Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia do Amazonas – IFAM

Campus Manaus Centro

Departamento de Química, Ambiente e Alimentos – DQACurso Técnico Integrado em
Química
Disciplina de Técnicas e Análises MicrobiológicasProf. Dr. Anderson Paulo

Relatório da Aula Prática nº6

Discentes: (Grupo F) Ana Vitória Freitas da Silva, Ellis Fernanda de Souza Balieiro,
Emanuelle Monteiro Matos, Kamylla Geovanna Ferreira Villaça, Letícia Elvira
Nascimento de Lima e Mariana Achão Cabral

Título da aula: Técnicas de Coloração de Gram

Série/turma: 1º ano – IQUI11

Data: 10/09/2022

Manaus, abril de 2022

1. INTRODUÇÃO

Nesta aula, será realizado a utilização do método da coloração de Gram, que é baseado na
capacidade das paredes celulares de bactérias Gram-positivas de reterem o corante cristal violeta
no citoplasma durante um tratamento com etanol-acetona enquanto que as paredes celulares de
bactérias Gram-negativas não o fazem.
A coloração de Gram é um dos mais importantes métodos de coloração utilizados em
laboratórios de microbiologia e de análises clínicas, sendo quase sempre o primeiro passo para a
caracterização de amostras de bactérias. A técnica tem importância clínica uma vez que muitas
das bactérias associadas a infecções são prontamente observadas e caracterizadas como Gram-
positivas ou Gram-negativas em esfregaços de pus ou de fluidos orgânicos. Essa informação
permite ao clínico monitorar a infecção até que dados de cultura estejam disponíveis. É possível
a análise de vários esfregaços por lâmina, o que facilita a comparação de espécimes clínicos. As
lâminas podem ser montadas de forma permanente e preservadas como documentação.
A técnica de Gram, é um
método de coloração de
bactérias desenvolvido para
iferenciar bactérias com
diferentes estruturas de parede
celular a partir das colorações
que estas adquirem após
tratamento com agentes
químicos específicos. O
método consiste em tratar sucessivamente um esfregaço bacteriano, fixado pelo calor, com os
reagentes cristal violeta, lugol, etanol-acetona e fucsina básica. As bactéricas que adquirem a
coloração azul violeta são chamadas de Gram-positivas e aquelas que adquirem a coloração
vermelho são chamadas de Gram-negativas.
A coloração de Gram recebeu este nome em homenagem a seu descobridor, o médico
dinamarquês Hans Cristian Joaquim Gram. Em 1884, Gram observou que as bactérias
adquiriram cores diferentes, quando tratadas com diferentes corantes. Isso permitiu classificá-las
em dois grupos distintos: as que ficavam roxas, que foram chamadas de Grampositivas, e as que
ficavam vermelhas, chamadas de Gram-negativas

Manaus, abril de 2022

 OBJETIVOS

• Realizar os procedimentos de coloração de Gram.

2. MATERIAIS e MÉTODOS

MATERIAIS:

• Lâminas ;
• óleo de imersão;
• lamínulas;
• alça de platina;
• bico de Bunsen;
• tubo contendo solução com água esterilizada e corante: cristal de violeta.
• Violeta dilenciana ,solução discorante foxina fericada

PROCEDIMENTOS:

Preparar esfregaços a partir de culturas de bactérias.

1. b- Corar os esfregaços pelo método de coloração de Gram.

2. c- Observar ao microscópio óptico, sob imersão e identificar a morfologia destes
microrganismos e sua reação frente ao método de Gram.

4) Preparo do esfregaço:

a- Pegar uma lâmina limpa no recipiente, secar e flambar rapidamente na chama do bico
de Bunsen;
c-Flambar a alça bacteriológica deixá-la esfriar e colocar na lâmina uma gota de solução
salina fisiológica;
d- Flambar a agulha bacteriológica, deixar esfriar próximo a chama, abrir a placa com a
cultura teste e tocar a colônia para retirada da amostra, e esfregar o material com
movimentos de rotação da alça bacteriológica, para se obter um esfregaço de forma oval,
bem fino e uniforme;
f- Deixar secar nas proximidades da chama;

Manaus, abril de 2022

 g- Fixar o esfregaço passando a lâmina (lado oposto ao esfregaço) 5 vezes na chama do
bico de Bunsen (rapidamente).

5) Método de Coloração de Gram:

1) Cobrir toda a lâmina com solução cristal violeta (corante roxo), aguardar um minuto;
2) Lavar rapidamente em água destilada ou escorrer o corante;
3) Cobrir a lâmina com solução de lugol (mordente) por um minuto;
4)Lavar em água destilada ou escorrer o lugol;
5) Inclinar a lâmina e gotejar álcool-acetona ou álcool absoluto (cerca de 30 segundos).
Lavar a lâmina rapidamente em água corrente ou escorrer o álcool;
6) Cobrir com fucsina de gram e aguardar 30 segundos;
7) Lavar a lâmina em água destilada e secar (sem esfregar);
8) Colocar uma gota de óleo de imersão sobre a lâmina e observar em objetiva de imersão
(100X).

Manaus, abril de 2022

• RESULTADOS

As colorações ocorreram de forma correta, em que as bactérias gram positivas

apresentaram precisamente a coloração violeta. Observou- se que na utilização de álcool na
lavagem das lâminas, as células desidratam e o corante permanece dentro, sendo assim fácil e
possível a visualização da bactéria no microscópio óptico pois sem a coloração não seria
possível a visualização da mesma.

Manaus, abril de 2022

3. CONCLUSÃO

A aula demonstrou a grande importância na utilização de técnicas de coloração de Gram,

que consiste na preparação de um esfregaço em lâmina de vidro para microscopia, de
preferência da porção mais purulenta/sanguinolenta da amostra. Sendo assim, houve grande
importância do conhecimento do conceito e das técnicas para que houvessem os melhores
resultados.
Portanto, a coloração de Gram é um muito importante para caracterizar e classificar as
bactérias, visto que facilita a visualização. Afinal, só é possível visualizar os microrganismos
no microscópio óptico, se for utilizada uma coloração (corante), e a preparação adequada
depende do organismo a ser estudado, uma vez que sem a coloração é impossível observá-las
ou identificar sua estrutura. Sendo assim, essa técnica é usada principalmente para identificar a
morfologia das bactérias ou para descobrir se há um número significativo de bactérias nas
amostras laboratoriais.

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