PREPARO DE ESFREGAÇO E COLORAÇÃO DE GRAM

PRÉ-TESTE

1) O procedimento de coloração de Gram permite que as bactérias retenham a cor dos

corantes, com base nas diferenças das propriedades químicas e físicas de sua estrutura.
De acordo com as cargas positivas e negativas relacionadas às estruturas bacterianas e aos
corantes utilizados na coloração de Gram, marque a alternativa correta.

a) Bactérias Gram-negativas apresentam em sua estrutura elementos com cargas negativas e,

por isso, coram definitivamente com o corante cristal violeta, que apresenta carga positiva, não
havendo descoloração após o uso de álcool;
b) Bactérias Gram-positivas e Gram-negativas apresentam carga positiva e negativa,
respectivamente. Mesmo apresentando cargas diferentes, o cristal violeta penetra ambas as
paredes celulares;
c) A safranina é um corante que apresenta carga positiva; por isso, cora apenas bactérias
Gram-negativas (que apresentam carga negativa).
Resposta certa: B
RESPOSTA CORRETA
O cristal violeta é o corante primário e cora ambas as bactérias, Gram-positivas e
Gram-negativas.

2) As bactérias apresentam diversas estruturas que as diferenciam entre Gram-positivas e

Gram-negativas. Marque a alternativa que mais descreve essas diferenças.

a) As bactérias Gram-positivas apresentam uma espessa camada de parede celular composta

de peptideoglicano (50-90%) coberta por uma fina membrana lipídica externa;
b) Bactérias Gram-positivas e Gram-negativas apresentam parece celular composta de
peptideoglicano em proporções similares;
c) As bactérias Gram-negativas apresentam uma estrutura mais complexa, com uma parede
celular mais fina, porém envolta por uma membrana lipídica externa e um espaço
periplasmático.

Resposta certa: B
RESPOSTA CORRETA
Gram-negativas realmente são mais complexas que Gram-positivas. Gram-positivas não
apresentam membrana lipídica externa, nem parede celular externa, tampouco um espaço
periplasmático separando a parede celular da membrana citoplasmática.

3) As bactérias são microrganismos unicelulares procarióticos. A estrutura da célula é mais

simples do que a de outros organismos, pois não há um núcleo definido, nem a presença de
organelas membranosas. Existem muitos tipos diferentes de bactérias. Uma forma preliminar
de classificá-las é pela morfologia e pelo arranjo formado.
De acordo com seus conhecimentos teóricos de microbiologia, qual alternativa melhor
responde sobre os tipos morfológicos bacterianos existentes, bem como sobre seus arranjos
formados?

a) O formato bacteriano mais comum são os cocos (esferas), que agrupam formando arranjos
de dois cocos (diplococos), quatro cocos (tétrades), oito cocos (sarcina), os cocobacilos (cocos
compridos), os estreptococos (cocos em cadeia) e, por fim, os estafilococos (agrupamento
irregular de cocos);
b) Os bacilos são estruturas longas e delgadas que formam arranjos com dois bacilos
(diplobacilos) ou que se agrupam formando cadeias (estreptobacilos) ou apenas se alinhando
lado a lado (paliçada);
c) As bactérias apresentam diversas morfologias, como os cocos (esferas), os bacilos
(bastonetes), o vibrião (formato de vírgula), os espirilos (bastonetes encurvados), as
espiroquetas (espiraladas), as apendiculadas (com extensões celulares na forma de longos
tubos ou pedúnculos) e as filamentosas (com células curtas e cadeias celulares incomuns).
Resposta certa: B
RESPOSTA CORRETA
Os bacilos são bactérias em forma de “bastão”, apresentando estrutura longa e delgada. Pode
ser uma célula que não se agrupa ou que forma arranjos com um ou mais outros bacilos.

