Uma Introdução às…

Técnicas de Trabalho em Microbiologia

Investigar… O quê? Onde? Como?

Aceite para publicação em 25 de Outubro de 2013.

Investigar… O quê?
O que são os microrganismos? E a microbiologia?
A microbiologia é um ramo da Ciência que tem por objetivo o
estudo dos microrganismos, seres vivos invisíveis a olho nu.

(20µm)
(400x)
(1000x)

Bactérias Leveduras (Reino Fungi)

Domínios Archaea e Bacteria Domínio Eukarya

(100x)
Bolores (Reino Fungi)
Domínio Eukarya
Algas
Domínio Eukarya

(400x)
Investigar… Onde?
Onde se encontram os microrganismos?

Água Solo Ar
Quais as consequências da atividade dos microrganismos?

Uns deterioram os alimentos e/ou Outros são utilizados pelo Homem…

causam doenças….
Que condições são necessárias para o estudo dos microrganismos?

É necessário…
1. Evitar que os microrganismos em estudo
contaminem os investigadores e o meio.
2. Evitar que os microrganismos do ambiente
contaminem as culturas e/ou o local de trabalho.
Que condições deve apresentar um laboratório de microbiologia?

O laboratório deve estar subdividido em diferentes zonas, permitindo

um trabalho sequencial e reduzindo o risco de contaminação.

Zona de Lavagem/ Descontaminação

Bancadas de Trabalho
Investigar… Como?
Como se poderá estudar a quantidade e diversidade de
microrganismos de uma amostra?

MAS…

Se os microrganismos
A utilização do forem colocados num
microscópio requer meio com as condições
experiência e tempo! necessárias ao seu
desenvolvimento,
multiplicam-se,
formando colónias
visíveis!
Meio de Cultura: Preparado, sólido ou líquido, de composição apropriada,
esterilizado, que permite, in vitro, o desenvolvimento de microrganismos.

RBC Cada microrganismo origina

uma colónia, que já pode ser
PCA
observada a olho nu.

Bactéria
Esporo de um bolor
Desenvolvimento
Multiplicação das das hifas em todas
bactérias. as direções.
Os meios de cultura devem ser adequados ao tipo de microrganismos que
se pretende estudar, existindo meios seletivos, isto é, específicos para
determinados grupos.
RBC

PCA

Rose-Bengal Chloramphenicol Agar

(RBC): Meio seletivo para fungos. Plate Count Agar (PCA):
Meio não-seletivo, que permite o
desenvolvimento de bactérias e fungos,
apesar de ser mais favorável às primeiras.
 Etapas (um possível percurso…)
1. Preparação e Esterilização do
Meio de Cultura/ Materiais

2. Preparação das Amostras

(realização de diluições, se necessário)

Sementeira por
riscado
3. Inoculação

Sementeira por
espalhamento
4. Incubação em Estufa
 .
Em microbiologia é fundamental a esterilização dos meios de cultura e
materiais. Só assim é possível prevenir contaminações!

Para preparação prévia do material…

Incineração: Queima direta do material pelo fogo (lamparina/

Bico de Bunsen).

Esterilização de uma ansa à chama do bico de Bunsen.

Chamejamento com álcool: Queima do álcool presente num material.

Chamejamento de um espalhador de vidro.

Esterilização pelo ar quente (calor seco): Para material resistente a altas
temperaturas (vidros/ metais).

Alternativa… Estufa de um laboratório escolar

Forno Pasteur
Material preparado para ser esterilizado: Utilização de
cilindros metálicos, papel de Kraft ou outros materiais.

Utilização adequada de materiais esterilizados…

 Esterilização pelo calor húmido sob pressão: Para materiais sensíveis a
altas temperaturas: meios de cultura, soluções, borrachas e plásticos.

Alternativa… Panela de pressão

de um laboratório escolar

Autoclaves de diferentes dimensões

Na atividade laboratorial…

Deve desinfectar-se a
bancada com álcool, antes O trabalho deve ser feito nas proximidades de uma chama,
e depois da sua utilização. recorrendo-se ao bico de Bunsen ou lamparina.

Os tubos de ensaio e restantes

recipientes devem estar
devidamente protegidos de
contaminações a partir do exterior.
Que cuidados ter com os meios de cultura esterilizados
acondicionados em placas de Petri?

Os meios de cultura esterilizados e A identificação das placas deve ser

acondicionados em placa de Petri devem ser feita no fundo, antes da inoculação.
conservadas no frigorífico.

As placas com meio de cultura inoculado devem

As placas a usar só devem ser abertas ser incubadas em estufa na posição invertida, à
nas proximidades de uma chama. temperatura e durante o tempo adequados.
Como reduzir a quantidade de microrganismos de uma amostra de
forma a possibilitar a sua quantificação?
Para a obtenção de colónias bem isoladas a partir de uma amostra com elevada
carga microbiana, recorre-se ao método das diluições decimais sucessivas.

1mL da 1mL 1mL 1mL

amostra

9 mL de
diluente 10-1 10-2 10-3 10-4
Inoculação das caixas de Petri com 0,2 mL de
inóculo de cada uma das diluições efetuadas,
seguida de incubação à temperatura adequada.

Diluição 1:10 (10-1) Diluição 1:100 (10-2) Diluição 1:1000 (10-3) Diluição 1:10000 (10-4)
 O que fazer após a incubação das placas?

1) Descrição das características das colónias

 Forma, margem, elevação, coloração…

2) Contagem do número de colónias:

 Para posterior cálculo do número de UFCs por determinada
quantidade de amostra, tendo em conta as diluições realizadas e a
quantidade de amostra ou diluição inoculada.
 Contagem das Colónias

Nas condições ideais…

Em aula…

Contador de Colónias: Apresenta uma

superfície iluminada, com uma grelha que
facilita a contagem e uma lupa. Contagem direta na placa.
 Não te esqueças que existem microrganismos
causadores de doenças, pelo que todo o trabalho deve
ser feito com uma atenção redobrada, para evitar
contaminações!

O material utilizado deve ser adequadamente descontaminado,

recorrendo-se a tratamentos térmicos (autoclave) ou a soluções
desinfectantes adequadas.

Por exemplo: Recipiente com solução

desinfectante, para colocação imediata das pipetas
contaminadas.
Dezembro de 2013
Ficha Técnica
Autora: Ana Isabel dos Santos Rebelo
Professora, Agrupamento de Escolas de Aljustrel
Revisão Científica:
Professora Maria Teresa Gonçalves dos Santos
Instituto Politécnico de Beja - Escola Superior Agrária
Realizado no âmbito do Curso Profissional de Técnico de Processamento e
Controlo da Qualidade Alimentar (11.º Ano)
Ano Letivo 2012/ 2013
Uma parceria: