CENTRO UNIVERSITÁRIO FUNDAÇÃO ASSIS GURGACZ – FAG

ACADÊMICOS
AMANDA DEZAN BORSATTI
CARMEN LÚCIA VIANA GUIMARÃES
EDUARDA DE OLIVEIRA KISULLA
JHENNY DE LIMA NUNES
JHENIFER MAGALHÃES DA ROSA

COLORAÇÃO DE GRAM

CASCAVEL-PR
15 de AGOSTO de 2023
INTRODUÇÃO
O princípio ou fundamento da técnica de Gram se baseia na diferença da composição
química da parede celular das bactérias e na ação do álcool sobre esta parede, e a diferença na
coloração de Gram é dependente da criação de uma barreira de permeabilidade.
Na bactéria Gram-positiva que ocorre após o tratamento com álcool. O álcool desidrata a
espessa camada de peptidoglicano na bactéria Gram-positiva e leva à criação de pequenos
poros que prendem o complexo cristal violeta-iodo dentro da célula, enquanto o tratamento
com álcool na Gram-negativa leva a um aumento da permeabilidade devido à extração de
lipídios da membrana externa.
Apesar de a coloração de Gram ser a técnica mais difundida para a observação bacteriana,
mesmo sendo realizada por profissionais qualificados, ela pode apresentar variações que
devem ser interpretadas com precisão por um observador experiente.

OBJETIVO
Distinguir através da coloração de Gram o que é uma bactéria, segundo a parede celular
Gram positiva ou Gram negativa.

MATERIAL UTILIZADO
1 Tubo de ensaio com E. coli
1 Tubo de ensaio com estafilococos
1 Placa de petri com bactéria isolada
1 Microscópico
3 lamina a fresco
1 Agua destilada
1 Álcool - Acetona
1 Bico de Bulsen
1 Alca de platina
1 Pote de área e álcool
1 Pegador de madeira
1 Suporte para as laminas
1 Cristal Violeta
1 Lugol
1 Fucsina

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METODOLOGIA
Com a bancada desinfectada, passamos a preparar as lâminas que utilizaremos para esta
fazendo a coloração de gram e verificar se são Gram-positivo ou Gram-negativo, com as mãos
higienizada pegamos a placa de petri retiramos a colônia de bactéria isolada com ajuda da alça
de platina e depositamos em uma lâmina. Nas outras duas lâminas utilizaremos culturas
líquidas sendo elas E. coli e estafilococos, com a ajuda da alça de platina fazemos a coleta dos
materiais e depositamos uma amostra em cada lâmina. Após depositar os materiais nas
laminar começaremos a fazer a coloração. Utilizando o cristal violeta, faremos a aplicação
dele nas laminas e aguardaremos dois minutos, após passar os dois minutos fazemos o despejo
do que restou nas lâminas em uma piá, feito isso vamos fazer a cobertura total das laminas
com Lugol e aguarda por um minuto, passados o tempo iremos gotejar álcool-acetona até que
não haja mais desprendimento do corante, lavaremos a lâmina com água destilada, e após
passaremos a cobrir ela com fucsina e aguarda um minuto. Feito este processo avançaremos
fazendo a lavar das lâminas e fazendo a secagem, feito isso passaremos a observar as lâminas
no microscópio para verificar se as amostras são Gram-positivo ou Gram-negativo.

TABELA 01:

AMOSTRA Resultado
Solida Bacilos Gram Positivo
Colônia Isolada
Caldo Bacilos Gram
E. coli Negativo
Caldo Bacilos Gram
estafilococos Negativo

RESULTADOS (FOTOS)

Bacilos Gram Bacilos Gram Bacilos Gram

Negativo Negativo Positivo 3
DISCUSSÃO E CONCLUSÃO

A coloração de Gram se baseia em identificar as diferenças químicas das estruturas da

parede celular das bactérias, as bactérias Gram positivas, por possuírem uma parede celular
mais espessa contendo peptidoglicano não são descoradas ao entrarem em contato com o
álcool-cetona, por conta disso a coloração roxa/azul, já as bactérias Gram negativas possuem
uma baixa quantidade de peptidoglicano por isso são descoradas e contra coradas, tendo a
coloração rosas/vermelhas.
Sendo assim concluímos que após obter os resultados da Coloração de Gram, foi verificado
que 01 amostra deu Gram positivas e 02 amostras deram gram negativa.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Pelczar MJ Jr, Chan ECS, Krieg NR: Microbiology: Concepts and Applications. McGraw-
Hill, 1993. AVIS. B. D. Microbiologia, fi siologia bacteriana. São Paulo: Edart, 1973. v 1.