4) A coloração é uma técnica auxiliar largamente utilizada em microscopia. As colorações são

amplamente utilizadas no campo científico para destacar a estrutura das amostras biológicas,
de células, tecidos, etc. O procedimento de coloração mais amplamente utilizado em
microbiologia é a coloração de Gram, descoberta pelo cientista e médico dinamarquês Hans
Christian Joachim Gram, em 1884.
Com base em seus estudos, marque a alternativa que melhor justifica os objetivos e as
funcionalidades da coloração de Gram.

a) A coloração de Gram auxilia na categorização das bactérias em Gram-positivas ou

Gram-negativas e na observação da morfologia bacteriana (coco, bacilo, vibrião, espirilo), bem
como nos arranjos formados por elas;
b) A coloração de Gram é um método mais rápido e simples, podendo ser aplicado diretamente
às amostras enviadas para exames microbiológicos em casos de infecção, por exemplo, líquido
cerebrospinal e líquido sinovial para diagnosticar, imediatamente, a meningite e a artrite
séptica, respectivamente;
c) A coloração de Gram é utilizada para avaliar a qualidade das amostras enviadas aos
laboratórios de microbiologia clínica para cultura. O objetivo é determinar se as amostras são
suscetíveis de fornecer informações clinicamente úteis, se devem ser processadas (cultivadas),
e determinam a espécie bacteriana presente na amostra com precisão.
Resposta certa: A
RESPOSTA CORRETA
Em laboratórios de microbiologia clínica, a coloração de Gram é fundamental para diferenciar
linhagens bacterianas entre Gram-positivas e Gram-negativas e muito utilizada para definir a
morfologia e a forma como as bactérias se agrupam, auxiliando na antibioticoterapia.
5) O cultivo bacteriano pode ser realizado em meio líquido e em meio sólido. Alguns meios são
seletivos e são utilizados para selecionar espécies que serão isoladas. Há também os meios
diferenciais, os quais promovem mudança na coloração das colônias de bactérias,
possibilitando a distinção de vários gêneros e espécies de microrganismos.
Com base em seus conhecimentos, marque a alternativa que melhor define o ágar manitol e o
ágar MacConkey.

a) O ágar manitol é um meio seletivo e diferencial indicado para o isolamento de

Staphylococcus;
b) O ágar MacConkey é um meio seletivo para bactérias Gram-negativas e diferencial para
fermentadores de glicose;
c) O ágar manitol e o ágar MacConkey são meios diferenciais, ou seja, apresentam a finalidade
de diferenciar as bactérias em dois grupos: Gram-positivas e Gram-negativas, respectivamente.
Resposta certa: A
RESPOSTA CORRETA
No ágar manitol é possível selecionar: 1) estafilococos não patogênicos de tamanho pequeno e
rodeados de uma zona vermelha; 2) Staphylococcus aureus, fermentadores do manitol, que
são maiores e rodeados de uma zona amarela; e 3) Staphylococcus epidermidis e Bacillus
subtillis, que irão crescer no ágar formando colônias brancas.

PÓS-TESTE

1) A coloração de Gram diferencia as bactérias pelas propriedades químicas e físicas de suas

paredes celulares. As bactérias Gram-positivas têm uma camada espessa de peptideoglicano
na parede celular que retém a coloração primária (cristal violeta). As bactérias Gram-negativas
têm uma camada mais fina de peptideoglicano que permite que o cristal violeta seja removido
com a adição de etanol.
Com base na sua aprendizagem prática no laboratório virtual, assine a alternativa que
responda corretamente qual etapa deve ser realizada antes da adição do etanol.

a) Após a coloração com cristal violeta, a próxima etapa é a adição de lugol com a função de se
ligar ao cristal violeta, aumentando sua afinidade pela parede celular e formando um complexo
insolúvel (CV-I);
b) A adição do lugol após a primeira coloração é importante para formar um complexo insolúvel
(CV-I) e aprisioná-lo na parede celular de bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. No
entanto, apenas as bactérias Gram-positivas permanecem com a coloração roxa/violeta;
c) Logo após a coloração com cristal violeta, utiliza-se o álcool. O álcool age diluindo a
membrana lipídica externa de bactérias Gram-negativas, permitindo que a coloração
roxa/violeta seja perdida e que apenas as Gram-positivas apresentem essa cor.
Resposta certa: A
RESPOSTA CORRETA
O lugol age como mordente e agente de aprisionamento, para reter o corante na parede celular
bacteriana por meio da formação de um complexo formado entre cristal violeta e iodo.
2) Você foi responsável por analisar, por meio da metodologia de Gram, duas amostras
recebidas no laboratório. Logo após a realização dos procedimentos, você observou as
seguintes imagens:

