RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA – BACTERIOLOGIA CLÍNICA

COLORAÇÃO DE GRAM E MICROSCOPIA 2023-1

Bárbara Márcia Marinho Silva - 2020065139

Introdução

A técnica de coloração de Gram, é uma técnica de coloração usada em microbiologia

para diferenciar bactérias com base nas propriedades de suas paredes celulares. Essa técnica é
amplamente utilizada na identificação bacteriana e é um procedimento simples que pode ser
realizado em laboratórios de microbiologia com equipamentos e reagentes básicos. A técnica
de coloração de Gram envolve a aplicação de uma série de corantes e soluções em uma
amostra de bactéria. As bactérias são inicialmente coradas com cristal violeta e, em seguida,
tratadas com uma solução de lugol. Após isso, as bactérias são submetidas a uma solução de
álcool-acetona, seguida por uma solução de fucsina básica. O resultado final é que as
bactérias são coloridas de maneira diferente com base em sua parede celular, permitindo que
sejam identificadas como gram-positivas ou gram-negativas. A técnica de coloração de Gram
é uma das técnicas de coloração mais importantes em microbiologia e é amplamente utilizada
na identificação bacteriana e na avaliação da eficácia dos tratamentos antibióticos. A
capacidade de diferenciar bactérias com base em suas paredes celulares ajuda os
microbiologistas a identificar com precisão as espécies bacterianas e a escolher o tratamento
antibiótico apropriado.

Objetivos

1. Aprender sobre a técnica de coloração de Gram, seus princípios e a

importância da diferenciação entre bactérias gram-positivas e gram-negativas.
2. Observar as características morfológicas das bactérias para visualização
de aspectos morfológicas, como sua forma, tamanho e arranjo, o que pode ajudar a
identificar diferentes espécies bacterianas.
3. Compreender a importância da identificação bacteriana e visualização
no microscópio óptico pode ajudar a entender a importância da identificação
bacteriana e como isso pode impactar na saúde pública.
4. Desenvolver habilidades técnicas de visualização no microscópio,
manipulação de amostras, preparação de lâminas e ajuste do microscópio...

Materiais e Métodos
Materiais:
• Lâmina de vidro
 • Bico de Bunsen ou fonte de calor
• Alça de platina ou haste de vidro esterilizada
• Corantes de Gram (cristal violeta, solução de lugol, álcool acetona, fucsina
básica)
• Microscópio óptico
Métodos:
• Preparação do esfregaço: Colete uma amostra da cultura bacteriana e espalhe
uma pequena quantidade em uma lâmina de vidro limpa e seca. Deixe a lâmina
secar ao ar livre.
• Fixação da amostra: Fixe a amostra na lâmina de vidro passando-a sobre a
chama do bico de Bunsen ou outra fonte de calor.
• Coloração primária: Cubra a lâmina com cristal violeta e deixe agir por 1
minuto. Lave com água corrente.
• Coloração de iodeto de potássio: Cubra a lâmina com solução de iodeto de
potássio e deixe agir por 1 minuto. Lave com água corrente.
• Decoloração: Cubra a lâmina com álcool-acetona e deixe agir por 30 segundos.
Lave rapidamente com água corrente.
• Coloração secundária: Cubra a lâmina com safranina e deixe agir por 1 minuto.
Lave com água corrente.
• Secagem: Seque a lâmina cuidadosamente, usando um papel toalha ou um
secador de cabelo na temperatura mais baixa.
Observe a lâmina ao microscópio com objetiva de imersão em óleo (aumento total de
1000x) para avaliar a presença e a coloração das bactérias. As bactérias gram-positivas
aparecerão em roxo, enquanto as bactérias gram-negativas aparecerão em vermelho/rosa.
Além disso, certifique-se de que a cultura bacteriana tenha sido incubada nas
condições adequadas, de acordo com as instruções do fabricante ou com as práticas padrão do
laboratório. Certifique-se também de que a lâmina esteja completamente seca antes de
observá-la no microscópio.
Resultados

• Lesão Cutânea
o Quantificação: Moderada
o Morfologia da bactéria: Cocos
o Reação tintorial: gram +
o Agrupamento: agrupadas (semelhando a cacho de uva)
o Elementos não bacterianos: muco e células epiteliais
 • Urina
o Quantificação: Raros
o Morfologia da bactéria:cocos
o Reação tintorial: gram +
o Agrupamento: isolados
o Elementos não bacterianos: muco; leucócitos.
• Hemocultura
o Quantificação: raros
o Morfologia da bactéria: bacilos
o Reação tintorial: gram +
o Agrupamento: aos pares, agrupados e isolados.
o Elementos não bacterianos: muco
• Líquido peritoneal
o Quantificação: numerosos
o Morfologia da bactéria: bacilos
o Reação tintorial: gram +
o Agrupamento: aos pares
o Elementos não bacterianos: muco
• Escherichia coli
o Quantificação: numerosos
o Morfologia da bactéria: bacilos isolados e pleomorfos
o Reação tintorial: gram -
o Agrupamento: isolados
o Elementos não bacterianos: 0

Discussão

Diante dos resultados obtidos durante a aula prática, com o auxílio do professor e do
técnico de laboratório nos auxiliando a cada passo, foi possível a realização da prática de
coloração de gram com a êxito, sendo possível uma ótima visualização no microscópio com o
campo limpo, sendo apenas as bactérias coradas de fácil identificação, sendo E. coli. Além
disso, durante o processo de visualização das lâminas já presentes no laboratório, houve
dificuldade para identificar as bactérias e suas morfologias ali presente, contudo, durante a
aula, com o auxílio do professor, a visualização e classificações também se tornaram mais
claras e corretas.
Referências

LABORCLIN. GRAM: coloração de Gram. [S.l.]: Laborclin, 2019. Disponível em:

https://www.laborclin.com.br/wp-content/uploads/2019/06/GRAM.pdf. Acesso em: 20 mar.
2023.

MARTINS, Luana Pereira; BERNARDO, Wellington Marques; TERRA, Fábio Silvestre

Ataíde. Microbiologia: em que consiste, características e utilidade da coloração de Gram.
PEBMED, [S.l.], 2019. Disponível em: https://pebmed.com.br/microbiologia-em-que-
consiste-caracteristicas-e-utilidade-da-coloracao-de-gram/. Acesso em: 20 mar. 2023.