Anotações Microbiologia Giuliana Mileny

Aula 1: 09/06/22
A microbiologia estuda os microrganismos, organismos microscópicos unicelulares
que podem formar colônias de até 10 milhões de células individuais. Esses possuem
todas as funções para manterem-se vivos, como reprodução, motilidade, crescimento,
nutrição e defesa. São as bactérias, arqueias, fungos e protozoários (e vírus), que
possuem potencial biotecnológico para produção de antibiótico e alimentos.
Prática 1: Apresentar os principais conceitos de biossegurança e familiarizar com os
materiais e métodos do laboratório de microbiologia.
Aula 2: 15/06/22
Origem da vida: O organismo mais simples possível chama-se Procarioto
Hipotético, que possibilitou a análise de que todos os seres vivos compartilham de
estruturas em comum para manterem-se vivos:
 Molécula autorreplicantes para transmissão de instruções químicas fazendo
com que “a vida aconteça”, como a duplicação do dna;
 Envoltório que delimita e separa a célula do meio definindo o organismo, como
a membrana plasmática;
 Estruturas moleculares que garantem o funcionamento da célula, como as
enzimas.
Os primeiros seres vivos na Terra foram as bactérias fototróficas anoxigênicas, pois
não havia oxigênio disponível para formação de aeróbicos. Isso só mudou quando o
metabolismo de algumas dessas bactérias passou a produzir O2 como subproduto, que
por outro lado causou uma pressão seletiva para os seres anaeróbicos, por conta da sua
reatividade e oxidação. Mesmo assim, as bactérias que sobreviveram, evoluíram através
de biomarcadores específicos. O Procarioto Hipotético, organismo mais simples, pode
ser chamado de LUCA(last universal common ancestor)e seus componentes foram os
mais adequados para a época, dando origem À 3 domínios: Arqueia. Bactérias e
Eucariotos.
As Bactérias, arquéias e fungos tem papel
central no estudo da microbiologia, estão em
(quase) todos os ambientes e possuem Grande
diversidade e adaptações para garantir sua
sobrevivência, por exemplo os extremófilos, que
vivem em ambientes adversos às formas de vida,
acidófilos, em habitats de ph muito ácido e
outros. A maioria dos organismos estão mais em
superfícies marinhas do que oceânicas pois nos
oceanos há pouca trofia, ou seja, poucos
nutrientes para alimentação.
Histórico da Microbiologia:
Robert hooke (Séc XVII): inventou o microscópio e deu a primeira
descrição de micro-organismos pegando um pedaço de pão com bolor e
observando as estruturas de frutificação (hélios).

antoni van leeuwenhoek (Séc. XVII): inventou o microscópio

portátil e observou pela primeira vez as bactérias, as menores
células microbianas.

As bases para a microbiologia surgiram a partir de duas questões: “A

geração espontânea acontece?” E “Qual é a natureza das doenças infecciosas?”.

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Louis Pasteur (Séc. XIX): estudou cristais de ácido tartárico e percebeu que
quando a luz polarizada atingia os cristais, a luz desviava pra esquerda ou
direita (formato L ou D). Também desenvolveu experimentos de
fermentação alcoólica e percebeu que era catalisada por leveduras, logo
pensou que Micro-organismos poderiam estar envolvidos até mesmo no
surgimento da vida em locais aparentemente sem vida, se tornando um oponente
poderoso à teoria da geração espontânea.
Com a Pasteurização, Princípios de
Pasteur foram adaptados para a
preservação do leite e muitos outros
alimentos por tratamento térmico.

Robert Koch (Séc XIX-XX):

Testou em camundongos o
Antraz, doença nos gados
causada por bactérias,
utilizando corantes específicos que identificavam esses agentes, comprovando
que um camundongo doente transmitia a doença para o sadio pois seus organismos eram
meios de cultura ricos em nutrientes. Também descobriu o agente causador da
Tuberculose, desenvolvendo uma metodologia de coloração em amostras pulmonares.
Foi fundamental para o estudo da origem das doenças infecciosas.

Alexsander Flemming (SÉC xix – xx): descobriu a penicilina observando

a área de inibição do crescimento bacteriano, ou seja, descobriu uma forma
de interromper esse crescimento criando o antibiótico.

Prática 2: Visualização das células microbianas por meio da coloração

de Gram.
A coloração de Gram é um método de coloração de bactérias desenvolvido por
Hans ChristianJoachim Gram, em 1884 e tem como objetivo diferenciar as bactérias de
acordo com as características de sua parede celular após exposição a diferentes corantes
e soluções. É importante para definir outras estratégias de identificação da espécie e
para que haja tratamento preventivo de acordo com as suas características.
1. Colocar colônias da bactéria na lâmina;
2. Passar rapidamente a lâmina pela chama para secagem;
3. cobrir com o corante cristal violeta e deixar agir por 1min;
4. Lavar a lâmina e cobrir com o lugol, que fixa o corante, e deixar agir por 1min.
Ambos os tipos de bactérias ficam azuis;
5. Lavar a lâmina e aplicar álcool 95%, deixando agir por 30s. O álcool vai
dissolver a membrana de lipídios formadora das gram-negativas, removendo o corante
e o lugol e descorando essas bactérias. No caso das gram-positivas, o álcool desidrata a
parede celular,tendo contração dos poros e as tornando impermeáveis;
6. Lavar a lâmina, cobrir com fucsina ou safranina e deixar agir por 30s;
7. lavar a lâmina e deixar secar. Depois, visualizar no microscópio o resultado.
As bactérias Gram-positivas retêm o cristal violeta pois tem uma
espessa camada de peptidoglicano em suas paredes celulares,
apresentando-se na cor roxa. Já as bactérias Gram-negativas possuem
parede de peptidoglicano mais fina que não retém o cristal violeta e
recebem a cor vermelha no processo de coloração final.

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Aula 3: 22/06/22
Microbiologia e aspectos moleculares da COVID-19: O pulmão é o principal
órgão afetado
nos estágios mais avançados, mais precisamente
nos alvéolos, que são como pequenos sacos de
ar revestidos por células tipo I(finas) e tipo II
(grossas), onde ocorrem as trocas gasosas.
Células do tipo I são finas o suficiente para
que o oxigênio passe direto. Células do tipo II
secretam o surfactante, uma substância que age
como se fosse um detergente, reveste o alvéolo
e impede o seu colapso - são o alvo da Sars-
Cov-2. e quando atingidas causam uma reação em cadeia de: trocas gasosas reduzidas,
infecção, redução de surfactante, geração de fluídos e aumento de permeabilidade.
Mas como o coronavírus interage com as células?
Assim que respiramos o vírus, as proteínas das espículas que o recobrem se ligam
aos receptores ACE2 em nossas
SARS-COV-2 células alveolares do tipo II,
fundindo-se a vesícula e liberando
seu RNA.
O Rna do vírus é traduzido em
proteínas, que o permitem se
multiplicar. Eles podem sair do nosso
corpo ou não. Quando permanecem,
nossos alvéolos ficam infectados,
liberando sinais inflamatórios para
recrutar organismos macrófagos,
células imunes que protegem e impedem o acúmulo de fluidos. Essas células recrutadas
liberam citocinas que causam a vasodilatação, permitindo que mais células imunes
cheguem ao local da lesão. Enquanto isso, o Vírus digerido reage com nossas Células
Apresentadoras de Antígeno (apc) que consomem essas partículas de vírus através de
enzimas reativas. Então, chegam as células T-auxiliares que “observarão” todas essas
partículas digeridas e permitirão mais respostas imunológicas de nosso corpo para a
proteína s do vírus (sua estrutura fundamental), comunicando-se com a Célula B. Essa
célula vai produzir os anticorpos necessários para ligar à proteína S e assim, “marcar” o
vírus para destruição. Por fim, as células T Citotóxicas identificarão essas partículas
marcadas e as destruirão.
As vacinas treinam as células B e T para facilitar todo esse processo de resposta ao
vírus, já que essas são de "memória" de longa duração que reconhecem o vírus e podem
patrulhar e imunizar o corpo por meses ou anos.

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Prática 3: Preparar diferentes meios de cultivo para contagem, isolamento e

identificação de micro-organismos (bactérias e fungos).
Em microbiologia, frequentemente, tem-se o interesse em isolar, quantificar ou
cultivar micro-organismos presentes nos mais diversificados ambientes. Para determinar
o método de cultivo adequado, é necessário definir qual micro-organismo específico ou
grupo de micro-organismos serão estudados, pois os meios de cultivos diferem
conforme a fisiologia e exigências nutricionais dos micro-organismos. Chamamos de
meio de cultivo ao conjunto de substâncias necessárias ao crescimento e multiplicação
dos micro-organismos de modo a “reproduzir” as condições naturais,

AULA 4: 29/06/22
Estruturas Celulares microbianas: Os seres procariotos possuem todos os pré-
requisitos para formação da vida e são mais de 99% dos organismos individuais.
Possuem uma variedade de formas e pequeno tamanho (extremamente menor em
relação a eucariótica).

A morfologia celular é um indicador inadequado das demais propriedades de uma

célula. A espécie de bactéria Epulopiscium fichelsoni pode medir até 0,6mm e são
encontradas no intestino dos peixes-cirurgiões (dori). Mas no geral, as bactérias são bem
pequenas, pois quanto menor o organismo, mais eficiente será a troca de massas com o
meio e melhor a capacidade de crescimento, de adaptação e evolução de forma rápida,
por exemplo, as células procarióticas haploides que permitem a expressão imediata de
mutações.

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ESTRUTURAS CELULARES:
 DNA;
 MEMBRANA CITOPLASMÁTICA: É extremamente fina e relativamente
fluída, formada por fosfolipideos (bi-camada lipídica), cuja principal função é a
permeabilidade seletiva. Podem ser mais rigidas se tiverem hopanoides.
EXISTE MODELO
ALTERNATIVO À
BICAMAda LIPIDICA?
SIM, Os lipídeos de arqueias
apresentam ligações éter,
diferentemente das bactérias e
eucariotos.
Funções da Membrana

Citoplasmática: ancoragem de proteínas, conservação de

energia (gerando polos positivos e polos negativos que auxiliam na produção de
energia), barreira de permeabilidade seletiva (quanto menor concentração de soluto
menor a entrada), sistemas transportadores de substâncias que atuam no metabolismo
energético e o efeito de saturação, que modula o tanto de transportadores para manter o
equilibrio polar.
 Parede Celular: Garante a resistência, forma e rigidez da célula. Muitos
antibióticos têm como alvo a sintese da parede celular, deixando a célula suscetivel È
lise. Os corantes podem ser utilizados para corar as células e aumentar o seu contraste
pois são compostos orgânicos com afinidade específica por determinadas partes da
célula. Vários corantes utilizados em microbiologia são carregados positivamente e
Corantes básicos se ligam fortemente aos constituintes celulares carregados
negativamente.
Nas bactérias Gram-negativas, a parede celular está composta por uma camada de
peptidioglicano e três outros componentes que a envolvem externamente; lipoproteína,
membrana externa e
lipopolissacarídeo.
A parede celular da bactéria
Gram-positiva é espessa e a da
Gram-negativa é menos espessa.
A parede celular da Gram-positiva
é única e consiste de uma camada
espessa, composta quase que
completamente por
peptídioglicano, responsável pela
manutenção da célula e sua
rigidez. As múltiplas camadas de
peptidioglicano das bactérias Gram-positivas constituem uma estrutura extremamente
forte em tensão, enquanto que nas Gram-negativas o peptidioglicano é apenas uma
camada espessa e, consequentemente, frágil.

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Alguns procariotos não possuem parede celular, como os Micoplasmas, bactérias que
sobrevivem mesmo que desprovidas de parede celular e vivem em hábitats
osmoticamente protegidos, como o corpo de um animal.
Prática 4: Isolar micro-organismos a partir das amostras coletadas no campus,
utilizando as técnicas de fragmentação da amostra, swab, homogeneização e diluição
seriada e spread-plate.
AULA 5: 06/07/22
Os seguintes componentes a seguir são opcionais:
 CÁPSULA: uma camada a mais de proteção, muito maior que a própria bactéria
e compostas de polissacarídeos. São excelentes a ajudar esses
organismos a aderirem À superfície e também os protegem do
meio para excluir a entrada de partículas ruins.
 CAMADA LIMOSA: é mais frouxa e é facilmente
deformável. Tem as mesmas funções que a cápsula e também
formam uma ligação extremamente forte, gerando um biofilme (matriz polimérica),.
Nos espaços dessa matriz há circulação de nutrientes e O2. por exemplo o tártaro
 ENDÓSPOROS: Protegem o Dna e garantem que os organismos permaneçam
intactos em extrema resistência ao calor, produtos químicos
fortes e radiação. Resistem a condições de crescimento
adversas, incluindo extremos detemperatura, dessecamento
ou carência nutricional.
 FIMBRIAS: oferecem capacidade de adesão, através de seus tentáculos
membranosos, incluindo tecidos animais de algumas bactérias patogÊnicas. Por
exemplo, Salmonella typhi.
 PILI: Estrutura para tranferência de informações genéticas: são tao finos que
precisam ser aderidos ao vírus para visualização no microscópio.
Também fazem adesão À superfície e o pili de tipo V realiza
motilidade pulsante.
 FLAGELOS: Realizam motilidade natatória,
permitindo que os organismos alcancem outras regioões,
favorecendo sua sobrevivência. Não são retos e são compostos por muitas flagelinas

