Curso: Medicina Veterinária

Disciplina: Imunologia e Microbiologia

Docente: Cesarino Júnior Lima Aprigio
Discente: Manuela Fontinelle Farias

Coloração de Gram

É uma técnica que permite analisar forma, organização e agrupamento das bactérias.
Vantagens: método rápido e de baixo custo.

Foi desenvolvida em 1884 pelo bacteriologista Hans Christian Gram.

Com base na reação a coloração de Gram as bactérias podem ser divididas em 2 grupos principais:
• Gram positivo (+): Possui uma parede celular com espessa camada de peptidoglicano.
• Gram negativo (-): Possui uma camada de peptidoglicano delgada, e além disso possui uma
membrana externa com grande quantidade de lipídios. A diferença de reação a coloração deve-se à
diferença nas estruturas das bactérias.

Como a coloração de Gram é uma coloração diferencial, são empregados dois corantes contrastantes
que vão gerar cores diferentes em grupos bacterianos distintos
- Cristal violeta
- Lugol que atua como fixador
-Solução de álcool-acetona
-Fucsina

Passo a passo da coloração de gram

• Preparar o esfregaço que será corado.

• Material: suspensão de uma bactéria obtida no meio de cultura/amostra clínica.
• Esse material deverá ser espalhado por uma superfície de uma lâmina, que posteriormente é
deixada para secar e após um curto período de tempo realiza-se a fixação do esfregaço na lâmina
através do calor.
• Cobrir a lâmina com cristal violeta e deixar agir por um minuto.
• Nesta etapa as bactérias Gram (+) e Gram (-) são coradas em roxo ou violeta escuro.
• Após 1 minuto a lâmina é lavada com água.
• Esfregaço é coberto com Lugol por 1 minuto.
• Que vai agir fixando o cristal violeta dentro das células.
• Posteriormente o Lugol será lavado.
• Lâmina é decorada com álcool-acetona, removendo a coloração das bactérias gram negativa,
porém não das gram positivas, isso ocorre porque as bactérias gram positivas apresenta uma camada
espessa de peptidoglicano que atua como uma rede, que ao sofrer desidratação pelo álcool-acetona
fecha sua malha retendo o corante.
• Bactérias gram negativas a camada de peptidoglicano é muito delgada e a sua desidratação não é
suficiente para que ocorra o fechamento da falha, consequentemente ocorre o extravasamento do
corante.
• Ao final dessa etapa as bactérias gram positivo continuam coradas em roxo e as gram negativas se
tornam incolor.
• A lâmina é coberta com contracorante fucsina por 45 segundos.
• Como as bactérias Gram positivas retêm a cor roxa do cristal violeta, não são afetadas pelo
contracorrente e Fucsina
• Já as bactérias Gram negativas foram descorada, e nessa etapa serão coradas pela fucsina ficando
na cor rosa.
• Para finalizar o processo a lâmina é lavada secada com papel toalha ficando pronta para a análise.

• Deverá ser utilizada a objetiva de 100x com óleo de imersão.

• Alguns bacilos apresentam espaços não corados, principalmente na região terminal, que
corresponde ao local de formação do endoscópio que não é corado pela coloração de gram.
Uma boa metodologia de gram, deve mostrar bactérias gram positivas coradas de roxo, e que células
eucarióticas com o leucócitos, bem como população de bactérias gram negativas deve-se apresentar
na cor rosa. Entretanto, algumas falhas no procedimento podem afetar o resultado final da
coloração.