TÉCNICAS DE COLORAÇÃO

(SIMPLES, GRAM E ZIEHL-

NEELSEN)

Prof.: Marília Torres

Disciplina: Introdução à Microbiologia
 COLORAÇÃO DE GRAM

MÉTODO:

1. ESFREGAÇO - Os esfregaços devem ser preparados

com um gradiente de espessura suficientemente denso
para facilitar a visualização, mas, também, bastante
esparso para revelar as características do
agrupamento. Utilizar, de preferência, lâminas limpas
e novas.

2. FIXAÇÃO DO ESFREGAÇO - Todo o esfregaço, antes

de ser submetido a coloração, deverá estar seco
(exposto ao ar), sendo fixado com calor.
 COLORAÇÃO DE GRAM

COLORAÇÃO

a) Cobrir a área com a solução de cristal-violeta por cerca de 1 minuto.

b) Decantar o cristal-violeta e lavar suavemente com água da torneira.

Nota: Lavagem excessiva nesta etapa pode causar a retirada do cristal
violeta das células Gram-positivas.

c) Cobrir a área do esfregaço com a solução de iodo (Lugol) durante

cerca de 1 minuto.
 COLORAÇÃO DE GRAM

COLORAÇÃO

d) Descorar a lâmina com a mistura

álcool-acetona (1:1), até que o
solvente escorra incolor. Alternar
com água corrente (jato fraco). O
tempo usualmente utilizado nesta
etapa é de cerca de 10 segundos.

Nota: Lavagem excessiva nesta etapa pode

causar a retirada do cristal violeta das
células Gram-positivas, assim como, a
pouca descoloração pode resultar em pouca
retirada do cristal violeta, ocasionando
uma tonalidade azulada nas bactérias
Gram-negativas.
 COLORAÇÃO DE GRAM
COLORAÇÃO

e) Cobrir o esfregaço com a solução de Safranina (ou Fucsina básica

0.1% a 0.2%), por cerca de 30 segundos

f) Lavar com água corrente.

g) Deixar secar ao ar
 COLORAÇÃO DE GRAM

Técnica de GRAM (resumo)

1. Cobrir lâmina com cristal violeta

(1 min)
2. Escorrer o excesso do corante e
lavar
3. Cobrir a lâmina com Lugol (1
min)
4. Escorrer excesso e lavar.
5. Cobrir a lâmina com álcool-
acetona (10 s)
6. Escorrer o excesso e lavar
7. Cobrir a lâmina com fucsina (30
s)
8. Escorrer o excesso do corante,
lavar de deixar secar.
COLORAÇÃO DE GRAM
COLORAÇÃO DE GRAM
 LINK – TÉCNICA DE COLORAÇÃO DE
GRAM

https://www.youtube.com/watch?v=mF3jAU6Dy4I&t=70s
 COLORAÇÃO DE ZIEHL-
NEELSEN

• A coloração de Ziehl-Neelsen é uma técnica de fácil

execução, muito útil e importante para o diagnóstico
clínico das micobacterioses e se fundamenta na
propriedade tintorial que têm as micobactérias de
quando coradas resistirem ao descoramento por
soluções álcool-ácido

• É um método para pesquisa de bacilos álcool ácidos

resistentes (BAAR). Se coram inicialmente pela
carbofucsina e resistem a uma descoloração por álcool-
ácido.
 COLORAÇÃO DE ZIEHL-NEELSEN

1. No material suspeito, observar o aspecto, coloração e

presença ou não de sangue.

2. Na lâmina limpa e desengordurada, fazer o esfregaço

do material com bastante assepsia, retirando a alçada da
porção mais densa.

3. Flambar a alça.

4. Deixar o esfregaço secar ao ar.

5. Fixar na chama do Bico de Bunsen.

 COLORAÇÃO DE ZIEHL-NEELSEN

6. Cobrir a lâmina com fucsina de Ziehl concentrada,

aquecendo a lâmina até a emissão de vapores (5
minutos).

7. Escorrer o corante e lavar com a solução álcool-ácido a

3% (diferenciador) – tempo delicado.

8. Lavar com água

9. Cobrir a lâmina com solução de azul de metileno (1

minuto)

10. Lavar, secar e observar ao microscópio com objetiva

de imersão, óleo de cedro e iluminação forte.
COLORAÇÃO DE ZIEHL-NEELSEN
COLORAÇÃO DE ZIEHL-NEELSEN
COLORAÇÃO DE
ZIEHL-NEELSEN
 ASPECTOS TINTORIAIS E
MORFOLÓGICOS

Neisseria meningitidis – Streptococcus Streptococcus mutans Mycobacterium

Diplococos Gram - pneumoniae Cocos Gram + tuberculosis
Cocos Gram + BAAR

Corynebacterium
Treponema pallidum Bordetella pertussis – Staphylococcus spp.
Cocos Gram + diphtheriae
Espiroquetas Gram - Cocobacilos Gram -
Bacilos Gram -
BONS ESTUDOS!