(estrutura flagelar), por isso são helicodiais. A flagelina é uma proteína altamente
conservada, sendo uma das estruturas mais antigas. Os flagelos podem aumentar ou
reduzir seu movimento de acordo com a intensidade da força próton-motiva e são
seres com mais velocidade que leopardos.
A quimiotaxia é quando oorganismo percebe que está se movendo em direção a
concentrações
maiores do agente atrativo, as corridas tornam-se mais longas, e as oscilações, menos
frequentes. Na presença de um agente atrativo, os movimentos aleatórios passam a ser
tendenciosos. Essa informação sensorial é transmitida por quimirreceptores de
membrana, que eventualmente afeta a direção de rotação do motor flagelar.

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 Polímeros de armazenamento de carbono: são sintetizados pelas células quando

há um excesso de carbono. São clivados para uso como fontes de carbono ou energia se
precisar.
 Magnetossomos: guiam células aquáticas para baixo em direção aos sedimentos
onde as concentrações de O2 são menores.
 Vesículas de gás: é uma estrutura impermeável à água porém permeável ao gás.
Reduzem a densidade total da célula, consequentemente aumentando a sua
flutuabilidade.

MAS COMO TUDO ISSO É MONTADO E MANTIDO EM

FUNCIONAMENTO?
 Ribossomos: mantém o metabolismo através de proteínas. O ribossomo 70s é
completo pois une os ribossomos 50s com 30s e interagem com o DNA e RNA para
produzir as proteínas necessárias para o funcionamento da célula. Resumindo, os
ribossomos são fundamentais para o funcionamento celular e sobrevivência do
indivíduo.
Aula 6 – 13/07/2022
Crescimento e Nutrição microbiana
Um exemplo prático sobre a influéncia da temperatura na preservação dos alimentos,
é na forma que guardamos arroz na geladeira: embora a geladeira ajude na conservação
pois a temperatura de seu prefrigeramento é em torno de 0ºC e o crescimento bacteriano
em torno de 30ºC, as panelas de menos tamanho demoram menor tempo para atingir
uma temperatura mais baixa e consequentemente mais segura.
Em microbiologia,o termo “crescimento” refere-se ao aumento do número de
células pela divisão celular. Mas, diferente do que pensamos, essa divisão de células
não acontece indenifidamente ou infinitamente, pois se acontecesse, apenas uma célula
bacteriana seria capaz de gerar uma população 4 vezes mais pesada que a terra em 48
horas. Isso acontecesse pois o Crescimento é limitado pelas condições nutricionais do
meio, condições ambientais(temperatura, ph, umidade, agentes externos)características
genéticas e até mesmo por competição entre diferentes organismos.
Microbiólogos utilizam a fórmula N-No . 2n (No é o número de células no início e 2n
é o numero de gerações)para o cálculo do crescimento e muitas vezes representam esses
dados através da linearização em escala de log.
Em uma curva de crescimento típica de uma população bacteriana temos diferentes
fases:
1. LAG: Intensa atividade de preparação para o crescimento populacional, mas sem
aumento da população;
2. EXPONENCIAL: Aumento exponencial da
população microbiana;
3. ESTACIONÁRIA: Mesmo ainda tendo
nutrientes para o consumo, há um equilíbrio
garantindo que novas células sejam produzidas do
mesmo tanto que outras células são mortas.
4. MORTE: O equilibrio diminui lentamente, não
há mais matéria para o consumo pois ocorre a
acidificação,ou seja,gera um composto inutilizável por estes microrganismos.
Analisando como os leites estragam e deixam o sabor azedo, entendemos que as
bactérias do ácido lático crescem lentamente na temperatura da geladeira e rapidamente
À temperatura ambiente. Isso explica o porquê de não deixarmos leites para fora da

