Lisa Ta

29 de fevereiro de 2012.
Biologia 240
Microbiologia Geral
MW 3:45-5:00

Relatório de Manchas de Gram

Introdução

O objetivo deste experimento é determinar a forma e a coloração de Gram das

bactérias sob um microscópio. A razão para a coloração de bactérias é devido ao
fato de que a maioria das bactérias são transparentes e não podem ser vistas
através do microscópio. A coloração de Gram é um tipo de coloração diferencial
que permite ao (micro)biólogo identificar as diferenças entre organismos e/ou
diferenças dentro de um mesmo organismo. A coloração de bactérias de Gram
requer o uso de técnica asséptica para garantir a esterilidade do experimento. O
objetivo da coloração de Gram é mostrar se as bactérias são Gram positivas (de
cor roxa), Gram negativas (de cor rosa) ou ambas.

Materiais e Métodos

Técnica asséptica foi utilizada durante todo o experimento. Uma gota de água
deionizada foi colocada em uma lâmina de microscópio e bactérias de número
desconhecido 20 também foram colocadas na lâmina. Em seguida, a lâmina teve
que ser seca ao ar antes de fixá-la pelo calor, para que a coloração de Gram
pudesse começar. O primeiro passo na coloração de Gram foi colocar a
coloração primária, Violeta de Cristal ou Azul de Metileno, na lâmina onde as
bactérias foram fixadas pelo calor. O corante teve que permanecer na lâmina por
cerca de um minuto antes de enxaguar com água deionizada e secar com
mancha. Em seguida, o Iodo Mordente (que é o corante corante de Gram) foi
colocado na lâmina por mais um minuto e meio. Após o minuto e meio, a lâmina
foi lavada com água deionizada e seca e borrada. O passo seguinte foi usar
etanol 95% para lavar os corantes das bactérias Gram-negativas. Para distinguir
quando parar de usar etanol, a primeira gota de solução não colorida que desliza
da lâmina foi o indicador. Novamente a lâmina foi lavada com água deionizada e
seca e borrifada. Por fim, o corante saffarina foi colocado na lâmina para
contracoloração das bactérias Gramnegativas por um minuto, enxaguado com
água deionizada e seco.

Os métodos também podem ser consultados nas páginas 159-163 do manual do

laboratório.

O microscópio E1 foi utilizado para visualizar o número desconhecido 20 para

determinar se as bactérias eram Gram-positivas ou Gram-negativas e cocos ou
bacilos.

Resultados

Através do processo do experimento, o número desconhecido 20 que estava em

um meio inclinado de ágar nutriente que foi determinado como sendo em forma
de coco (esfera) pareceu ser Gram-negativo.

Discussão

O que determina as bactérias Gram-positivas e Gram-negativas é devido à

diferença na composição da parede celular. Como as paredes celulares das
células Gram-negativas têm um maior teor de lipídios e uma camada mais fina
de peptidoglicano, o álcool usado na etapa de descoloração tornou as células
Gram-negativas incapazes de reter o complexo de iodo azul de metileno. Por
outro lado, as células Gram-positivas possuem um peptidoglicano mais espesso
que aprisiona o complexo metileno azul-iodo, tornando-o menos vulnerável à
descoloração.

A técnica de coloração de Gram foi utilizada no número desconhecido 20. O

desconhecido parecia ser Gram negativo e em forma de coco. Como se trata de
uma incógnita, o valor da literatura é desconhecido. Possibilidades de diferença
na literatura e valor experimental podem ser devido ao excesso de corantes de
iodo primário e mordente sendo eliminados inteiramente pelo etanol 95%, ou que
o corante de iodo mordente não foi deixado por tempo suficiente.

Referência

Bauman, R.W. "Microbiologia com Doenças por Sistema Corporal",2ª ed. Pearson
Educação, Inc. S.F. 2009. pág. 107-109.

Leboffe, M.J., Pierce, B.E. "Microbiology Laboratory Theory and Application",

Breve ed. Moron Editora Co. CO. 2008. p. 159-163.