Teste de Gram

Experimento cadastrado por RaquelSilva Silva em 18/11/2009 Onde encontrar o material?

em supermercados e farmácias
Classificação ••••• (baseado em 9 avaliações) Quanto custa o material?
entre 10 e 25 reais
Total de exibições: 11458 (até 20/07/2013)
Tempo de apresentação
até 1 hora
Palavras-chave: Biologia, microorganismos, bactérias gram
Dificuldade
positivas, bactérias gram negativas
fácil
Segurança
requer cuidados básicos

Introdução

A coloração de gram é um importante teste, freqüentemente realizado em laboratórios de microbiologia, para identificação de
bactérias. Esse teste foi desenvolvido por Christian Gram, em 1884. Por meio dele, bactérias são coradas diferencialmente, de
acordo com a constituição físico-química de suas paredes celulares. Aprenda a fazer um teste de gram, utilizando materiais
alternativos, facilmente encontrados em farmácias e mercados.

Materiais necessários

• Placa de Petri com colônias bacterianas

• Solução salina ou soro fisiológico
• Lâminas de vidro
• Solução de violeta de genciana
• Tintura de iodo
• Acetona
• Fucsina básica 1% (encontrado em farmácia de manipulação)
• Alça bacteriológica (pode ser substituída por um palito de madeira com um clipe na ponta).
• Prendedor de roupas
• Luvas descartáveis

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Passo 1

Esfregaço

Vista as luvas e coloque uma gota de solução fisiológica em uma lâmina de microscópio. Esterilize a alça bacteriológica em
uma chama, esfrie-a e retire uma pequena colônia de bactérias da Placa de Petri. Espalhe a amostra na lâmina,
homogeneizando com a gota de solução salina. Deixe secar à temperatura ambiente e depois passe a lâmina 4 ou 5 vezes
pela chama de fogo. Esse procedimento irá fixar as bactérias na lâmina, impedindo que elas sejam removidas durante a
coloração.

Gota de solução salina na lâmina Esterilizar a alça Retirar colônia de bactérias

Homogeneizar a colônia na gota Deixar o esfregaço secar à temperatura ambiente Passe a lâmina na chama

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Coloração
Passo 2

Coloque algumas gotas de violeta de genciana sobre a lâmina e deixe em repouso por 1 minuto e meio.

Passo 3

Coloração

Lave a lâmina com água e acrescente tintura de iodo, deixando por mais 1 minuto e meio em repouso.

Passo 4

Coloração

Lave a lâmina, adicione acetona e deixe agir por 20 segundos

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Passo 5

Coloração

Lave novamente e adicione fucsina básica. Deixe agir por 20 segundos antes da última lavagem.

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Passo 6

Resumo do procedimento

Baixe o resumo aqui

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Clique para assistir ao vídeo

http://www.youtube.com/watch?v=zLYIL4rjzEA

Passo 7

Observe as lâminas pelo microscópio óptico. As bactérias possuem tamanho bastante reduzido e, por isso, ao observá-las, é
necessário utilizar a objetiva de imersão (100X). A ampliação total obtida com o microscópio óptico consiste no produto da
ampliação da objetiva pela ampliação da ocular e chega a 1200X.

Para utlizar a objetiva de imersão:

• Coloque uma gota de óleo para imersão sobre a lâmina,
• Posicione o condensador o mais próximo possível da platina
• Gire o revolver para colocar a objetiva de imersão em foco
• Olhando pelo lado, desça o canhão com um parafuso macrométrico, até que a lente frontal da objetiva fique encostada no
óleo.
• Olhando pela ocular, mova o parafuso macrométrico delicadamente, até conseguir focalizar a preparação.
• Mova o parafuso micrométrico até conseguir uma boa focalização

cocos gram positivos Bastonetes gram negativos

Passo 8

O que acontece

Algumas bactérias possuem paredes celulares mais impermeáveis e, por isso, a adição de acetona, após a coloração com
violeta genciana, não remove a coloração. Ao final do teste, elas apresentarão a cor roxa e poderão ser classificadas como
gram positivas. Outras bactérias possuem paredes celulares mais permeáveis, o que possibilita que a acetona remova o
primeiro corante. Após a adição do segundo corante, que é a fucsina básica, elas apresentarão a coloração rosa. Estas últimas
são as gram negativas. Em geral, bactérias gram negativas são mais patogênicas, ou seja, mais capazes de causar doenças

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que as gram positivas.

Baixe o esquema aqui

Passo 9

Para saber mais...

As bactérias gram positivas possuem paredes celulares constituídas de múltiplas camadas de polissacarídeos
(peptideoglicano), que são polímeros de açúcares. Essas camadas conferem rigidez à bactéria e mantêm sua integridade. Já
as bactérias gram negativas possuem a parede celular composta por uma camada de peptidioglicano e três outros
componentes que a envolvem externamente: lipoproteína, membrana externa e lipopolissacarídeo. Devido ao fato de
possuírem apenas uma camada fina de peptideoglicanos, as paredes celulares das bactérias gram negativas são mais frágeis.
O lipopolissacarídeo (LPS) é um dos maiores fatores de patogenicidade dessas bactérias e está associado ao aumento da
reação inflamatória. As bactérias gram positivas, devido às características de suas paredes celulares, têm uma grande
capacidade de se ligarem às membranas das células, o que resulta na ativação celular (resposta das células a agentes
invasores).

Passo 10

Veja também

CARACTERÍSTICAS DA CITOLOGIA BACTERIANA

http://www.forp.usp.br/restauradora/calcio/citolog.htm

Passo 11

Faça o download do experimento

Você pode fazer o download do experimento clicando aqui.

O formato utilizado é o adobe acrobat. Baixe o programa para ler o texto gratuitamente aqui.

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