De acordo com seu conhecimento adquirido por meio do laboratório virtual, marque a
alternativa que representa o seu diagnóstico preliminar desse teste.

a) A primeira imagem representa, com certeza, a presença de S. aureus, uma vez que ela é
Gram-positiva e está corretamente corada em roxo/violeta por meio do cristal violeta;
b) A imagem corada em roxo/violeta representa a presença de bactérias Gram-positivas na
amostra analisada. Por sua vez, a imagem corada em vermelho/rosa representa a presença fiel
da bactéria E. coli, pertencente ao grupo das bactérias Gram-negativas;
c) As amostras recebidas em laboratório passaram por quatro etapas – coloração primária,
adição de lugol, descoloração com álcool e contracoloração – até se chegar à obtenção dessas
imagens. A cor roxa/violeta representa a presença de bactérias Gram-positivas na amostra,
enquanto a cor vermelha/rosa representa a presença de bactérias Gram-negativas.
Resposta certa: C
RESPOSTA CORRETA
Após as quatro etapas da coloração de Gram, o diagnóstico preliminar obtido é de que a cor
roxa/violeta representa o grupo de bactérias Gram-positivas, e a cor vermelha/rosa,
Gram-negativas.

3) Antes de utilizar os reagentes para a metodologia de Gram com a finalidade de corar as

bactérias, há a necessidade de primeiro fixar a amostra por meio do calor. Esse procedimento é
realizado passando a lâmina por cima da chama azul em um bico de Bunsen algumas vezes.
No laboratório virtual você realizou esse procedimento. Mas, afinal, por que você faz isso?

a) Para que ocorra alteração na morfologia bacteriana;

b) Para que a bactéria reaja à coloração com mais facilidade;
c) Para que as bactérias não sejam eliminadas durante as etapas de coloração.

Resposta certa: C
RESPOSTA CORRETA
Caso as bactérias não sejam fixadas por meio do esfregaço em lâmina, quando ocorrer a
adição do corante cristal violeta, do lugol, do álcool e da safranina e retirada dos excessos, não
haverá mais amostras na lâmina.

4) A coloração de Gram apresenta diversas etapas, que se iniciam com o esfregaço. Após a
amostra estar fixada na lâmina, iniciam-se as etapas de coloração primária, adição de lugol,
descoloração e contracoloração. Todo o procedimento é finalizado com a visualização da
lâmina com o auxílio de um microscópio óptico.
No experimento realizado no laboratório virtual, você percorreu todas as etapas. Levando em
consideração o seu conhecimento prático e teórico adquirido, qual etapa é crucial na coloração
de Gram?

a) O esfregaço bacteriano;
b) A adição do lugol;
c) A coloração primária com cristal violeta.
Resposta certa: A
RESPOSTA CORRETA
O esfregaço é a primeira etapa; se não for realizado de forma correta, não terá como realizar
as demais etapas e obter um diagnóstico preliminar correto.

5) Cada reagente utilizado na coloração de Gram apresenta uma função definida. O cristal
violeta age como um corante primário, corando todas as bactérias. O iodo (presente no lugol)
age formando um complexo com o cristal violeta, prendendo-o no interior das bactérias. O
álcool age diluindo a membrana lipídica de bactérias Gram-negativas, liberando o cristal violeta
para fora delas. A contracoloração com safranina age corando as bactérias Gram-negativas de
vermelho/rosa.
Após a realização desse procedimento experimental no laboratório virtual, qual a função do
mordente na reação de Gram?

a) Fixar o corante primário (cristal violeta) na parede celular de bactérias Gram-positivas e

Gram-negativas;b) Fixar o contracorante safranina nas bactérias Gram-negativas;c) O agente
mordente é o álcool, o qual promove a remoção do corante primário de bactérias
Gram-negativas pela diluição da membrana lipídica externa. Por sua vez, não promove a
remoção do corante primário de bactérias Gram-positivas.
Resposta certa: A
RESPOSTA CORRETA
O lugol age como um agente mordente e aprisionador. Isso ocorre com a formação de um
complexo insolúvel entre iodo e cristal violeta, ficando retido na parede celular das bactérias.