• Estrutura 70S
• Subunidade 30S e 50S
• S: Unidade Svedberg Velocidade de sedimentação

Principal função

• Síntese Proteica a partir de 20 aminoácidos

• Sítio de tradução do RNA mensageiro (mRNA)
 Endósporo

• Alguns gêneros produzem o endósporo para se

protegerem do ambiente hostil
• Células Dormentes - metabolicamente inativas, mas
diferenciadas que exibem extrema resistência ao calor, produtos
químicos fortes e radiação.

• Bactérias ESPORULADAS
• Bacillus sp., Clostridium sp.
 Endósporo – Estágio latente de um
ciclo de vida
Célula vegetativa Condições desfavoráveis Endósporos

Condições favoráveis

Célula com plena Célula

Atividade metabólica dormente