Emily Pimenta; Luiza Prestes; Patrícia Biló; Priscila Bertotti.

MÉTODO DE COLORAÇÃO DE GRAM

OBJETIVOS

 Aprender a preparar esfregaço de bactérias;

 Aprender a técnica de Coloração de Gram;
 Observar e comparar a estrutura da parede celular das bactérias Gram-
positivas e Gram negativas;

PROCEDIMENTOS

 Flambar a alça no bico de Bunsen.

 Preparar lamina
 Iniciar o preparo dos esfregaços para coloração em método de
coloração de Gram.
 Observar no microscópio óptico, sob imersão culturas de bactérias.
 Identificar a morfologia dos microrganismos

PREPARO DO ESFREGAÇO

 Na chama do bico de Bunsen flambar a agulha bacteriológica

 Abrir a placa com a cultura teste e tocar a colônia escolhida para retirada
da amostra.
 Espalhar de maneira delimitada.
 Com a lamina em mãos, esfregar o material com movimentos de rotação
da alça bacteriológica, para se obter amostra;
 Com ajuda da pinça flambar a lamina para fixar melhor.
 Iniciar colocação.

MÉTODO DE COLORAÇÃO DE GRAM

1) Cobrir toda a lâmina com solução cristal violeta (corante roxo), aguardar
um minuto;
2) Lavar cuidadosamente em água corrente;
3) Cobrir a lâmina com solução de Iugol (mordente) por um minuto;
4) Lavar em água corrente cuidadosamente, para escorrer o lugol;
5) Inclinar a lâmina e gotejar álcool-acetona de maneira corrente.
6) Cobrir com fucsina de gram e aguardar 30 segundos;
7) Lavar a lâmina em agua corrente e secar (sem esfregar);
 8) Colocar uma gota de óleo de imersão sobre a lâmina e observar em
objetiva de imersão (100X).

RESULTADO: bactérias Gram-positivas tem sua coloração roxa escura.

Enquanto as bactérias Gram-negativas: rosa/vermelho

INTERPRETAÇÃO

O mecanismo da coloração de Gram se refere à composição da parede celular.

Nas bactérias Gram-positivas observamos que elas possuem uma espessa
camada de peptideoglicano e ácido teicóico, onde retém o cristal violeta devido
a essa camada espessa no exterior da membrana celular das bactérias
tornando as de cor roxa. Enquanto as Gram-negativas, se tem uma fina
camada de peptideoglicano, onde podemos observar durante o processo que o
tratamento com álcool-acetona extrai os lipídeos, resultando na permeabilidade
aumentada da parede celular das bactérias Gram-negativas, sendo extraído o
complexo violeta-iodo permitindo que as bactérias gram negativas fiquem
descoradas.