UNIVERSIDADE FEDERAL DE PELOTAS

Microbiologia e Imunologia

GUIA DE
AULAS PRÁTICAS

Júlia Freire Danigno

Prova Prática 13/02/2014
 Práticas de Laboratório

Antes de qualquer coisa fazer ANTISSEPSIA da bancada e das mãos com Alcool ou Alcool
Iodado.
Utilizar sempre a chama para manipular e nada vir para ti.

Meios de Cultura
- Fonte de C – como glicose
- Fonte de N – como proteínas
- Sais Minerais – como Na/Cl/K

Meios de Cultura Sólidos – Ágar

Isso é um ágar

Meios de Cultura Líquidos – Caldo

Isso é um caldo

Ps: Só formam COLÔNIAS em ÁGARS!

SWAB – É um cotonete esterilizado

Isso é um Swab
 Coloração de Gram

Divide as bactérias em gram Positivas e gram Negativas.

Positivas se coram em violeta

Negativas em rosa ou vermelho
Cocos e Venonella são maioria positivos.
Bacilos são negativos.

Passos da Coloração

1º) Cristais Violeta (1min – lava)

Cora tudo de roxo.

2º) Lugol (1min – lava)

A base de iodo, é mordente. Intensifica o roxo.

3º) Álcool-acetona (20s - lava)

É a etapa que diferencia.
Nas gram positivas só tira os CV da superfície.
Nas negativas tira todo o CV .
Fica tudo descolorido.

4º) Fucsina Diluída (30s – lava)

Se colorem positivas em roxo e negativas em rosa.

Por que a gram negativa não continua corada pelo cristal violeta?
Quando vc coloca álcool acetona sobre uma gram negativa, ocorre emulsificação dos lipídios da
sua membrana externa, o que permite a retirada do cristal violeta. Logo a bactéria irá ficar
corada pela fucsina diluída (vermelho).
 Morfologia das bactérias

Bacilos Gram Negativos

São bacilos porque são esticadinhos.

NEGATIVOS porque estão em rosinha.

Exemplo:
Salmonella enterica

Como lembrar: Bacilo parece um cocozinho, salmonela dá dor

de barriga.

Bacilos Gram Positivos

São bacilos porque são esticadinhos.

POSITIVOS porque estão em roxo, bem mais escuro que os de
cima.

Exemplo:
Clostridium tetani

Como lembrar: é um bacilo enferrujado, dá tétano.

Cocos Gram Positivos

São bolinhas.
Positivos são roxinhos.

Exemplo: Staphylococcus

Como lembrar: Coco é o mais comum, e Staphylococcus é o

nome mais fácil de lembrar e tem coco nele.

Cocobacilo

Parece um coco achatado, ou um bacilo mais gordinho.

Espiroquetas

São em forma de espiral, parecem cobrinhas.

Exemplo: Treponema Paliddum

Como lembrar (proibido para menores de 18 anos): O que a

treponema dá é sifilis... porque ele pegou trepando, e trepar
na arvore é se enroscar em espiral.

Técnica: Impregnação por Sais de Prata – Método de Fontana-Tribondeau

Arranjos

Estafilococos (Ex: Staphylococcus aureos)...... Estreptobacilo (Ex:

É o cacho de uva........................................................... Streptobacillus penicilim)

Estreptococos (Ex: Streptococcus mutans)....... Diplococo

Cocos em corrente.
 Fontana-Trindodeau com Impregnação por prata (Brilha la Luna)

Serve para ver bactérias espiraladas.

Processo:
1. Esfregaço fino, seco a ar.

2. Cobrir os esfregaços com líquido de Ruge, remover após 1min. Lavar em

água corrente

3. Mordençar com solução de B, aquecer até emitir vapores.

4. Lavar com água corrente.

5. Cobrir com nitrato de prata e aquecer até emitir vapores, 2min.

Lavar.

Leptospiras são muito pequenas e finas, não são visualizadas em gram... por isso precisam dessa
outra técnica.

Ficam no sulco gengiva.

