AGRUPAMENTO DE ESCOLAS CIDADE DO ENTRONCAMENTO

170586
Escola Secundária Com 3º Ciclo do Entroncamento

12º Ano - Biologia Ano Letivo 2022-2023

ACTIVIDADE LABORATORIAL: Observação de bactérias coradas pelo

método de Gram

Introdução:
A coloração de Gram, desenvolvida em 1884 pelo médico dinamarquês Christian
Gram, é um dos métodos de coloração mais aplicados em Bacteriologia. Trata-se
de um método de coloração diferencial, dado que permite dividir as bactérias em
duas classes - Gram negativas e Gram positivas. É uma ferramenta essencial na
classificação e diferenciação de bactérias.

Proposta de trabalho experimental

Coloração de Gram e observação microscópica das células de bactérias presentes

num iogurte (cultura mista das bactérias Lactobacillus bulgaricus e Streptococcus
thermophilus)

Procedimento experimental

1. Homogenizar o iogurte com uma vareta;

2. Preparar um esfregaço, espalhando uma gota de iogurte homogeneizado sobre
uma lâmina de vidro previamente desengordurada com xilol. Secar ao ar;
3. Desengordurar o esfregaço, cobrindo-o com xilol durante 1 minuto. Secar ao ar;
4. Fixar o esfregaço desengordurado, cobrindo-o com álcool etílico a 95% , durante
5 minutos. Secar ao ar;

5- Corar a preparação pelo método de Gram;

5.1 -Cobrir o esfregaço da cultura em estudo (previamente fixado à lâmina de

vidro) com a solução de violeta de genciana. Deixar actuar durante 1 minuto.

Docente Maria Lucinda Ribeiro Mendes Pá gina 1

 5.2-Escorrer o corante e lavar com água. Secar com papel de filtro, sem esfregar.

5.3- Cobrir a preparação com  soluto de lugol e deixar actuar durante 1 minuto.

5.4- Escorrer a solução de Lugol, lavar com água, escorrer e secar com papel de

filtro.

5.5-Diferenciar pelo álcool a 90°, deixando cair a solução de álcool gota a gota

sobre a preparação até que não saia mais corante.

5.6- Tornar a corar a preparação, durante 5 minutos, com uma solução de

safranina ou fucsina básica. Escorrer o corante, lavar com água e secar com papel

de filtro.

6 - Observa no microscópio óptico de campo claro, com a objectiva de imersão (x 100),

não esquecendo colocar uma gota de óleo de imersão entre a preparação e a objectiva.

7 – Faz um esquema legendado das bactérias observadas. Analisa e discute os

resultados

BOM TRABALHO Professora Lucinda Mendes

Docente Maria Lucinda Ribeiro Mendes Pá gina 2

BACTÉRIAS DO YOGURTE CORADAS ATRAVÉS DO MÉTODO DE GRAM

Docente Maria Lucinda Ribeiro Mendes Pá gina 3