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Curso Tcnico em Qumica

Disciplina: Microbiologia

Tcnicas de
Visualizao de microrganismos
Microscopia e tcnicas de
visualizao de microrganismos
PREPARAES PARA A MICROSCOPIA E TCNICAS DE
VISUALIO DE MICRORGANISMOS:

A perfeita visualizao dos microrganismos e/ou das suas


estruturas s possvel se, alm da escolha do tipo mais eficiente
de microscopia, a preparao estiver adequada.

A escolha do tipo de preparao depende da informao desejada e


do microrganismo a ser avaliado.
Microscopia e tcnicas de
visualizao de microrganismos
TCNICA A FRESCO:

clulas, pequenos organismos vivos ou fragmentos de tecidos


vivos meio lquido o mais prximo possvel do meio natural

Conservadores fisiolgicos

Naturais Artificiais
gua doce, gua do mar, soro fisiolgico, lquido de
humor aquoso, soro Ringer, lquido de Knop
sanguneo, lquido
amnitico
Microscopia e tcnicas de
visualizao de microrganismos
TCNICA A FRESCO:

Vantagem:
no produz modificaes na forma e funo
serve de contraprova para outros mtodos
rapidez

Restries:
objetos finos e transparentes
no permite observaes prolongadas
mostra parte dos detalhes das estruturas

Modo de preparo
lmina com lamnula
gota pendente
Microscopia e tcnicas de
visualizao de microrganismos
TCNICA A FRESCO:
Microscopia e tcnicas de
visualizao de microrganismos
TCNICAS FIXADAS E CORADAS:

Morfologia de clulas mortas

Etapas:

Esfregao Fixao Colorao

Simples ou diferencial
Microscopia e tcnicas de
visualizao de microrganismos
TCNICAS FIXADAS E CORADAS:

Colorao simples
Microscopia e tcnicas de
visualizao de microrganismos
TCNICAS FIXADAS E CORADAS:

Colorao diferencial Colorao de Gram

Escherichia coli Sthaphylococcus sp


Salmonella sp Clostridium sp
Shigella sp Pseudomonas sp
Enterobacteriaceae
Bactrias

Quanto a colorao de Gram:


Christian Gram (1884) classificou as bactrias em Gram-
positivas ou Gram-negativas;
Neste procedimento as bactrias so submetidas ao
de diferentes corantes e se coram de maneira diferente,
dependendo da parede celular.
Microscopia e tcnicas de
visualizao de microrganismos
TCNICAS FIXADAS E CORADAS:

Colorao diferencial Colorao de Gram

Violeta
30
Gram +:Violeta Gram - :Incolor

Gram +:Violeta Gram - :Rosa


Colorao de GRAM
Passar a lamina c/
esfregao por 3x

Ala sob a chama.

Fixao do
esfregao pelo
calor

Bactriasisolada Esfregao

Tcnicade GRAM

1. Cobrir lamina com cristal violeta e deixar por 1 min.

2. Escorrerexcesso do corante e lavar.


3.Cobrirlamina com Lugol e deixar por 1 min.
Proceder a colorao
4. Escorrerexcesso do corante e lavar. de GRAM

5.Cobrirlamina com Eter-acetona e deixar por 30s.

6. Escorrerexcesso do corante e lavar.

7.Cobrirlamina com Fucsina e deixar por 30s.


Fucsina
8 . Escorrerexcessodo corante, lavar e deixar secar.
Colorao de Ziehl-Neelsen
Passar a lamina c/
esfregao por 3x
Colnias de
sob a chama.
Micobactrias Usar capela de fluxo
laminar.

Fixao do
esfregao pelo
Esfregao calor
Meio de cultura
para
Micobactrias a) Cobrir os esfregao com fucsina de Ziehl. Aquecer at a emisso de
vapores (No deixar o corante secar). Esperar 5 minutos;
b) Lavar com gua corrente;
Resultado c) Descorar com lcool (97%), cido clordrico (1%);

d) Lavar em gua corrente; Proceder a colorao


e) Corar com azul de metileno por 1 minuto; de Ziehl-Neelsen

f) Lavar e secar;
g) Observar ao microscpio as lminas coradas;
h) Como se apresentam os BAAR.