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Anotações Microbiologia Giuliana Mileny

geladeira e muito menos destampados. Mesmo assim, ainda há bactérias capazes de

crescer em temperaturas de geladeira, como os psicrófilos e psicotróficos.
Para observação do crescimento bacteriano, dissolvemos o material sólido
composto por esses seres vivos e acrescentamos à um caldo nutriente para deixar em
período de incubação. Depois disso, realizamos o esfregaço em uma lâmina e aplicamos
os corantes necessários para a visualização no microscópio.
Para quantificação do crescimento bacteriano fornecendo uma estimativa,
espalhamos este caldo nutriente diluído e incubado em meios sólidos (ágar), utilizando
as técnicas de spread plate e pour plate. É interessante aplicar o procedimento de
contagem de viáveis utilizando diluições seriadas da
amostra e o método de semeadura em profundidade. Cada “bolinha” observada nas
placas é uma ufc – Unidade formadora de colônia. Também possível medir o
crescimento microbiano pela turbidez usando espectrofoto-metria, cuja função é a de
medir e comparar a quantidade de luz (energia radiante) absorvida por uma determinada
solução.
Para quantificação do crescimento bacteriano fornecendo contagem individual
de células, utilizamos a câmera de neubauer, que possui pequenos quadrados gravados a
laser, e a citometria de fluxo, que analisa as características físicas e químicas de células
isoladas.
Como dito anteriormente, a velocidade do crescimento depende da temperatura, mas
não proporcionalmente como se +temperatura +crescimento. A temperatura não pode
ser minima, senão causa a gelificação da membra e impossibilita o crescimento, e não
pode ser máxima, pois causa o colapso da membrana citoplasmática por deixar a enzima
instável. Uma temperatura favorável é aquela que as reações enzimáticas ocorrem na
maior velocidade possível, que haja a manutenção de um equilíbrio apropriado entre
estabilidade molecular e flexibilidade estrutural das enzimas. Algumas precisam de
cofatores ou coenzimas para funcionar, pois são são carreadores transitórios de grupos
funcionais.
Prática 6: Observação macroscópica e microscópica de micro-organismos
Aula 7 – 20/07/2022
Crescimento Individual: a fissão binária em um procarioto bacilar acontece pois
tem organização bioquímica que permite a realização das seguintes
etapas: elongação celular  formação do septo finalização do septo;
formação de paredes;separação das células.
O mecanismo de divisão mais comum entre procariotos é esta fissão
binária, na qual a célula- mãe reparte seu genoma e conteúdo
citoplasmático de forma igual entre duas células filhas. Esse processo é
mediado por um complexo protéico especializado, chamado divisoma,
composto por cerca de 20 proteínas, que promovem a constrição da
parede celular e membrana citoplasmática, formando o septo de
divisão. O complexo é organizado em torno do anel ftsz, uma estrutura
composta pela proteína FtsZ e por outras 3 proteínas que são construídas
constantemente pelo divisomo (MinC, MinD e MinE). Este anel que comprime e
permite o “estrangulamento” da célula-mãe, já que a MinE faz o varrimento da MinD e
MinC, deixando-as apenas nos extremos da célula, fazendo com que os sistemas
celulares identifiquem que no centro não há o acumulo dessas proteínas, ou seja, um
local apropriado para o “estrangulamento” do anel ftsz.
Nas paredes celulares, assim que a célula é dividida e entra em contato com o
meio, já vai formando as camadas. Entretanto existem linhagens mutantes que não usam

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Anotações Microbiologia Giuliana Mileny

P.C, pois quando inativam os genes dessa parede, perdem seu formato (passam de
bastões bem definidos para circulos).
A replicação do genoma as vezes pega atalhos: pode se usar enzimas e/ou múltiplas
forquilhas de replicação que dobram a geração dessas bactérias, ou seja, 2 fissões
binárias ao mesmo tempo (exlusivo para procariotos)