MICROBIOLOGIA E BIOQUÍMICA APLICADAS (SHS 0312)

CRESCIMENTO
MICROBIANO

Caroline F. Granatto
Danilo H. Donato Rocha
Francisco Rafael Sousa Freitas
Henrique de Souza Dornelles
Marina Mauro Gomes

Profa Dra Maria Bernadete Amâncio Varesche

Apoio técnico: Juliana Gonçalves dos Santos Custódio
 CRESCIMENTO MICROBIANO

• Caracterizado pelo aumento do número de células de uma população;

• A multiplicação celular é consequência do aumento de componentes

celulares e da duplicação do material genético;

• O ciclo de crescimento populacional é bem definido e descrito pelas fases:

lag, exponencial, estacionária e de declínio.
 Fases do crescimento microbiano

bactérias viáveis/ mL
Log do número de

Tempo
1 Fase lag : elevada atividade metabólica, sem multiplicação celular. Sua duração
depende das condições do meio.

2 Fase log (exponencial): rápida divisão celular, crescimento em progressão

geométrica. É uma reata cuja inclinação depende da velocidade de divisão das
bactérias.
3 Fase estacionária : carência de nutrientes; o número de mortes iguala-se ao número
de células produzidas, resultando em situação de equilíbrio na população.

4 Fase de morte ou declínio : as bactérias passam a morrer mais rapidamente do que a

população de novas células.
 REPRODUÇÃO POR FISSÃO BINÁRIA

Parede celular Membrana plasmática

1 A célula se alonga e o
DNA é replicado
DNA (nucleóide)
A parede celular e a
2 membrana plasmática
iniciam a constrição

Paredes intermediárias se
3 formam, separando
completamente as duas
cópias de DNA.

4 As células se separam

Duplicação a partir de 1 célula = 1 geração

 TEMPO DE GERAÇÃO

Geração = formação de 2 células a partir de uma célula-mãe

Tempo de geração = tempo necessário para a duplicação celular;

Divisão celular com tempo de geração de 60 minutos.

 TEMPO DE GERAÇÃO
O número de células geradas é representado matematicamente em potência
de 2, sendo o expoente o número de gerações:

2n = número de células

Representação matemática
Número de células
potência de 2
20 1
21 2
22 4
23 8
24 16
 O tempo de geração depende de fatores genéticos,
nutricionais e ambientais

• Varia de acordo com a espécie;

• Depende da disponibilidade de nutrientes do meio;

• Varia de acordo com a temperatura e pH;

Espécie Tempo de geração

Escherichia coli 20 min
Bacilus subtilis 28 min
Rhodobacter spheaeroides 140 min
Sulfolobus acidicaldarius 4 horas
Thermoleophilum álbum 6 horas
Thermofilum pendens 10 horas
Mycobacterium tuberculosis 13 horas e 40 min
 Velocidade de crescimento específico
A velocidade de crescimento específico relaciona o número de células geradas com o
tempo

Dados de crescimento populacional a cada 30 minutos.

µm= velocidade específica de crescimento (h -1);

Tg = tempo de geração (h)
 MEDIDA DO CRESCIMENTO BACTERIANO

MÉTODOS MÉTODOS
DIRETOS INDIRETOS

 Contagem em placa  Método do Número mais Provável (MNP)

 Contagem direta ao microscópio  Análise molecular;
 Determinação da massa seca
 Densidade óptica

Contagem em placa após diluição seriada Contagem direta ao microscópio

 DETERMINAÇÃO DA MASSA SECA (mg/L)

Sólidos Suspensos Sólidos Suspensos Sólidos Suspensos Fixos

Totais (SST) Voláteis (SSV) (SSF)
Matéria orgânica Matéria inorgânica
(biomassa microbiana)

Determinação de SST
Estufa a
Pesagem
105°C
(M2)
50 ml (24 horas)
(V)
Filtração a vácuo com membrana
(0,45-1,5 µm) previamente Determinação de SSV
calcinada (550°C) e pesada (M1)
( 𝑀 2 − 𝑀 3 ) .1000
𝑆𝑆𝑉 (𝑚𝑔/ 𝐿)=
𝑉

Membrana em forno mufla 550°C

(15 minutos) e pesagem (M3)
 ANÁLISE ESPECTOFOTOMÉTRICA

Espectofotômetro

• Mede o crescimento bacteriano pela determinação do grau de

transmissão de luz através da cultura (absorbância);

• Amostras de culturas contidas em tubos especiais opticamente

transparentes são coladas dentro espectrofotômetro.
 Espectro: promove a passagem de luz por
uma suspensão celular detectando a quantidade de
luz emergente (incidente), não dispersa

Fonte Luz Absorbância Fonte Luz Absorbância

Clara Direta Clara Direta

Baixo Alto Baixo Alto

Fotoreceptor Fotoreceptor

Amostra Amostra
1 x107 células/ml 1 x109 células/ml
CURVAS DE CRESCIMENTO MICROBIANO A PARTIR DA
DENSIDADE ÓPTICA
A) B)

A) Curva de crescimento típica obtida em densidade óptica (DO) de dois

organismos A e B em função do tempo;
B) Relação entre o número de células (massa seca) e medidas de turbidez.
 ATIVIDADE PRÁTICA: DILUIÇÃO SERIADA E ANÁLISE DE
DENSIDADE ÓPTICA
MATERIAL: 1) Suspensão bacteriana;
2) Tubos de ensaio com 9 ml de solução salina esterilizada;
3) Alça de transferência;

PROCEDIMENTO
• Marcar os tubos com 9 ml de solução (10-1; 10-2; 10-3; 10-4; 10-5 e 10-6);
• Homogeneizar o tubo de cultura e, com pipeta estéril, transferir 1 mL para o tubo 10 -1;
• Homogeneizar o tubo 10-1,transferindo 1 ml para o tubo 10-2 e assim sucessivamente.

OD540 0 0,18 0,45 0,68

Densidade óptica para suspensão de E. coli
ATIVIDADE PRÁTICA : DENSIDADE ÓPTICA

Fator de OD (mm) Massa seca

diluição (g/L)
10-1 1,0 28,5

10-2 0,8 21,7

10-3 0,6 16,5

10-4 0,4 12,0

10-5 0,2 7,5

10-6 0,1 3,9

 Curva de crescimento microbiano

Densidade óptica (600nm)

• O crescimento específico (μ) é obtido
por dados experimentais:

densidade óptica (OD600) em função

do tempo.

Tempo (h)

30

• A curva de crescimento microbiano 25

é construída pela relação entre: Massa seca (g.L-1) 20
15

biomassa produzida (densidade óptica e 10

massa seca) e o tempo de incubação 5
0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2
Densidade óptica (600 nm)
 DENSIDADE ÓPTICA
Para tanto, é feita a linearização da curva da fase exponencial, calculando-se
o logaritmo neperiano (ln) dos valores de OD e projetando-se os resultados
em função do tempo de cultivo;
Assim, pode-se obter a equação da reta :

y = 0,3497 x – 1,9585 e R2= 0,9882

A partir da equação da reta calcula-se :

µm = 0,3497 h-1

Tg = ln2/µm = 0,693/ µm

Tg = 1,98 h