 Microbiota Residente x Microbiota Transitória

Microbiota Residente
É aquela que vive nas mucosas e pele, varia de acordo com os diferentes sistemas. Todos os
órgão que tem contato com o meio externo tem microbiota.

Microbiota Transitória
Adquirida por contato com o meio externo, não vive naquele lugar, tente a controlar os
patógenos.

DEGERMAÇÃO (água e sabão)

Rosa: Residente
Verde: Transitória

Degermação não diminui o número, diminui a

VARIABILIDADE.

ANTISSEPSIA (alcool)

Rosa: Residente
Verde: Transitória

Antissepsia continua os 2 tipos, só que diminui a carga

bacteriana. Diminu o número.
 Controle Físico – Suspensao de esporos

1 2 3

1 – Controle – é turvo porque tem bactérias

2 – FERVIDO POR 15 MINUTOS – não mata esporulados
3 – AUTOCLAVAÇÃO 21 GRAUS 1 ATM 15 MINUTOS – líquido transparente.
 TÉCNICA DE ESGOTAMENTO Em ÀGAR MITIS SALIVARIUS

Meio de Cultura: ágar mithis-salivarius

Meio seletivo para Strepto orais.
É fonte de C – glicose/sacarose, sais biliares e teburito de potássio, além de
AZUL TRIPAN

Técnica de Esgotamento:
Obtém colônias isoladas.

Streotococcus são as bactérias mais importantes em formar biofilme.

MUTANS
Vidro quebrado, grande, fosco, azul claro. Principal espécie em biofilmes. Coloniza, forma
polissacarídeos, acidônico e acidúrico.

SALIVARUS
Gota de orvalho, azul ou marrom, parece uma tetinha. Dorso da lingua.

MITIS
Pequenas e azuis, causam endocardite.

ENTEROCOCUS
Infecções intestinais, são pretas e escuras.
 Teste de Snider

É qualitativo.
Avalia a capacidade acidônica e acidogênica das
bactérias.
“Estimar o número relativo de lactobacilos na saliva e para o
diagnóstico da atividade de cáries. A taxa de produção de
ácido em um meio contendo dextrose, por microorganismos
orais da cavidade bucal é evidenciada pela alteração na cor
do indicador. A taxa e o grau de alteração da coloração é
significante.

A bactéria cariogênica consome carboidrato, ocorre

mudança no pH do meio, e a consequente alteração na
cor.”

ACIDOGÊNICA
Fermenta carboidratos
ACIDÚRICA
Viver em baixo PH.

Verde: sem cárie, ph5.

Amarelo: forma cárie, vira ácido, + Lactobacillus e Streptococcus.

Teste de Aderência

Com a utilização de antissépticos.

“Características:

• Toxicidade: deve atacar os microorganismos

• Permeabilidade: não deve penetrar nos tecidos, deve atuar somente no biofilme.
• Não deve agredir a microbiota normal no indivíduo e deve ter substantividade: efeito
prolongado.”

Avalia a aderência e formação do bifilme.

1) TUBO CONTROLE: opaco, bactérias se aderem e forma biofilme.

2) TUBO CLOREIDINE: opaco, se adere ainda e forma biolme.
3) TUBO PLAX: não se adere, não fica opaco.
 Técnica de Zieh-Neelsen

A Técnica de Ziehl-Neelsen é uma técnica de coloração de bactérias mais agressiva que a

técnica de Gram. Ela é usada em bactérias que coram mal com o Gram, como os bacilos da
Lepra e da tuberculose, entre outros - MICOBACTÉRIAS

A técnica de Ziehl-Neelsen evidencia a ácido-álcool resistência

1) Cobrir a lâmina com fucsina fenicada (o

mordente é o ácido fénico);
2) Aquecer a lâmina até à emissão de vapores
(é importante não deixar ferver);
3) Aguardar 5 a 8 minutos;
4) Lavar com água corrente;
5) Cobrir a lâmina com álcool-ácido 3% até
descorar totalmente o esfregaço;
6) Lavar com água corrente;
7) Cobrir a lâmina com azul de metileno
durante 1 minuto;
8) Lavar com água corrente;

Lembrar que a FUCSINA NÃO é DILUIDA como na de Gram, é FENICADA.